食品微生物检验技术w4204-2-微课件

主讲老师：叶素丹微生物检验技术金黄色葡萄球菌检验——国标解读与检验准备（第二法）主讲老师：叶素丹微生物检验技术金黄色葡萄球菌检验——国标解读与检验准备（第二法）—4—国标解读检验准备目录页—5—1国标解读金黄色葡萄球菌检验—国标解读与检验准备（第二法）标准版本与内容方法选择与应用标准检验流程国标解读与检验准备（第二法）GB4789.10-2010标准版本一、标准版本与内容国标解读与检验准备（第二法）标准内容：第一法：定性检验第二法：定量检验—平板计数法第三法：定量检验—MPN法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。一、标准版本与内容国标解读与检验准备（第二法）《GB29921-2013食品安全国家标准食品中致病菌限量》对8类食品按照三级采样方案有条件地允许金黄色葡萄球菌限量存在金黄色葡萄球菌是我国细菌性食物中毒的主要致病菌之一乳粉和婴儿配方食品等产品要求按照《GB4789.10-2010》第二法（平板计数法）进行检验。二、方法的选择与应用国标解读与检验准备（第二法）检验方法的选择二、方法的选择与应用国标解读与检验准备（第二法）选择2个～3个连续的适宜稀释度的样品匀液，接种Baird-Parker平板36±1℃报告接种与培养典型菌落计数与确认检样25g（mL）样品+225mL稀释液，均质计数与血浆凝固酶试验样品处理与稀释10倍梯度稀释三、标准检验流程45h~48h国标解读与检验准备（第二法）10-1样品匀液10-2样品匀液10-3样品匀液根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）每个稀释度分别吸取1mL样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4mL接种量分别加入三块Baird-Parker平板，涂布，培养。三、标准检验流程2、接种与培养1、样品稀释国标解读与检验准备（第二法）三、标准检验流程3、典型菌落计数与确认选择在BP琼脂平板有典型金黄色葡萄球菌菌落特征，且同一稀释度3个平板所有菌落数合计在20CFU～200CFU之间的平板，计数典型菌落数。国标解读与检验准备（第二法）再从典型菌落中任选5个菌落（小于5个全选），做血浆凝固酶试验进行典型菌落数确认。3、典型菌落计数与确认三、标准检验流程国标解读与检验准备（第二法）三、标准检验流程a）只有一个稀释度平板的菌落数在20CFU～200CFU之间且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；b）最低稀释度平板的菌落数小于20CFU且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；c）某一稀释度平板的菌落数大于200CFU且有典型菌落，但下一稀释度平板上没有典型菌落，应计数该稀释度平板上的典型菌落；d）某一稀释度平板的菌落数大于200CFU且有典型菌落，且下一稀释度平板上有典型菌落，但其平板上的菌落数不在20CFU～200CFU之间，应计数该稀释度平板上的典型菌落；3、典型菌落计数与确认国标解读与检验准备（第二法）三、标准检验流程e）若2个连续稀释度的平板菌落数均在20CFU～200CFU之间，按公式（2）计算。3、典型菌落计数与确认国标解读与检验准备（第二法）4、结果与报告三、标准检验流程—17—2检验准备金黄色葡萄球菌检验无菌器材培养基与试剂实验室要求与准备国标解读与检验准备（第二法）一、无菌器材金黄色葡萄球菌检验的主要无菌耗材有国标解读与检验准备（第二法）（1）样品稀释液：225ml生理盐水或磷酸盐缓冲溶液）、无菌试管（含9ml生理盐水或磷酸盐缓冲溶液）（2）分离平板：baird-parker（BP）琼脂平板；（3）鉴定试剂：脑心浸出液肉汤（BHI）、冻干兔血浆、营养琼脂斜面。二、培养基与试剂国标解读与检验准备（第二法）三、实验室准备与要求一般样品检验在洁净实验室中进行——样品稀释与接种过程病原微生物分离鉴定在二级生物安全实验室（BSL-2）中进行。——分离鉴定按照《GB4789.1-2010食品安全国家标准食品卫生学检验总则》的要求：国标解读与检验准备（第二法）一般一个样品需要几根无菌涂布棒？几块BP平板？几支BHI和冻干兔血浆试剂？参考网站：智慧职教校本资源库参考网站：课程网址：微生物检验技术课程教学团队