菌液浓度测定方法

菌液浓度测定实验原理：一定浓度的细菌悬浮液有一定的稍光度,浓度与消光度呈正比,且在一定的范围内呈良好的线性关系。以分光光度计为检测工具,测定未知浓度菌悬液的消光度值,由事先作用的标准直线,即可求出该菌悬液的浓度。实验内容1、材料与方法1.1菌种大肠杆菌1.2制备标准菌的悬浮液培养基的组成：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化钠0.5g琼脂2g蒸馏水100mLpH7.0～7.2灭菌121℃，22min1.3仪器设备722型可见分光光度计、万分之一电子分析天平、801型离心沉淀机1.4最大吸收峰值的确定取10ml菌液调节PH=5，抑制菌体的继续生长，利用分光光度计在500～700（nm）波长范围扫描，选出最大吸收峰。作出所测波长与吸光度的关系曲线。选出最大吸收波长。大肠杆菌代谢过程的u—pH关系图2、标准曲线的绘制2.1重量法测菌浓将一离心管置于干燥烘箱中烘干至恒重，自然冷却后用分析天平称其质量m1。准确称其10ml菌液，调节PH=3，放入离心机中进行离心分离（3500rmp、10min），倾去上清液，将菌体放进干燥箱中烘干至恒重，自然冷却后取出称重m2，利用差量法求得菌液中菌体的真实浓度。(m1-m2=m)2.2测定系列标样的吸光度取与重量法同一菌液，配制2、5、10、20、50倍的系列标样，以1cm比色皿比浊，波长600nm，以蒸馏水为参比，分别测定其吸光度A。记录实验数据：表1菌液浓度与吸光度的关系稀释倍数菌液浓度/g/L菌液的吸光度1251020502.3工作曲线的绘制以重量法所测的菌体浓度为横坐标,其对应的系列标样吸光度为纵坐标,绘制A-C标准曲线。2.4菌体浓度的测定将待测菌液按2.2中相关步骤操作,测得吸光度,通过标准曲线图查出菌体浓度值再乘以相应稀释倍数