临床微生物检验标本采集与运送

临床微生物检验标本采集与运送徐州市第六人民医院检验科许峰“正确的微生物学检验始于正确的标本采集。临床医师、护士及检验技师都必须通晓其要领。”——著名的临床微生物检验专著《ManualofClinicalMicrobiology》主编PatrickMurray目录DIRECTORY痰液标本采集与运送02PART血液标本采集与运送01PART尿液标本采集与运送03PART其它标本采集与运送04PART01PART血液标本采集与运送血液标本采集与运送01PART（一）、血培养检测采血指征临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者：1.发热（≥38℃）或低温（≤36℃）、2.寒战3.白细胞增多（10×109/L，特别有“核左移”未成熟的或杆状核白细胞增多）4.粒细胞减少（成熟的多核白细胞1×109/L）5.血小板减少6．皮肤粘膜出血7．昏迷、休克8．多器官衰竭9.CRP升高在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。对入院危重感染患者未进行系统性抗菌药物治疗之前，应及时采集血培养。血液标本采集与运送01PART1.皮肤消毒程序：严格执行三步法（防止皮肤寄生菌污染）（1）用75%酒精擦拭静脉穿刺部位30秒以上，待干；（2）然后10%碘伏作用60秒，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上，待干；（3）最后用75%酒精脱碘，待酒精挥发干燥后采血。新生儿及对碘过敏的患者，只能用75%酒精消毒60秒，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。2.血培养瓶消毒程序：（1）用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用60秒。（2）用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞表面剩余的酒精，然后注入血液。（二）、血培养检测消毒程序要求：严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手按压静脉，除非带有无菌手套。不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头，采用真空采血装置能降低污染率。说明：无论采用何种采血方法，血培养可接受的污染率通常是≤3%。血液标本采集与运送01PART（三）血培养标本采集和运送要求1.采集时间要求：对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集2套以上血培养标本。说明：实验数据表明细菌入血后约1小时，寒战和发烧开始出现2小时内，此时为采集血培养标本进行病原菌培养的最佳时机。在不同的时间点采血只有在以下情况才有必要：疑似感染性心内膜炎或其他血管内（如导管相关性感染）感染患者的连续性菌血症。血液标本采集与运送01PART（三）血培养标本采集和运送要求2.采集部位要求：从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血培养。必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。说明：不建议采集：（1）动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大；（2）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血（如怀疑导管相关性感染等），也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本，以帮助阳性结果的判读。所谓“双瓶双侧”，是指从一个部位采血接种一套培养瓶，再从另一部位采血接种另一套培养瓶。（通常是双臂）一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个血培养。血液标本采集与运送01PART（三）血培养标本采集和运送要求3.采血量要求：成年患者推荐的采血量为每瓶8-10ml，儿童患者推荐的采血量为每瓶1-5ml，新生儿0.5ml，但不应超过患儿总血量的1%。说明：血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。成人血培养采血量在2~30ml之间，病原菌检出率与采血量成正比例增长。每增加1ml的血液，病原菌的检出率增加3.2%。儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。对血液病患者或者血容量相对较低的患者建议使用儿童瓶来减少血液的采集量增加病原菌的检出率。血液标本采集与运送01PART（三）血培养标本采集和运送要求4.采集次数要求：对怀疑菌血症、真菌血症的成人患者，推荐同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即双瓶双臂同时采集血培养标本）。婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位）血培养标本。说明：在采集血培养后的2-5天内，无需重复采集血培养。只有在怀疑感染性心内膜炎或其它血管内感染（如导管相关性感染）时，才有必要间隔多次采集血培养。5.运送要求要求：（1）采集后的血培养瓶应立即送往实验室，室温放置不要超过2小时。（2）血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏和冷冻。说明：血培养瓶冷藏或冷冻会将一些微生物杀灭，将装着液体的容器冰冻也会使容器破裂。02PART痰液标本采集与运送痰液标本采集与运送02PART（一）、痰液检测采集指征1.凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道标本。2.对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。痰液标本采集与运送02PART（二）、采集方法1.自然咳痰法以清晨第一口痰为好。用清水反复漱口后，用力咳出呼吸道深部的痰（或可轻拍背部），直接置于无菌容器中（采集量≥1ml），尽快送检。痰量极少或痰浓不易咳出者者可用45℃10%氯化钠液雾化吸入导痰。不能及时送检的标本，室温保存≤2小时。要求采到肺深部的痰液，切勿混入唾液及鼻咽分泌物。√在抗生素应用前采集痰标本;√标本采集后1～2h内必须立即进行实验室处理；√取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口;√深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导;√对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2～3天；不建议24小时内多次采集，除非痰液外观性状改变；√怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检。痰液标本采集与运送02PART（二）、采集方法2.小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，用棉拭子深入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部和气管分泌物，粘在棉拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。3.支气管镜采集法–-经支气管镜直接吸引–-支气管肺泡灌洗–-防污染样本毛刷痰液标本采集与运送02PART（三）、注意事项1.痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。室温下耽搁数小时，定植于口咽部的非致病菌过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显降低。2.在临床上咳痰仍是诊断肺部感染最常用的标本，但咳痰也最易被口咽部正常菌群污染。痰液标本的细菌学检验，必须区分是病原菌还是来自上呼吸道的正常菌群。经过洗涤处理的痰液或自气管镜采集及气管穿刺所获标本，结果比较可靠。3.由于口腔和咽部存在大量的革兰阳性和革兰阴性厌氧细菌，而且缺乏可靠的方法区分它们究竟是致病菌还是定植菌，因此不主张对痰液标本进行厌氧菌培养。4.约有1/4～1/2肺部感染患者可能发生菌血症，建议同时做血培养。03PART尿液标本采集与运送尿液标本采集与运送03PART（一）、尿培养标本送检指征1.有典型的尿路感染症状；2.有肉眼脓尿或血尿；3.尿常规检查白细胞或亚硝酸盐阳性；4.有不明原因的发热，无其他局部症状；5.留置导尿管的患者出现发热；6.膀胱排空功能受损；7.泌尿系统疾病手术前；8.有尿路感染症状者，前次培养结果阴性或抗菌治疗48h后仍持续发热。9.抗生素停药后，感染症状再次出现。尿液标本采集与运送03PART（二）、采集方法标本采集应在使用抗生素之前，避免消毒剂污染标本。1．清洁中段尿留取清晨清洁中段尿标本，先用肥皂水仔细清洗会阴部及尿道口周围，再用清水冲洗；将前段尿弃去，留取中段尿10ml左右于无菌容器内，立即加盖送检，2h内接种。该方法简单、易行，是最常用的尿标本收集方法。2.直接导尿按常规方法对会阴局部进行消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液，可减少尿液标本污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能下尿道细菌进入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。尿液标本采集与运送03PART（二）、采集方法3．耻骨上膀胱穿刺无菌操作，无菌取尿，使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。4．小儿收集包无自控能力的小儿可用收集包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用膀胱上穿刺或导尿法留取标本进行复检。5．留置导尿管收集尿液用导尿管导取10-15ml尿液置灭菌容器内送检。长期留置导尿管者，应在更换新导尿管后留取尿标本。留置导尿患者应消毒导尿管外部及尿管口，采取无菌操作方法，用注射器通过导尿管吸取尿液。注意防止混入消毒剂，不能从尿液收集袋中采集尿液。尿液标本采集与运送03PART（三）、采集时间和标本运送1.应选择在抗菌药物应用前或停用抗菌药物5天后采集尿液。2.通常采集清晨第1次尿液送检，确保尿液在膀胱内停留4小时以上，使细菌有足够时间繁殖，可以降低培养结果的假阴性率。嘱患者睡前少饮水，以免尿液稀释导致尿菌计数偏低。3.怀疑沙门菌感染时应在发病2周左右采集尿液培养。4.对无症状的患者应连续采集3天晨尿送检。5.怀疑结核分枝杆菌感染时，患者应停药1-2天后采集晨尿或24h尿的沉渣部分10-15ml送检。6.标本采集后应立即送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），冷藏保存标本不得超过24小时，且必须在6小时内进行接种，但冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。04PART其它标本采集与运送其它标本采集与运送04PART一、脑脊液标本采集与运送1.采集时间怀疑为脑膜炎的病人，在使用抗生素前应立即采集脑脊液进行培养。3.采集量细菌培养≥1ml，真菌培养≥2ml，抗酸杆菌培养≥2ml。4.注意事项⑴标本采集后应在常温下立即送检（15分钟内），以防细菌死亡。⑵疑似脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应注意保温（35℃），切勿置于冰箱保存。2.采集方法病人应先禁食，由临床医师采用腰椎穿刺术无菌采集：用碘伏对穿刺部位（成人为第3、4腰椎间隙，小儿为第4、5腰椎间隙）进行局部皮肤消毒，插入带有管芯针的空针，进针至蛛网膜间隙，拔去管芯针，收集脑脊液置于无菌螺旋盖管中送检。其它标本采集与运送04PART二、体液（穿刺液）标本采集与运送1.采集时间使用抗生素前，停止用药1-2天或以后，或下次用药前，或选择血药浓度较低时抽取。2.采集方法用碘伏充分消毒皮肤，无菌操作用注射器以外科手术方法抽取或引流体内可疑感染部位的液体（胸水、腹水、胆汁、心包液、关节液、鞘膜液等），将取得的穿刺液以无菌操作直接注入血培养瓶内或无菌螺旋管中送检。3.采集量细菌培养≥1ml，真菌培养≥10ml，抗酸杆菌培养≥10ml。4.注意事项⑴标本采集后应在常温下立即送检（15分钟内），4℃下保存≤24小时。⑵尽量以标本的原始状态送检，不要用拭子送检，也不要将拭子浸入液体标本中运送。其它标本采集与运送04PART三、化脓和创伤标本采集与运送1.采集时间使用抗生素前，停止用药1-2天或以后，或下次用药前，或选择血药浓度较低时抽取。2.采集方法⑴用无菌生理盐水或75%乙醇擦拭病灶表面去除表面渗出物，组织或液体优于拭子；若必须使用拭子，应采集两份，一份用于培养，一份用于革兰染色。⑵开放性脓肿：尽可能抽取脓液置于无菌试管内，或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，从脓肿底部或脓肿壁取样，效果最好。⑶封闭性脓肿：无菌操作，局部消毒后用针及注射器抽取脓液≥1ml，将脓液置于无菌试管内送检。3.注意事项标本采集后应在常温下2小时内送检，保存≤24小时。其它标本采集与运送04PART四、粪便标本采集与运送1.采集时间⑴腹泻病人在急性期用药前采集。⑵沙门菌感染的肠热症患者在2周以后采样。⑶胃肠炎病人在急性期采集新鲜粪便，也就是在腹部痉挛发病6小时内采集脓血或液状便。2.采集方法⑴自然排便法：自然排便后，挑取有脓血、黏液部分的新鲜粪便2-3g，液体粪便取2-3ml，直接置于无菌容器内