细胞工程复习题

1细胞工程如何正确区分正常细胞与凋亡细胞？P491、细胞培养的操作方式。P572、植物组织培养的优点。P75植物无性繁殖过程中器官发生的方式。P743、植物组织培养的问题分析。P834、人工授精动物与体外受精动物有什么异同？P96/105人工授精是动物受精方式的一种，比如鱼类和两栖类，精子和卵细胞的结合是在体外的人工授精是人为的取出动物（或人）的精子和卵细胞，在体外人工环境下完成精子和卵细胞的结合二者一个是自发的，一个是人为的人工授精的应用可以体现在多方面，比如近年来的试管婴儿技术；另外，人工授精在动物转基因上也有很多的的应用。5、如何看待试管婴儿和体细胞克隆带来的伦理学问题？与技术问题相比，人们更为担忧或恐慌的是克隆技术给传统的伦理道德、社会观念及价值体系带来的巨大冲击和挑战。A、克隆人的法律地位和伦理关系难以确定。克隆人的出现，使世代的秩序和个人身份的确立出了问题。这种秩序和定位是构成人和社会关系的基本部分（如果产生了混乱，人和社会的意义将发生偏移）。另外，当克隆人在社会上与人相处时，由于其身份的特殊性，可能在心理上产生孤独感、恐惧感和绝望感，造成新的社会问题；B、打破“哺乳动物不能无性繁殖”的自然规律，挑战传统的性伦理关系。千百年来，人类一直遵循着有性繁殖方式，而克隆这种“实验室里人为操纵下制造出生命”的方式，完全改变了人类自然的生育方式，从有性繁殖回到无性繁殖，人类繁殖后代的过程不再需要两性共同参与，这将对现有的社会关系、家庭结构造成难以承受的巨大冲击；C、人类克隆技术可能破坏基因的多样性遗传机制。基因的多样性是物种得以进化适应环境的源泉所在，人类传统生育方式保证了不同基因组之；D、从遗传学看，它破坏了人拥有独特基因型的权利。克隆技术使人类基因单一地遗传下去，导致人种退化，基因突变、新型病毒出现等一系列严重的问题。7、.胚胎工程动物培育的关键技术环节有哪些？如何控制成功率？关键技术环节有：体外受精、人工受精、核移植和胚胎移植四个环节；控制成功率：要对各个环节技术的熟悉了解及掌握，即深化理论知识，对各个环节的相关技术、应注意的问题进行精细控制.8、从培养基、培养方法、培养设备上比较分析植物细胞培养与微生物细胞培养的异同？不同点:,糖、的全能性。植物细胞培养主要是获得新个体或细胞产品应用与快速繁殖试管苗、细胞产品、人工种子、转基因植物的培育等。动物细胞培养是获得大量新生细胞或细胞产品应用是获得细胞的产物2相同点:防止染菌、培养时候都需要适当的温度等条件。9、分析讨论动物细胞生物制药的优点与存在问题？P23610、举例说明动物细胞培养在生物制药中的应用。P23511、干细胞研究的优点与存在的问题。P27712、.简述胚胎干细胞体外培养的关键技术。P283、413、胚胎细胞克隆动物与体细胞克隆动物各有什么优势？胚胎细胞克隆动物的优势有：⑴胚胎细胞分化程度较低，成功率较高；⑵可能一次性繁殖性状相同或高度相似的动物。体细胞克隆动物的优势有；⑴体细胞数量丰富，易于获得；⑵被获取核供体的动物不受性别、年龄限制。14、什么是试管动物？试管动物培育一般经过哪几个步骤？其繁殖技术的关键问题有哪些？试管动物，也称体外受精动物，是指将供体的精子和卵子在体外受精，体外培养胚胎发育到一定阶段，通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。培育步骤：⑴精子采集与体外获能，卵子采集与成熟培养；⑵体外受精；⑶重组胚激活与体外培养；⑷胚胎移植；⑸体内发育、出生。关键问题有：①精子的采集、获能和卵子的采集与成熟培养；②体外受精问题；③胚胎体外培养中的发育阻滞问题；④胚胎移植成活率低的问题；15、脱毒植物的鉴定：直接检测法（观察症状）、指示植物法，指采用对某种病毒反应敏感、症状明显的植物来检测病毒电镜法，用电子显微镜观察样品材料有无病毒存在，抗血清检测法，病毒注射进动物体内，看是否会在血清中产生抗体得到抗血清16、植物细胞融合的过程：取材（生长旺盛、生命力强的组织）-----制备原生质体，即去除细胞壁，（机械去除法和生物酶解法）-----纯化原生质体（离心法、漂浮法等）-----诱导细胞融合（可以利用病毒、化学诱导剂促使细胞融合，或者采用的电融合诱导法）。17、怎样获得植物的单倍体、三倍体和四倍体？植物四倍体获得的方法：秋水仙素获得四倍体（调整秋水仙素浓度----处理分裂能力强的细胞）。单倍体的获得方法是：花药和花粉培养，（取单核期未开放的花蕾，接种于适当的培养基中，再通过植株再生发育成单倍体植株）。植物三倍体的方法：用以上获得四倍体的方法得到四倍你后，再以二倍体作父本，与四倍体母本植株杂交。18、什么是植物细胞固定化培养，它有什么优点？植物细胞固定化培养是将游离的细胞包埋在惰性支持物内部或贴附在它的表面多糖或多聚化合物置备成的网状支持物中、培养液呈流动状态进行无菌培养的技术。方法有：吸附、交联、共价结合和包埋等。其优点有：①细胞包埋后所受剪切力损伤减小，维持了细胞稳定性；②细胞密度较高时不会改变培养液流体性质；③可将细胞生长与产物合成2个阶段分开；④细胞生长较缓慢，利于次生代谢产物积累；⑤增加细胞之间接触，促进了细胞间信息传递，利于代谢产物合成；⑥固定化细胞可反复使用，可利于连续培养和收获产物，降低成本等优点。19、什么是次级代谢产物，如何提高植物次级代谢产物？3次级代谢产物上通过次级代谢合成的产物，如抗生素、激素、生物碱、毒素等。提高次级代谢产物产量需要考虑的因素有；A具体是选育优良的细胞株，B培养时保证培养基和培养条件符合细胞生长和代谢的需要，C添加次级代谢产物的前体物质进行调控，D添加表面活性剂增加细胞膜的通透性。20、动物细胞大规模培养的方法有哪些？各自主要是为了解决什么问题？动物细胞大规模培养的方法及其为了解决的问题是：⑴转瓶（管）培养系统，为了解决从小量培养到大规模培养的过度问题；⑵微载体培养，为摆脱传统的培养瓶（管）培养限制，实现三维立体贴附培养；⑶中空纤维生物反应器培养，为改善传统培养方法的气体、营养物质及水分等物质的通透性；⑷大规模培养方式，该法是为使细胞持续生长到较高的密度，目标产品达到较高水平。21、原代培养取材时需要注意的几个问题是：①应选分化程度低、容易培养的组织，如胚胎、新生组织等；②注意使用新鲜材料和保鲜，取材后一般6h内分离细胞；③严格无菌；④防止细胞机械损伤；⑤避免组织干燥。动物细胞原代培养有组织块原代培养和细胞原代培养。22、利用MS培养基配制植物组织培养培养基的方法及步骤（P45）解：基本步骤：1，根据所需配置的培养基量，用移液管从装有MS母液的容器里吸取所需的母液量以及所需的6-BA0.5mg／L植物生长调节物质母液。注：不同的母液需要用不同的移液管吸取，切忌混用，以免母液被污染不纯2，将吸取的母液依次注入量筒，注入蒸馏水定容3，将电饭锅的电源插上,将溶液倒入，打开开关加温，并在适当的温度时分别加入蔗糖与琼脂，并用玻璃棒不断搅拌，使其均匀溶解。注：加入琼脂时，必须注意温度的掌握，不可过高。4，在桌上将玻璃瓶按一定序列排好，将煮好的培养基均匀倒入，并且盖好瓶盖，贴上标签，写上培养基的名称。5，将培养基放入高压灭菌锅后，拧紧，并加适量的水。打开开关工作后，先让温度上升至120℃，保持20分钟左右，温度开始下降，整体灭菌需要一段较长时间（一般为2个小时左右）。6，一段时间后，取出培养基，将那些瓶盖没盖好，已经感染的培养基处理掉。7，做好一切后，打扫卫生，保持整体环境干净整洁23、分析比较细胞培养不同操作方式的优缺点。分批式培养方式的优点有操作简单，培养周期短，能直观反映细胞生长代谢过程，生产规模放大比较容易，其缺点有不能控制底物浓度、细胞容易老化、生长周期短、效率低等；流加式培养的优点有可合理充足补充营养、减少产物反馈抑制、排除有害代谢物积累对细胞的损伤及细胞不易老化，另外还能避免一次性投料过多，改善培养液流体性质，延长指数生长期，其缺点是操作较麻烦，受生物反应器容积的限制等；半连续式培养能使细胞持续指数生长，可多次收获并且操作简便，生产效率高，其缺点是菌种易老化；连续式培养可使细胞在恒定状态下生长，细胞生长速率可基本保持不变，持续指数增长，但其缺点是收获细胞浓度不高、细胞分裂快、易变异、易污染等；灌流式培养可维持较高的细胞密度，使细胞处于较稳定的营养环境中，有害代谢废物积累低，反应速率易控制，培养周期长，目标产品回收率高，其缺点是仪器设备要求较高，操作较复杂等。7、植物组织培养的基本步骤及获得完整植株的途径解：第一步，将采来的植物材料除去不用的部分第二步是对材料的表面浸润灭菌第三步是用灭菌剂处理植物离体快繁和脱毒技术第四步把消毒过的外植体接到ms培养基上、在光照培养箱中进行培养、若要得到愈伤组织、则无需光照，直接进行暗培养第五步愈伤组织的诱导、把形成的愈伤组织转接到生芽生根培养基上、进行再分化4第六步得试管苗、转种、得到完整植株在无菌的情况下，将植物体内的某一部分器官或组织，如茎尖、芽尖、形成层、根尖、胚芽和茎的髓组织等从植物体上分离下来，放在适宜培养基上培养，经过一段时间的生长、分化最后长成一个完整的植株11、简述植物激素的应用规律。①先生长素处理，后细胞分裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不分化。②先细胞分裂素处理，后生长素处理、细胞分裂也分化（可能是内源生长素起了作用）。③生长素和细胞分裂素同时处理，分化频率提高。两者同时存在的用量比值可以改变形态建成的方向。生长素／细胞分裂素：比值高：有利根分化，抑制芽形成；比值低：有利芽分化，抑制根形成；比值适中：促进愈伤组织生长。1、杂交瘤生产单克隆抗体的制备原理与技术流程？原理：将杂交瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合得到既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖的杂交瘤细胞，经克隆化培养得到可以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。这种技术称为杂交瘤技术。技术流程：⑴动物免疫与免疫脾细胞悬液的制备：一般要经过初次免疫、第二次免疫（向动物腹腔内注射抗体）、加强免疫（向动物静脉内注射抗体）三个过程，如果需要免疫脾细胞，一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液⑵骨髓瘤细胞的获得与培养：骨髓细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高。通常采用鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷酸激酶（TK）缺陷型的骨髓瘤细胞系。一般在准备融合细胞钱的两周就应开始附属骨髓瘤细胞。保证骨髓瘤细胞处于对数生长期。⑶细胞融合：取对数生长期的骨髓瘤细胞，离心，弃上清。用PEG作用下，融合杂交瘤细胞。⑷融合细胞的筛选：融合后的细胞类型：融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体等。正常的脾细胞在培养基中存活5—7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。剩余：脾细胞+瘤细胞的融合细胞+未融合的瘤细胞+融合的瘤细胞，其中后两种需要进行特别的筛选去除。⑸克隆化培养：将融合的细胞进行充分稀释，使分配到培养板的每一个孔中的细胞数在0至数个细胞之间。培养一段时间后去上清以ELISA法选出抗体高分泌性的抗体。找到针对目标抗原的抗体，增殖后冻存、体外培养或动物腹腔接种培养生产抗体。⑹分泌抗体的融合细胞的筛选：酶联免疫吸附法（ELISA）：主要是基于抗原或抗体能够吸附至固定相载体的表面并保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理。⑺单克隆抗体的大来那个生产：实体瘤法、腹水制备法、生物反应器培养杂交瘤细胞大规模生产单抗。7、何谓细胞工程？简述细胞工程的技术。细胞工程操作的主要对象有哪两大类细胞？•细胞工程：是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过某种工程技术手段，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。细胞工程的技术包括：细胞融合技术、细胞拆合技术、基因转移技术、细胞器移植技术、胚胎移植技术、细胞与组织培养技术、染色体导入技术，从细胞结构的不同层次对细胞进行遗传操作。细胞工程操作的主要对象有原核细胞如细菌、放射菌等细胞和真核细胞如酵母、动植物等细胞两大类。简述植物细胞的培养特性（