2013-HBV检测

LABORATORYDIAGONOSIS乙型肝炎标志物检测马越云SerologicExaminationofHepatitisB教学内容概述（10min）乙肝五项标志物（30min）其它标志物（15min）临床讨论（15min）HepatitisB教学目的主要标志物的临床意义检测结果的分析方法HepatitisB危害和防护措施正确的医学观念一、乙型肝炎病毒概述HepatitisB病毒类型甲型肝炎病毒(HAV)乙型肝炎病毒(HBV)丙型肝炎病毒(HCV)丁型肝炎病毒(HDV)戊型肝炎病毒(HEV)其它肝炎病毒基因组类型ssRNAdsDNAssRNAssRNAssRNA传播途径粪-口途径肠道外途径肠道外途径肠道外途径粪-口途径HepatitisHBsAgPrevalence8%-High2-8%-Intermediate2%-LowCentersforDiseaseControl.乙型肝炎的世界发病情况HepatitisB我国乙肝患者的基本情况HepatitisB五大关键发现乙肝患者的生活受到全方位负面影响乙肝患者缺乏乙肝的疾病知识乙肝患者对治疗目标缺乏正确的认识乙肝患者的治疗药物、方法欠规范乙肝患者缺乏对疾病知识的信息来源HepatitisBHepatitisBD.SDane.Lancet1970HBV的基本性质HepatitisBPasekM.Nature1979HepatitisBHBsAg=surface(coat)proteinDNADNA聚合酶PolymeraseHBcAg=innercoreproteinHBeAg=secretedproteineHBV感染过程中抗原、抗体的产生HepatitisBPre-CoreHBXHBVHBeAgHBsAgSmallHBsMediumHBsLargeHBSHBcAgPolyRNARNADNA-DNA-HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeHBcAgAnti-HBcPre-S1Anti-Pre-S1Pre-S2Anti-Pre-S2DNAHBV的抗原、抗体HepatitisB什么是乙型肝炎两对半?HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBcHepatitisBHBsAgHBeAg??????抗-HBs抗-HBe抗-HBcIgG临床意义HepatitisB什么是大三阳、小三阳？+--++--+++0481216202428323652100w症状HBeAg抗-HBe抗-HBsHBsAg抗-HBcIgM抗-HBcIgG乙型肝炎五项标志物HepatitisB三、乙型肝炎主要检测标志物HepatitisB酶联免疫吸附分析(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测方法HepatitisB放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)化学发光免疫分析(Chemiluminescenceassay，CLIA)(一)HBsAg的检测1.参考值ELISA阴性HepatitisB0481216202428323652100w症状HBeAg抗-HBe抗-HBsHBsAg抗-HBcIgM抗-HBcIgGHepatitisB2.临床意义BaruchBlumberg(1)感染HBV的标志物(2)若6个月不消失，则表明转为慢性(3)见于急、慢性肝炎和无症状携带者(4)筛选献血员HBsAg浓度在5ng/mL以下的有189例，占总数的2.34%，占HBsAg阳性人群的23.16%低浓度HBsAg不容忽视1ng/mL以下者：占总数的1.04%占HBsAg阳性人群的10.3%陈瑜等，中华检验医学杂志，2001，第3期楼滨等，中华临床感染病杂志，2009，第3期0.5ng/mL以下者占HBsAg阳性人群的约5%低水平的HBsAg检出率存在差异ELISASampleCOI1（阴性）COI≥1（阳性）n%n%0.8～1.0442863.641636.371.0～1.5512549.022650.981.5～3.062914.525385.483.0～6.03226.253093.75合计1896433.8612566.14HBsAgELISA法弱阳性标本ECLIA结果低浓度HBsAg的准确检测对于临床确诊和流行病学监控具有重要意义血清HBsAg是诊断HBV感染的直接证据所谓“HBsAg阴性”的HBV感染者中，有相当一部分为血清HBsAg呈低水平而被漏检的假阴性对于输血安全、院感控制具有重要意义对于流行病学、病原学研究具有重要意义高灵敏的检测对临床至关重要2010年版慢性乙型肝炎防治指南：对于因其他疾病而接受化疗、免疫抑制剂治疗的患者，应常规筛查HBsAg；若为阳性，即使HBVDNA阴性和ALT正常，也应在治疗前1周开始服用拉米夫定或其他核苷(酸)类似物对HBsAg阴性、抗HBc阳性患者，在给予长期或大剂量免疫抑制剂或细胞毒药物（特别是针对B或T淋巴细胞单克隆抗体）治疗时，应密切监测HBVDNA和HBsAg，若出现阳转则应及时加用抗病毒治疗1.参考值ELISA阴性(二)抗-HBs检测HepatitisB0481216202428323652100w症状HBeAg抗-HBe抗-HBsHBsAg抗-HBcIgM抗-HBcIgG2.临床意义(1)感染过HBV、康复和获免疫力的标志HepatitisB(2)中和抗体，可维持数年至10余年(3)接种疫苗效果观察WilliamRutterHepatitisB抗-HBs与乙肝疫苗PediatrInfectDisJ23(7):650-655,2004我国人群乙肝标志物检测中国学校卫生.2007;27(7)700.0010.0020.0030.0040.0050.00612•Malaysia:3%inHBVCarriers•Singapore:21%HBVCarriers•Japan:A26%InHBVcarriers•USA:24%•Netherland:36%HBsAg/Anti-HBs同时出现35607例32022例0.022%0.55%ELISAECLHBsAg/Anti-HBs同时出现HBsAg/Anti-HBs同时出现两种HBV亚型感染，一种亚型已经产生抗体，另外一种还没有存在HBV的突变，常见于：1.新生儿母婴感染2.肝移植的患者疫苗接种，有正常的HBsAb应答；同时感染免疫逃避变异株1.参考值ELISA阴性(三)HBeAg检测HepatitisB0481216202428323652100w症状HBeAg抗-HBe抗-HBsHBsAg抗-HBcIgM抗-HBcIgGHBeAg与HBV感染状况V.Rafalski.4thEuropeanCongressofChemotherapyandInfection2002;May4HepatitisB2.临床意义(1)HBV复制活跃和传染性强的标志HepatitisB(2)疗效观察的指标(3)持续阳性表明患者易转为慢性乙肝HBV与肝细胞性肝癌(HCC)YangHI,etal.NEnglJMed.2002;347:168-174.121086420Percentcumulativeincidence012345678910YearHBsAg+,HBeAg+HBsAg+,HBeAg-HBsAg-,HBeAg-HepatitisBHBeAg阴性的乙型肝炎及其HBV一般出现在感染后期HuiCK.CurrTreatOptionsGastroenterol.2007Dec;10(6):474-82.HepatitisB表现为进程性肝脏损害预后很差编码HBeAg的基因preC启动子区发生突变1.参考值ELISA阴性(四)抗-HBe检测HepatitisB0481216202428323652100w症状HBeAg抗-HBe抗-HBsHBsAg抗-HBcIgM抗-HBcIgGHBe/抗-HBe血清转换(seroconversion)ShivKumarSarin,etal.TheAmericanJournalofGastroenterology(2005)100,2463–2471HepatitisB2.临床意义(1)病毒正被清除、复制减少、传染性降低HepatitisB(3)持续阳性表明患者转化为慢性乙肝(2)不是保护性抗体抗-HBe与肝炎的转归48%68.3%80%HepatitisB1.参考值ELISA阴性(五)抗-HBcIgM检测HepatitisB0481216202428323652100w症状HBeAg抗-HBe抗-HBsHBsAg抗-HBcIgM抗-HBcIgG2.临床意义(1)感染早期诊断指标HepatitisB(2)HBV复制活跃、具有强传染性(3)多见于急性肝炎(六)抗-HBcIgG检测1.参考值ELISA阴性HepatitisB0481216202428323652100w症状HBeAg抗-HBe抗-HBsHBsAg抗-HBcIgM抗-HBcIgG2.临床意义(1)感染早期的标志物HepatitisB(2)不是中和抗体(3)可维持多年至终生感染过程空白期单项抗-HBc阳性的临床意义既往感染HepatitisB低水平病毒携带被动获得0481216202428323652100w症状HBeAg抗-HBe抗-HBsHBsAg抗-HBcIgM抗-HBcIgG乙型肝炎自然病程的相关指标SerologyHBeAgAnti-HBeALTlevelHBVDNAlevelHBsAgAnti-HBsAnti-HBcHepatitisBImmunetolerant(phaseI)ImmuneActive(phaseII)Non-Replicative(phaseIII)ChronicityStageResolved010203040506070Years慢性乙型肝炎的分期与治疗ImmuneTolerantImmuneActiveNon-replicativeResolveRxHepatitisBRx三、乙型肝炎其它标志物的检测HepatitisB(一)pre-S和抗-preS检测1.pre-S蛋白HepatitisBHBV外膜蛋白成份Pre-S1肝细胞膜受体Pre-S2聚合人血清白蛋白受体2.临床意义Pre-S1(1)早期感染的指标(2)病毒复制活跃标志HepatitisB抗Pre-S1中和抗体预后良好的指标2.临床意义Pre-S2病毒复制和较强传染性的标志HepatitisB抗-Pre-S2(1)中和抗体(2)病毒清除的标志(二)HBVDNA检测1.方法聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR)荧光定量PCR（QuantitativeFluorescentPCR）斑点杂交（Dot-blot）HepatitisB2.参考值103Copies/mlHepatitisB荧光定量PCR与乙型肝炎HepatitisBHBsAg抗-HBcIgG抗-HBcIgMHBeAg抗-HBe症状抗-HBs0481216202428323652100wDNA3.临床意义HepatitisB(1)最可靠的诊断指标(2)用于预后判断(3)用于药物疗效观察1.000.960.920.880.840.800123456789101112SurvivalDistributionFunctionSurvivalTime(Years)HBVDNALow1.6x103-105cp/mLHBVDNA(-)HBVDNAHigh105cp/mLChenGetal.55thAASLD,2004.Abstract1362HBV含量与在慢性乙型肝炎病人的存活率HepatitisBHBV含量与HCC病人的存活率ChenGetal.55thAASLD,2004.Abstract13621.000.960.92