NEB-T4DNA连接酶

T4DNA连接酶货号规格价格#M0202L100,000units3,029.00元#M0202M(高浓度5x)100,000units3,029.00元#M0202S20,000units699.00元#M0202T(高浓度5x)20,000units699.00元#M0202V10,000units349.00元■提高反应效率■粘性末端和平齐末端均可连接■限制性酶切片段的克隆（3）■将linker或adapter连接到DNA片段的平齐末端■室温或16℃均有活性概述该酶催化契合的双链DNA或RNA的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口(1)。来源纯化自E.coliC600pcl857pPLc28lig8(2)。反应条件1XT4DNA连接酶缓冲液[50mMTris-HCl（pH7.5@25℃），10mMMgCl2，10mMDTT，1mMATP]。推荐DNA5'末端浓度为0.1－1.0μM。质保声明无核酸内切酶和外切酶污染。每批T4DNA连接酶均通过模拟克隆实验进行检测，该实验可以检测出连接后DNA末端的任何损伤。结果表明超过99.9%的DNA末端保持完好。单位定义（粘性末端活性单位）1单位指在20μl1XT4DNA连接酶反应缓冲液中，16℃反应条件下，30分钟能使50%的经HindIII消化的λDNA片段[5'端浓度为0.12μM（300μg/ml）]连接所需的酶量。浓度400,000units/ml和2,000,000units/ml。贮存条件50mMKCl,10mMTris-HCl(pH7.4),0.1mMEDTA,1mMDTT,200μg/mlBSA和50%甘油,-20°C贮存。热失活65°C10分钟。室温连接反应为方便起见，连接反应可以在室温（20-25℃）条件下进行。粘性末端连接：在20μl反应体系中加入1μlT4DNA连接酶，反应10分钟。平齐末端连接：在20μl反应体系中加入1μlT4DNA连接酶反应2小时，或者加入1μl高浓度T4DNA连接酶反应10分钟。另外，NEB快速连接试剂盒[NEB#M2200S（30次反应），或NEB#M2200L（150次反应）]可在室温下5分钟内完成平齐和粘性末端的连接。使用注意与大肠杆菌DNA连接酶需要NAD+作辅因子不同，T4DNA连接酶的辅因子是ATP。稀释后的T4DNA连接酶应保存于-20℃，50%甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液A，NEB#B8001）。如稀释后马上使用，则可用1XT4DNA连接酶反应缓冲液稀释。只要在反应体系中补加1mMATP，连接反应就可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液（NEBuffer-s）或在T4DNA多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。参考文献(1)Engler,M.J.andRichardson,C.C.（1982）.InP.D.Boyer（Ed.）,TheEnzymes,Vol.5,（p.3）.SanDiego:AcademicPress.(2)Remaut,E.,Tsao,H.andFiers,W.,（1983）Gene,22,103–113.(3)Sambrook,J.etal.（1989）.MolecularCloning:ALaboratoryManual,（2nded.）,（pp.1.53–1.73）.ColdSpringHarbor:ColdSpringHarborLaboratoryPress.