初始污染菌检验标准操作规程

文件名称初始污染菌检验标准操作规程修订人：日期：编码LHYL-ZLSOP-06702审核人：日期：修订部门质量管理部批准人：日期：颁发部门人力资源部生效日期：分发部门质量管理部目的：建立产品初始污染菌数检验及分析标准操作规程。责任：质量检验人员负责执行此规程。范围：适用于未灭菌产品初始污染菌数验证试验的检测分析。内容：1初始污染菌检测1.1器材与试剂1.1.1器材（1）生化培养箱、霉菌培养箱（2）立式灭菌柜（3）超净工作台（4）无菌过滤装置（5）无菌镊子、无菌剪子（6）电子天平（7）移液器（8）接种环1.1.3稀释液、冲洗液pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液1.1.3培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。1.2检验量随机抽取1到2个产品1.3检验方法：平皿法1.3.1供试液的制备用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采样表面积为100cm2，加入100ml无菌生理盐水作为1：10的供试液；或拆卸样品，用100ml生理盐水震荡浸泡，作为1：10的供试液。供试液10倍递减稀释。1.3.2供试液操作方法每个稀释级各吸取1ml分别注入4个直径90mm的无菌平皿中，2个平皿注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基混匀，凝固，倒置培养；另2个平皿注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。1.3.3阴性对照取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，分别置2个无菌平皿中，分别注入胰酪大豆胨琼脂和沙氏葡萄糖琼脂培养基，凝固，倒置培养。1.3.6培养条件除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基在30-35℃培养3-5天；沙氏葡萄糖琼脂培养基在20-25℃培养5-7天。1.3.7计数将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。1.3.7.1菌落计数基本规则①选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。如只有1个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。②如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。③如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。④如各稀释级平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。⑤如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为10个/g或ml。⑥如有3个稀释级平均菌落数均在30～300之间，则以后2级计算级间比值报告。⑦菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。1.3清场检验完毕，将使用的试剂归位，清理台面，并将用过的工具进行清洗。检测人员应及时填写《初始污染菌数检测记录》，并对检验结果进行判定。1.4注意事项稀释倍数落数低稀释级的平均平板菌稀释倍数落数高稀释级的平均平板菌比值1.1产品取样应在完成整个灌装或包装过程以后，而又在灭菌前取样；1.3本操作应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。1.3无菌操作台必需定期进行洁净度检测，试验前提前开紫外灯15min后方可进行实验操作。1.4过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备使用前应进行灭菌，使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。5依据标准及相关文件2015版《中华人民共和国药典（二部）》附录ⅪJ微生物限度检查法GB/T19973.1-2005《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分：产品中微生物数量的估计》GB15980-2009《一次性使用医疗用品卫生标准》