HE4 崔恒 北京大学人民医院

新型卵巢癌标记物HE4的研究进展崔恒北京大学人民医院妇科肿瘤中心世界范围统计资料癌新发死亡宫颈470,000230,000卵巢190,000114,000内膜188,00045,000美国2008卵巢癌的现状一个难题：无成熟的早期诊断方法；二个70%：确诊时约70%已属晚期；治疗后即使是已达到临床完全缓解的病人仍有70%最终将复发；三个进展：手术病理分期、肿瘤细胞减灭术、紫杉醇+卡铂化疗方案四个焦点：保留生育/生理功能、早期的辅助治疗、晚期的治疗、复发的诊断和治疗卵巢癌的诊断策略--早期诊断卵巢癌的早期诊断一直是卵巢癌研究中最具挑战性的课题肿瘤诊断的三大支柱图像诊断：B超CT、MRIPET/CT血液与体液检测：肿瘤标记物细胞学与组织学诊断现阶段卵巢癌的诊断目前常用的诊断方法包括：1）妇科三合诊；2）阴式彩色B超；3）血清CA125的检测；4）计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）、正电子发射断层扫描（PET或PET/CT）等关于诊断正在研究中的有：放射免疫显像（RII）新的或多种血清标记物的检测血清中卵巢癌特异抗体的检测恶性肿瘤危险指数评分（RMI)癌基因和抗癌基因突变的检测，特别是与遗传相关基因的检测（芯片）发现和寻找新的特异抗原和基因肿瘤标记物的定义与肿瘤相关的抗原或某种生物活性物质肿瘤细胞异常表达反映癌变发生、发展过程可被检出有效的肿瘤标记物特异性强敏感性高交叉反应小早期诊断率高随病情变化监测值变化明显临床应用肿瘤诊断及鉴别诊断肿瘤残存复发的预测及复发部位监测疗效观察及预后评估对无症状早期癌及高危人群的筛查血清肿瘤标志物的检测CA125是应用最多的卵巢癌血清肿瘤标志物，特别是最常用的监测卵巢癌复发的指标。Ⅰ期卵巢癌患者仅有约30-50%＞35u/ml，监测复发的敏感性、特异性、阳性预测值分别为79％、95％、100％。1％健康妇女、3％良性卵巢肿瘤、6％非卵巢相关的良性疾病可有血清CA125水平升高。在子宫内膜异位症、盆腔结核、炎症等甚至高达50-70%卵巢癌相关的其它标志物基因分析和组织化学分析已发现许多新的可能与卵巢癌相关的标志物MUC1Kallikreins：hK4,hK6,hK8,hK10MesothelinAntileukoproteinase1(ALP1)OsteopontinVEGFS100A1InhibinLPAB7-H4HE4，表达上调在卵巢癌中最常见，且在早、晚期患者中mRNA和蛋白的表达均上调。HE4HE4（HumanEpididymisSecretoryProtein4,人附睾分泌蛋白4）1991年由Kirchhoff等从人的附睾中克隆出cDNA，基因定位在染色体20q12-q13.1，全长为12kb左右，由5个外显子和4个内含子组成，编码的蛋白质与细胞外蛋白酶抑制剂有很高的同源性，是一种酸性蛋白质。•1999年Schummer等发现HE4mRNA在卵巢癌组织中高表达，而在癌旁组织中不表达。HE4在恶性肿瘤中的高表达多见于卵巢癌、子宫内膜癌，少见于肺腺癌及间皮瘤。•HE4在早期（I期）的卵巢癌中的敏感性及检测卵巢癌总的敏感性均高于CA125，是卵巢癌敏感及特异的标志物，可用于对卵巢癌的早期诊断及辅助监控卵巢癌患者的治疗情况。英国的一项研究对200，000妇女用30多种肿瘤标记物分别单独或与CA125联合进行卵巢癌筛查，HE4可以使诊断卵巢癌的敏感度和特异度提高BiochemistryofHE4HE4-HumanEpidiymissecretoryprotein4MemberoftheWAP-genefamilyofproteaseinhibitors(newnameWFDC-genefamily)Characterizedbyanapprox50aasequencewith8highlyconservedcysteineresiduesthatform4disulphidebridges.WFDC(WheyAcidicProteinFourDisulphideCore)TumourassociatedWFDC-proteinsALP1,Elafin,HE4(WFDC2),PS20(WFDC1)Chromosome20q12-q13.1containsalocuswithseveralmembersoftheWFDCfamily.Amplifiedinseveralcancers:ovarian,breast,Colon,pancreatic,lungcancerWFDCgenelocusHE4mRNAexpressionprofileRestrictedexpressionprofileinnormaltissue•Expressedinnormalepididymis,andepitheliaoftherespiratoryandreproductivetract•Tumor-restrictedexpressioninovariancancer•90%ofserousovariancancer•HE4mRNAhighlyexpressedinlungadenocarcinomas•60%highexpressioninAdC•10%highexpressioninSqCFromGalganoetalModernPathol(2006)19;847-853ExpressionofHE4mRNAincancerHE4antigenexpressioninOvariancancerGalganoetalModernPathol(2006)19;847-853HE4antigenishighlyexpressedinserous,endometroidandclearcellovariancancerMucinous,germcellorsexcordovariancancerbarelyexpressHE4DrapkinetalCancerRes(2005)65;2162-2169HE4是一种适宜的卵巢癌血清标志物•HE4可分泌入体液•正常卵巢不表达，而在卵巢癌高表达--特异性好•在早期和晚期HE4表达均呈高度上调–早期病例具有高度敏感性•HE4的表达独立于CA125的表达–联合检测将较各自单独检测获得更多的信息HE4诊断试剂盒HE4EIA试剂盒由瑞典FujirebioDiagnosticsAB公司生产，已经获得了FDA认证和CE认证，在美国、欧洲等多个国家上市销售，现正在申请在中国上市注册。FujirebioDiagnosticsAB公司研制的HE4EIA试剂是国外唯一用于定量检测人血清中HE4的试剂，国内尚无任何检测HE4的试剂上市销售。HE4EIA方法的建立•主要试剂：2H5and3D8MAbestablishedusingHE4-MouseIgfusionproteinasimmunogenHellstrometal,CancerResearch63,3695–3700,2003•检测原理：Two-stepforwardsandwichimmunoassaybasedonBio2H5MAbforcatchingofHE4andHRP3D8MAbfordetectionHE4用于监测卵巢癌约80%患者HE4与CA125相符，与病情一致0801602403204004805606407208008809601040112012001280136014400.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.50801602403204004805606407208008809601040112012001280136014400100020003000400050006000700080009000100001100012000HE4EIA(pM)ArchitectCA125II(U/mL)RSRMonthsfromInitialDrawCA125(U/mL)HE4(pM)•Studyon80patients,4,4observations/patient•Measuredconcordancebetweenbiomarkerchange&clinicalstatus•ComparedHE4andCA125050010001500200025003000350040004500500055006000650070007500800085000123456789101105001000150020002500300035004000450050005500600065007000750080008500010020030040050060070080090010001100120013001400150016001700180019002000210022002300HE4EIA(pM)ArchitectCA125II(U/mL)PDSSRSPDMonthsfromInitialDrawCA125(U/mL)HE4(pM)05101520253035404550556065707501234567891011121314151617181905101520253035404550556065707501002003004005006007008009001000110012001300HE4EIA(pM)ArchitectCA125II(U/mL)SPDSPDPDPDMonthsfromInitialDrawCA125(U/mL)HE4(pM)HE4在卵巢癌的动态监测中与CA125具有良好的互补性Conclusion:HE4andCA125showequivalentbutcomplementaryperformanceformonitoringofovariancancer051015202530354045505560657075808590951001050.00.40.81.21.62.02.42.83.23.64.04.44.85.25.60510152025303540455055606570758085909510010505101520253035404550556065707580859095100105HE4EIA(pM)ArchitectCA125II(U/mL)PDSSMonthsfromInitialDrawCA125(U/mL)HE4(pM)HE4EIA中国注册临床试验总结瑞典康乃格公司市场部2009年3月临床研究方案样本量及样本量确定的依据根据国食药监械[2007]240号发布的《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》（以下简称“临床导则”），HE4EIA属于进口三类体外诊断试剂。临床导则要求临床验证至少要在三家省级以上医院进行实施，总样本数不少于1000人份。样本选择依据HE4EIA试剂属于国内首次申请注册的用于定量检测患者血清中的HE4浓度，可用于上皮性卵巢癌患者的辅助诊断和疗效监测。因此，临床试验收集的血清样本包括：上皮性卵巢癌样本、盆腔包块疑似样本、正常健康人样本、其他肿瘤样本、良性疾病样本及干扰样本等。同时包括临床收集的跟踪样本。入选标准：不同样本组收集的血清，要求知道当前受试者的临床诊断。收集的血清样本要求足够用于试剂盒的检测。样本收集：根据样本要求，医院收集常规的血清样本，要求标记清楚。样本保存：血清样本在2-8℃条件下可以保存3天，或者-40℃下长期保存。样本运输：血清样本的运输需要在2-8℃条件下进行，样本的使用不能超过限定时间。所有人体来源的样本必须按照国家和国际的运输规章运送。金标准的确立：临床采用病理检测结果作为卵巢癌诊断的金标准。质量控制方法：严格按照产品的说明书要求进行操作，要求质控品C1和C2结果在标示范围内；严格执行编盲的原则，避免主观