HIV实验室SOP文档

韩城市中医院HIV初筛实验室SOP文件一、样本接收登记、处理程序1.样本的接收1.本院的样品接收2.来自本院门诊和病房的标本由门诊和病房的护士采集，先由检验科标本验收者收取。规定时间内，由HIV筛查实验室进行登记接收。3.检查样品的状况，记录有无溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。对于不合格标本（如溶血、乳糜血等），及时通知护士重新采集。4.院外的样本接收5.含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。6.核对标本与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如有发现溢漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。7.检查样品的状况，记录有无严重溶血，微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况，如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃，并要将样品情况通知送样人。8.打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩，防护镜，以防皮肤或黏膜污染。9.因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不能用于荧光方法测试。10.接收样品是应填写HIV筛查试验室标本接收登记。2.样本的登记记录HIV筛查试验室样本登记表，实验室收到标本后应及时进行有关参数登记，包括受检者的姓名、性别、人群类别、试管编号、检验结果（初筛）、送检日期、报告日期和备注。3.样本的处理标本在室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。3.样本的保存用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1周内）进行检测的样品可存放于2-8℃。5.样品的运送实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。1.应采用WHO提出的三级包装系统1.1第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者的姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。1.2第二层容器：要求耐受性好，防渗漏、容纳并保护好第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。1.3第三层容器：放在一个运输用外层包装袋内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。2血清和血浆样品应在2-8℃条件下由专人运送。二、检测方法和步骤1.检验原理本品采用基因工程抗原gp41和gp36包被酶联板，用基因工程HIV-1和HIV-2嵌合抗原ENV18标记过氧化物酶，与其它试剂组成试剂合，用双原夹心法检测人血清或血浆中的人类免疫缺陷病毒抗体，用于献血员及高危人群中人类免疫缺陷病毒的筛查。2.检验条件1.操作人员对本实验应心中有数，严格执行操作规程。2.洗板机，酶标仪，加样器必须定期校正。试剂按规定保存。3.标本采集1.门诊病人由检验科人员无菌抽取静脉血2ml分离血清备用。2.住院病人由护士采血送检验科。3.要避免溶血。4.设备和试剂1.设备SK2000A型酶标洗板机，SK202酶标仪。2.试剂抗HIV诊断试剂盒(酶联免疫法)。5.操作方法1.实验准备从冷环境中取出试剂盒，室温平衡半小时，同时将浓缩洗液用蒸馏水作1:20稀释备用。2.编号每板应设空白对照1孔，阳性对照2孔，阴性对照2孔，质控1孔。3.加样每孔加入50ul样品稀释液，并分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳对照、质控品50ul。空白孔内只加稀释液。4.温育用封板膜封板后置37℃温育30分钟。5.加酶除空白对照孔外，每孔加100ul酶标记物，轻轻震动混匀，用封板膜将板孔封好，置37℃温育30分钟。6.洗板小心将封板膜揭掉，选择6次的程序洗板，最后排干。7.显色每孔先加显色剂A再加显色剂B各50ul，轻轻混匀后置37℃避光显色15分钟。8.测定每孔加终止液50ul，轻轻混匀，用酶标仪波长450nm及620nm测定各孔OD值。9.结果判定i.临界值=0.10+N（阴性对照的平均值）。ii.若阴性对照A值小于0.02时，按0.02计算。iii.若阳性对照A值小于0.5，阴性对照A值大于0.1，则实验不成功，全部实验重做。iv.阳性判定：样品A值≥临界值者为HIV抗体阳性。v.阴性判定：样品A值临界值者为HIV抗体阳性。vi.阳性者须重新取样双孔复试，复试阳性者应按全国HIV管理规范，送HIV确认试验室进行确认。三、试剂的使用和保存1.为了更好地管理检验科试剂，由主管对检验科试剂申购、品牌、质量、价格、使用及管理情况进行督查。2.每周上报周计划，各组人员根据各岗情况，认真、详细填写计划表，务必注明详细的名称、规格、数量及品牌。3.检验科试剂必须由主管审核，并负责报物流中心采购，品牌不得随意更改。杜绝浪费和积压。4.所用的试剂必须符合质量要求，必须有三证。不得使用过期、劣质试剂。5.供应商所送的试剂由总库清点后才能接收，特殊试剂由检验科主管清点后才能在货单上签字，有出入者必须向科主任或物流中心主任报告，再将货单交物流中心统一结账。6.领用时应检查物品质量和试剂品名、厂家、人份、批号、过期时间及外包装有无渗漏等，若有问题，应及时向总库反映。7.冰箱内不能贮存乙醚、异戊烷或类似的易燃、可燃性液体。四、仪器的使用维护和校准1.离心机1.机壳、离心腔和离心筒使用后用浸有2000mg/L含氯消毒液的软布擦拭，自然干燥20分钟以上。2.应随时检查塑料隔架和金属离心筒以及置盖是否有血迹，以便及时消毒。3.每隔一个月须将旋转盘拆下，将其中心孔和转盘擦净后涂抹少量的润滑油脂，以保证旋转盘与回转轴和离心筒良好装配。4.每年2次，由本单位设备科对该类仪器进行定期检修校准。水浴箱。每日使用完毕，应保持箱内外清洁。每日应检查电源线，插线板是否安全。电源线不可缠绕在金属物上，不可放置在高或湿的地方，防止电线老化以至漏电。常注意水箱内水位。如发现电阻器部分发生故障，先切断电源线后找有关人员修理。移液器。每日工作完毕，用2000mg/L含氯消毒液或75%乙醇擦拭仪器表面，保持清洁。不使用时，竖立放置在支架上，不能有灰尘。每年由本科设备管理员校准两次。电冰箱。电冰箱必须安有专用电源闸盒，保险丝不大于3A。电源电压必须在220伏±10%范围内方可使用，地线必须有效地接地。2.2电冰箱要垂直放置并远离热源，严禁强行启动。2.3启动电机间隔必须在1分钟以上，严禁强行启动。2.4调整温度控制器时，应有高温逐渐（分次）往低温处调整，直调至所需温度（冷藏为2-8℃，冷冻为-20℃）为止。2.5遇停电时，将电源闸盒拉开，待来电正常后再合电源闸盒。2.6箱内严禁放入易挥发、易燃的气体，以免发生火灾。箱内如要放入酸碱性物质，需要妥善包装好，以免溢出腐蚀内部机件。2.7取放物品时，开门时间要短，次数要少。贮入物品温度不得高于环境温度。2.8挥发器结冰超过1厘米以上，要及时除霜，并把接水盘的积水清除干净。2.9电冰箱搬动时不得倾斜。2.10如发现电冰箱使用不正常，应请专业技术人员检查修理。2.11每天实验室开始之前，认真记录冰箱温度。洗板机。定期清洗仪器外壳以保持良好的外观，特别重要的是保持酶标托盘滑道的清洁干燥。用柔软的布用中性清洗液浸湿后擦洗。泼在滑道上的液体后迅速擦去。3.2每次使用前检查洗析机管道是否通畅，是否有漏液现象。3.3每次使用后必须用蒸馏水进行管道冲洗，防止洗液凝聚堵塞管道。3.4每年要根据仪器内具有的校准程序对仪器进行校验，根据使用情况更换主要设备。酶标仪。清洁仪器保持仪器工作环境的清洁，仪器表面的清洁，可以用中性清洁剂和湿布擦拭。3.2每年要根据仪器内具有的校准程序对仪器进行校验，根据使用情况更换设备。生物安全柜1.每日维护1）用70%的酒精（其他杀菌剂视用户使用的材料而定）彻底对安全柜内部工作区域表面、侧壁、后壁、窗户进行表面净化。不要用含有氯的杀菌剂，因为它可能对安全柜的不锈钢结构造成损坏。也要对紫外灯和电源输出口表面进行清洁。当清洁安全柜内部区域时，操作人员除了手放以外，身体的其他任何部位不能进入安全柜2）检查警报并检测基本气流2．每周维护1）用75%的酒精（其他杀菌剂视使用的材料而定）彻底对排水槽进行清洗2）检查俘获纸孔处的残留物质3．每月维护1）用湿布对安全柜外部表面进行擦拭，尤其是安全柜的前面和上部，把堆积的灰尘打扫干净。2）检查所有的维护配件的合理使用情况。3）上述每日工作中的条目4．每季维护1）检查安全柜的任何物理异常或故障。检查荧光显像管确保它们工作正常2）当不锈钢上表面有难以去除的斑点时，可以使用MEK（methyl-ethyl-ketone）。使用WEK后，快速用清水和液体清洁剂冲洗不锈钢板，并且用聚亚安酯布或者海绵进行擦拭。定期清洁不锈钢表面会使之保持表面的光滑美观。5．每年维护1）具备资格的认证技术人员对安全柜进行性能认证。2）更换紫外灯3）上述的每季维护五、质量控制要求及程序在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。2.1内部对照质控血清指盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。2.2外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清，也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2-3倍为宜。本实验室的外部对照质控物自省临检中心购买。2.2.1外部对照质控血清的保存：外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放2-8℃，供一周内使用。2.2.2外部对照质控血清的使用：每一次实验室必须使用外部对照质控血清以便监控实验室的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。2.2.3外部对照质控物的质量要求：管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异CV＜20%，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA反应的防腐剂。1.质控图的建立及应用本室采用“即刻法”质控图，用于抗-HIV质量控制。“即刻法”：质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即可对第三次检验结果进行质控，具体计算方法如下：3.1将质控血清的测定值从小到大排列：X1，X2，X3……Xn（X1为最小值，Xn为最大值）。3.2计算X和S。3.3计算SI上限值与SI下限值。3.4将SI上限SI下限与SI值表（质控表附后）中的数字比较。3.5质控表的分析。3.5.1当SI上限和SI下限＜n2s时表示处于控制范围内，可以继续测定。继续重复以上各项计算。3.5.2当SI上限和SI下限有一值处于n2s-n3s之间时说明该值在2s-3s范围，处于“告警”状态。3.5.3当SI上限和SI下限有一值＞n3s值时说明该值已在3s范围外，属“失控”。数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的这次数值，其它测定值仍可继续使用。2.失控处理4.1本批实验无效，应立即重做。4.2上报。4.3找出问题原因，找出解除故障的方法，并消除失控的原因。3.绘制和分析质控图的注意事项5.1要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO比值绘制质控图。对同一批质控物连续测定得到20个数据，求均值和标准差，超出2s或3s的数据不应删除。5.2由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。5.3建立长期和稳定地使用一种质量良好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上标明使用日期。5.4发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。5.5使用批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。变异系数（CV）小于20%，表示外部对照处于稳定状态。六、结果解释与报告2.1初筛试验结果的报告HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告：对初筛试验呈阳性反应者不能出具阳性