蛋白表达不同检测方式的比较和分析

蛋白表达不同检测方式的比较和分析免疫组化法(immunohistochemistry)原理：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。特点：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。蛋白免疫印迹(WesternBlot)原理：蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。特点：先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。ELISA检测原理：酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。特点：用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。3种蛋白检测水平的比较蛋白检测方式免疫组化法Westernblot法ELISA试剂盒法相同点原理：抗体-抗原结合反应不同点样品类型组织或细胞组织或细胞血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液分析方式定位、定性及定量的研究(主要是定位，定位敏感性远远高于Westernblot法)可以用于定性和半定量，定量较免疫组化法准确多用于定量分析，其灵敏度非常高观察结果免疫组化图（膜阳性、质阳性和核阳性）电泳图（着色的位置和着色深度）蛋白浓度优点特异性强、敏感性高、定位准确、形态与功能相结合分析容量大、敏感度高、特异性强灵敏、特异、简单、快速、稳定、易于自动化操作及节省实验经费应用范围⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位；⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型；⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。⑹为临床提供治疗方案的选择。是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。⑴组织抗原的定性定量检测；⑵多肽分子的质量测定；⑶病毒的抗体（或抗原）检测；⑷疾病早期诊断是分泌性蛋白检测首选方法之一。⑴免疫酶染色各种细胞内成份的定位；⑵研究抗酶抗体的合成；⑶显现微量的免疫沉淀反应。⑷定量检测体液中抗原或抗体成份。【多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断】各组检测方法之间的差别及特点：以下是western和ELISA的区别：1.westernblotting可以看到特异性的条带，但是定量比较烦2.ELISA可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。3.WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到4.ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响5.WB所检测的一般是抗原，而ELISA抗原抗体都可以检测。6.WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而ELISA无能为力。7.WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而ELISA不行。8.WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。ELISA一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。9.WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等缺点在ELISA上表现得要好得多。《HMGB1、MMP-9和CEA在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义》中英文实例分析：一、免疫组化（免疫组化图——阳性表达率）二、westernblotting三、ELISApone.0130839.pdf《ImplicationofLeptin-SignalingProteinsandEpstein-BarrVirusinGastricCarcinomas》一、免疫组化（免疫组化图——阳性表达率）二、westernblottingelisa.pdfeffectofvaryingdosesoftamoxifenonovarianhistopathology,serumVegF,andendothelin1levelsinovarianhyperstimulationsyndrome:anexperimentalstudy三、ELISA