方法验证

分析方法的选择和验证周立春主要内容1、原料药及制剂产品所涉及的主要分析方法2、含量和杂质分析方法的研发3、强力降解试验以及降解途径的研究4、不同分析方法验证项目的要求5、药典含量及杂质检测方法的确认与验证要求6、其他来源或内部研制的分析方法的验证7、杂质及残留溶剂分析方法的验证2020年6月15日10时38分药物研发的要求2020年6月15日10时38分杂质情况主成分情况安全有效质量可控什么样的药物是安全的？如何证明药物是安全的？什么样的药物是有效的？如何保证药物的有效性？方法选择与验证好药标准情况研究对象是什么？研究目的是什么？如何达到目的？达到何种程度？检测方法选择和设置任何分析测试的目的都是为了获得稳定、可靠和准确的数据今天你“QbD”了么？本品“仿质量”还是“仿标准”？质量标准是控制产品质量的基本手段和范围检测方法是质量标准的手段仿药典品种如何验证方法？三类药如何仿？进口注册标准国外药典我该用什么方法。。。。？创新药的检测方法如何选择？质量源于设计（QbD）以解读关键物质属性（CMA）为基础通过试验设计(DOE)解读产品的关键质量属性(CQA)确立关键工艺参数（CPP）建立能满足产品性能的且工艺稳健的设计空间（DS），建立质量风险管理（风险评估）确立质量控制策略和药品质量体系药品质量流程技术层面研发审评操作层面生产监管通过质量源于设计（QbD）的理念有机的整合在一起药物主要成分(API)的特点结构特点化学结构，异构体，多晶现象理化特性外观（色，嗅，味）溶解性理化常数（相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、粘度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数）药物作用和药代动力学特点吸收，分布，代谢，转化由结构引出的药物的结构特点决定了药物作用药物的结构特点决定了代谢方式药物的结构特点决定了稳定性药物的结构特点决定了质量控制结构特征（地平类）构效关系特点1）1、4二氢吡啶是活性必须结构，如果转变为吡啶，或六氢吡啶，则活性消失。2）二氢吡啶环上的氮没有取代，活性最佳。3）二氢吡啶环上3、5位上的羧酸酯类也为活性所必须，所取代酯基不同，活性优于相同的取代酯基。4）3、5位取代酯基不同，4位形成手性中心，其中S构型活性最强。地平类质量控制重点杂质：以1、4二氢吡啶的转变为控制重点。溶出与释放溶出度：水中溶解性差，应在制剂中有设计，质量中有考核。释放度：心血管类药物服药特点－大多为长期用药，－要求血药浓度相对稳定。缓释制剂的发展是必然的仿制药对原研制剂的解读一、药物主要成分(API)的特点二、药物作用与药代动力学特点三、专利的解读四、药物制剂的特点（有效性）五、药物有关物质的特点六、药物稳定性研究提供的信息七、药物包装的特点【鉴别】【检查】【含量测定（效价）】【性状】•外观•色、臭、溶解度•化学•色谱•光谱•杂质的定量或限度检查（有关物质、无机元素、残留溶剂）•制剂中其他成分（降解产物、防腐剂）•溶出度、释放度等功能检查的检测方法•有效成分的含量测定•目视•资料留存•是否专属•是否存在干扰•内毒素、无菌、微生物限度•其他方法（起码证实方法的专属性）•方法准确性•精密性质量标准中的项目及方法要求【鉴别】【检查】【含量测定（效价）】【性状】UV、旋光、密度、熔点化学、UV、IR、NMR、旋光HPLC、GC、容量法、酶法、生物测定法质量标准中常见检测方法化学、比色、pH、HPLC、GC、TLC、IC、CE、溶出（释放）度、原子吸收、水分仪器有确定的技术指标，经过检测证实其适用于需要验证的方法证明方法能够实现预期目的，按预期要求运行保证系统运行能够达到预期目标，得到准确实验结果证明样品分析结果的准确性系统适用性试验质量控制检查分析仪器确认分析方法验证影响数据质量的因素检测方法的选择适用性先进性经济性通用性方法与技术的“更新换代”方法能够满足实验室间方法传递的要求方法能够充分反映质控目标方法准确、灵敏、简便、易行杂质的检测方法物理常数测定法旋光度-检查具有光学活性的杂质紫外分光光度法杂质吸光度-在特定波长具有紫外吸收的杂质容量滴定法游离脂肪酸、过氧化物、还原糖重量法酸中不溶物、水中可溶物比色比浊法游离淀粉、碘化物、铁盐、氯化物、硫酸盐等杂质的检测方法原子吸收分光光度法：检查金属杂质毛细管电泳法：抑肽酶中检查去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶两个特定杂质色谱法：液相色谱法，检查有机杂质的主要方法薄层色谱法，作为液相色谱法的补充气相色谱法：检查挥发性杂质热分析法：检查不同晶型的杂质（影响生物利用度和稳定性）拉曼光谱法、红外光谱法、X-射线粉末衍射生物检定法、酶联免疫试剂盒（抗生素残留量）含量测定或效价测定凡用理化方法测定药物含量的称“含量测定”；凡以生物学方法或酶化学方法测定药物效价的，称“效价测定”。经典化学方法：滴定法、重量法、旋光法等等紫外分光光度法或比色法高效液相色谱法或气相色谱法效价测定法含量和杂质液相分析方法的选择含量与杂质分析是否采用同一个条件HPLCorUHPLCor2DLCorGC正相or反相orHILICICorCEor离子对含量与杂质采用何种检测器UV检测器是否ok折光、ELSD、CAD、NQADCD、EDMS？前处理方法是否有效？杂质与含量测定的特点分析杂质含量测定专属性与主成份与已知杂质均应分离主成份与杂质分离准确性检出是第一位的准确是第一位的精密度方法可以达到的误差误差越小越好范围宽窄2020年6月15日10时38分仿制药有关物质参考方法的解读色谱柱的解读流动相的组成、比例、缓冲液的离子浓度、pH值、梯度、等度等等检测手段系统适用性试验的要求杂质的定量方式杂质的限度要求硫酸氢氯吡格雷的色谱条件比较美国药典色谱柱：L57，在粒径5μm，孔径120Å的硅胶上键合手性识别蛋白（卵类粘蛋白）制得。推荐色谱柱：UltronES-OVM（信和化学）检测波长：220nm流动相：磷酸缓冲液-乙腈（75:25），等度系统适用性试验：分离度2.5，RSD1.0%限度：A0.2%;B0.3%;C1.0%;未知0.1%；总杂1.5%.特杂：外标。英国药典色谱柱：C18，推荐色谱柱：封端色谱柱检测波长：220nm流动相：戊烷磺酸钠-甲醇（pH2.5），梯度系统适用性试验：分离度，峰谷比大于10限度：A0.2%;B0.3%;未知0.1%；总杂0.5%.C0.5%;外标。手性柱“量体裁衣”方法学验证方法学验证研究思路机械与严谨局部与整体八股格式与融会贯通应试教育与素质教育分析方法验证的法规要求方法验证的目的——证明所采用方法适合于相应检测项目的要求，能够真实反映产品质量，做到质量可控！新分析方法用于常规检测前必须验证方法转移到新的实验室后需要进行重现验证（或方法确认）新药申报，质量标准中的分析方法必须验证！生产工艺变更、制剂组分变更、分析方法修订时，质量标准中的分析方法必须验证！方法验证的指导原则《中国药典》2010年版二部附录XIXAICHQ2（A/B）FDAcGMPs211.165，211.194USP通则1225,1226,6211224(草案)2020年6月15日10时38分方法验证的步骤USP1225规定实验室应采用试验方式进行方法验证：“应通过实验室的研究制定成一定的分析方法验证程序，证明方法的性能参数符合预期的分析应用要求。”验证过程应满足以下条件：易于使用；能够用计算机系统自动控制；每次分析的成本；样品能量；运行时间；以及环境、健康和安全要求2020年6月15日10时38分验证项目及内容不同项目验证内容不同！以证明方法适用为根本目的！2020年6月15日10时38分项目内容鉴别杂质定量测定杂质限度检查含量测定及溶出度测定准确度－+－+精密度－－－+重复性－+－+中间精密度－+①－+①专属性②＋＋＋＋检测限－－③＋－定量限－＋－－线性－＋－＋范围－＋－＋耐用性＋＋＋＋①已有重现性验证，不需验证中间精密度。②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。③视具体情况予以验证。方法验证的步骤初步确定分析方法制定验证方案验证目的、验证项目、接受标准准备仪器设备、原料、对照品人员准备、文献材料调研开展验证收集实验记录和图谱提交验证报告评价方法是否通过验证2020年6月15日10时38分方法验证的筹备——防止不必要的失误用于测定关键验证参数的化学品，应具备足够的数量，足够稳定，并且按照技术指标核查其具有确切的成分和纯度。其他材料和消耗品也应符合要求。应选用新的并且符合色谱柱性能指标要求的色谱柱（防止材料导致的失败）分析设备应有明确的规定和良好的性能，并经过确认或校准，以确保其满足分析方法要求的功能和性能指标。应选择中等性能的设备，而不要选择性能最好的设备。否则，用不同设备进行中间精密度和重现性研究时可能会有问题，不容易满足标准限度的要求。操作人员应对技术和设备足够熟悉。这样，他们可以更容易地识别和诊断不可预见的问题，并且更加高效地完成整个过程。2020年6月15日10时38分分析方法验证顺序没有标准程序！1.专属性2.重复性（RT、Area）3.线性、定量限、检测限、范围4.准确度5.中间精密度（重现性）6.耐用性2020年6月15日10时38分部分数据可以套用！说法不一！斟酌考虑！方法验证项目的要求——保证分析方法能够用于在研药品的质量控制专属性——有其他成分（杂质、辅料等）存在时，拟定的方法能否准确（分离）测定出被测物；反映方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力；指用于复杂样品分析时是否受到相互干扰。分别分析加有杂质、降解产物等控制成分的样品和实际样品，比较两组测试结果空白无干扰主成分与有关物质完全分离（分离度r≥1.5）峰纯度符合规定（≥980）考虑基质(辅料、水、食品等)对专属性的干扰，关注样品制备减少干扰的发生。2020年6月15日10时38分方法验证项目的要求——专属性鉴别与可能的共存物或结构相似物质相区别空白辅料、结构相似物以及其他组分均呈负反应含量测定、杂质检测提供代表性色谱图预判的杂质图粗品的杂质图破坏的杂质图2020年6月15日10时38分降解试验以及降解途径的研究降解条件选择酸、碱、氧化浓度、温度、时间高温、高湿、光照时间、光强分离条件的优化峰纯度分离度主要降解杂质鉴定降解程度控制降解5~10%至少有一个条件降解与非降解品比较；体现考察摸索和研究的过程，2020年6月15日10时38分专属性的研究如何评估和利用强力破坏及影响因素的试验数据结构特点与降解方式物料平衡检测波长的合理性建立系统适用性试验：以保证系统的可重复性。关于物料平衡的概念在液相检测有关物质时的物料平衡：应该是指经过各种破坏试验后，或加速实验及长期稳定性试验后，主成分峰面积的减少与杂质峰面积的增加之间的平衡，以确定检测方法的准确性，以及杂质含量的计算方式的考量。某制剂的加速试验数据0月有关物质含量测定1月0.32%101.6%2月0.42%98.9%3月0.48%97.2%6月0.53%95.4%结构特征的预判当结构中某种基团应有的问题在专属性试验中没有出现时。例：奥拉西坦色谱系统的调整是必须的色谱柱流动相方法验证项目的要求——专属性尝试选择合适的色谱柱或色谱条件获得方法的专属性评价目标色谱峰纯度（二极管阵列检测器、MS）当共洗脱化合物的光谱图非常接近时，紫外-可见二极管阵列检测器就有其局限性，这在代谢物及其母体化合物时极有可能发生2020年6月15日10时38分方法验证项目的要求——专属性当共洗脱化合物的光谱图非常接近时，采用MS检测器质谱通常比紫外光谱专属性更强，因此常用于色谱的选择性评价2020年6月15日10时38分方法验证项目的要求—