实验二影响酶促反应因素讲义

实验二温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响及特异性一、实验目的1．通过实验，观察温度、pH值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响。2．能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析。二、实验原理•利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pH、激动剂和抑制剂对酶的活性影响。淀粉糊精麦芽糖和葡萄糖蓝色碘紫色→红色→无色无色碘碘＋＋＋↓↓↓二、实验原理在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适温度在37℃左右。温度过高，酶变性失活，酶促反应速度下降，甚至停止。每种酶都有最适的pH值，在最适pH值时，酶的活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pH均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适pH值为6.8。氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用。三、实验材料1.1%淀粉溶液取可溶性淀粉1g,加5ml蒸馏水,调成糊状,再加80ml蒸馏水,加热并不断搅拌,使其充分溶解,放冷,最后用蒸馏水稀释至100ml。2.pH3.0缓冲液取0.2mmol/LNa2HPO4溶液205ml，0.1mol/L柠檬酸溶液795ml,混合即成.3.pH6.8缓冲液取0.2mmol/LNa2HPO4溶液772ml，0.1mol/L柠檬酸溶液228ml,混合即成.4.pH8.0缓冲液取0.2mmol/LNa2HPO4溶液972ml，0.1mol/L柠檬酸溶液28ml混合即成.5.0.9%NaCl溶液6.1%CuSO4溶液7.碘液9.试管架11.试管夹12.滴管13.白瓷板14.恒温水浴箱15.电炉16.烧杯【注意事项】1.注意实验器材的干净，避免杂质影响反应结果2.各管反应时间应严格控制，保证一致。四、实验方法•稀释唾液制备用水漱口，含蒸馏水咀嚼2分钟后，把唾液吐进烧杯中备用。（注：唾液淀粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应太快，则减少稀释唾液的用量）•煮沸唾液的制备取上述唾液约5ml，放入沸水中煮沸5分钟，取出备用。（一）温度对酶促反应速度的影响管号123缓冲液（pH6.8）20滴20滴20滴1%淀粉溶液10滴10滴10滴把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温预温温度0℃37℃37℃预温5分钟后取出，继续向各管加入相应唾液稀释唾液10滴10滴—煮沸唾液——10滴把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴10分钟，加碘2滴水浴温度0℃37℃37℃结果与分析•取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化(切记勿摇动)。摇匀再观察。（二）pH对酶促反应速度的影响管号1231%淀粉溶液10滴10滴10滴pH5.0缓冲液10滴——pH6.8缓冲液10滴—pH8.0缓冲液——10滴稀释唾液5滴5滴5滴把三支管摇匀，然后放至37℃水浴10分钟，加碘2滴摇匀结果与分析•将各管混匀，放进37℃水浴箱中保温。•取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化。（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响管号12341%淀粉溶液10滴10滴10滴10滴pH6.8缓冲液10滴10滴10滴10滴蒸馏水2滴———氯化钠溶液—2滴——CuSO4溶液——2滴—Na2SO4溶液———2滴稀释唾液5滴5滴5滴5滴把三支管摇匀，然后放至37℃水浴10分钟，加碘2滴摇匀结果与分析•将各管摇匀，放进37℃水浴箱中保温。取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀，观察各管颜色变化。激活剂与抑制剂激活剂与抑制剂五、思考题1.什么是酶的最适温度？2.什么是酶的最适pH?3.激活剂与抑制剂对酶活性影响实验中设置第四管的作用是什么？4.什么是酶的特异性？（四）酶的专一性对酶促反应的影响。加入物1号管2号管3号管PH值6.8缓冲液20滴20滴20滴1%的淀粉10滴10滴——1%的蔗糖————10滴煮沸唾液——5滴——稀释唾液5滴——5滴结果与分析（2）混匀，37℃水浴10min，分别加入班氏试剂20滴。（3）各管摇匀置于沸水煮沸8-10min，观察结果并记录。酶的专一性