布病结核病流行病学调查方案

1附件3：布病、结核病流行病学调查方案一、目标（一）掌握定点县牛羊饲养管理水平、动物卫生状况及流通状况;（二）了解布鲁氏菌病、结核病疫病史；（三）了解定点县布鲁氏菌病和结核病诊断、检疫、监测等防控措施执行情况；（四）通过实验室检测了解定点县奶牛布鲁氏菌病、结核病的发病与感染情况及其影响因素。二、调查范围黑龙江、辽宁、河南、福建、陕西、广西、新疆、宁夏等8省份的16个定点调查县。每个定点县选择2个规模场、5个行政村进行现场调查和抽样检测。规模场、行政村选择应具有代表性，每县采样数量140头，其中规模场每场采样20份，行政村每村采样20份，每个行政村至少选择5户。三、调查方式与内容采用问卷调查、实地调查与实验室抽样检测相结合的方式进行。（一）问卷调查2调查点兽医行政管理部门收集当地畜牧业生产加工、流通信息、当前免疫与疫情信息（农办医[2007]14号文件附表2、3、4），定期报送中国动物卫生与流行病学中心调查分析室。（二）现场调查对规定数量的规模化养殖场及养殖村户奶牛饲养管理水平和防疫条件进行现场调查（见附表3-1）。（三）回顾调查中国动物卫生与流行病学中心联合省级动物疫病预防控制中心对调查点进行实地调查时，填写以下信息：1．近10年奶牛布鲁氏菌病、结核病发病情况（附表3-2、附表3-3、附表3-4、附表3-5）；2．近10年布鲁氏菌病、结核病免疫情况（附表3-6）；3．近10年布鲁氏菌病、结核病监测情况（附表3-7、附表3-8）。（四）抽样检测1．样品采集。在2个规模场随机选择40头奶牛，在5个行政村选择100头奶牛作为被检牛。各被检奶牛，采血10mL分离血清、其中产乳奶牛同时采奶样5mL，检测布病；另外采集抗凝全血5mL，进行结核病γ－干扰素检测。采集样品时应填写附表1-6。2．布病检测。血清样品均分两份，其中一份由调查点3所在县按GB/T18646—2002标准进行检测，另一份由中国动物卫生与流行病学中心按OIEi-ELISA、c-ELISA标准进行检测，奶样样品由中国动物卫生与流行病学中心按GB/T18646—2002和OIEi-ELISA标准进行检测。3．结核病检测。调查点所在县按GB/T18645-2002做皮内变态反应试验，检出的阳性牛在30天内，随机选择30头，采集抗凝全血样品10ml由中国动物卫生与流行病学中心用“牛型结核杆菌γ－干扰素ELISA方法”进行检测、判定。4．流产胎儿与疑似结核病牛病变肺脏的采集、保存与送检。调查点对流产家畜取流产胎儿，扑杀的结核病发病奶牛、阳性检出奶牛和屠宰场检出的病变奶牛取病变肺脏，按要求（见附件3-1）保存并送中国动物卫生与流行病学中心监测室检测。5．检测方法。具体见附件3-2、3-3、3-4、3-5。四、联系人1．流行病学监测室范伟兴0532-856306822．调查分析室沈朝建0532-856486384附表3-1：牛饲养场/户动物防疫卫生状况现场调查表1基本情况调查调查对象：省（自治区、直辖市）市县（区）镇（场）调查者姓名：电话：场/户主姓名：电话：场/户名称邮编：场/户地址饲养时间饲养品种饲养数量0-24月龄24月龄以上母畜公畜饲养方式□圈养□放养□其他场/户所在地地形、地势描述场区／户条件□进场要洗澡更衣□进生产区要换胶靴□场舍门口有消毒池□供料道与出粪道分开消毒□定期消毒□消毒，但不经常□不消毒污水排向□附近河流□农田沟渠□附近村庄□野外湖区□野外水塘□野外荒郊□其他粪便处理□直接用作肥料□发酵后用作肥料过去一年曾发生的疫病2牛来源及其淘汰情况□自繁自养□从外购入□部分自繁、部分从外购入2.1如果购入，其来源地2.2购买的奶牛混群前，是否进行隔离观察：□是□否2.3奶牛淘汰原因□发生传染病□发生代谢病□老弱□其他2.4每年大概淘汰数量头3牛奶收集、保存及销售情况3.1挤奶方式□人工挤奶□本场机械化挤奶□是否共用挤奶器53.2挤奶人员□雇用人员□家庭成员3.2.1挤奶人员是否曾患下列疫病：□布病□结核□无3.3牛奶出售□自己出售□商贩到家购买□送到牛奶收购站4本场/村技术能力4.1本场/村是否有专业技术服务人员□有□没有4.2发生疫病时，防治人员来自□本场兽医□农户自身□地方兽医□其他技术人员5饲料及反刍动物肉骨粉使用情况5.1本场以前所用饲料来源：□购入□自己生产5.1.1如果自己生产，所用动物源性原料种类：□骨粉□肉骨粉□鱼粉；主要来源地：；最早使用日期年月，使用时间：年；5.1.2如果从外购入，主要来源地：；是否含反刍动物肉骨粉：□含□不含□不清楚。5.2本场现在所用饲料：□购入□自己生产5.2.1如果自己生产，所用动物源性原料种类：□骨粉□肉骨粉□鱼粉；主要来源地：；最早使用日期年月，使用时间：年。5.2.2如果从外购入，主要来源地：；是否含反刍动物肉骨粉：□含□不含□不清楚。5.3牛饲料中是否使用过反刍动物源性肉骨粉？□用过□没用过□不清楚；5.3.1如果使用，最早使用日期年月，使用时间：年5.3.2反刍动物源性肉骨粉主要来源地：；5.4饲料或饲料原料使用前是否消毒：□是□否5.4.1如果消毒，消毒方法：□熏蒸消毒□紫外线消毒□其他6免疫与预防性用药情况6.1疫苗免疫种类□口蹄疫□布鲁氏菌病□其他，请填写6.2是否经常进行预防性用药□否□是，请列出种类7病死畜处理情况□直接掩埋□无害化处理后掩埋□出售□自己食用或出售其肉品6附表3-2：定点县布鲁氏菌病发病情况调查表省县邮编：电话：传真：年度乡镇/场数场/村数户数畜群空怀流产情况检疫执行情况血清学检测情况病原学检测情况捕杀情况免疫情况发病人数饲养数空怀率流产率年检疫次数检疫方法检测数平板凝集阳性数/率试管凝集阳性数/率检查数阳性数阳性率扑杀数扑杀率捕杀补偿免疫数免疫率使用疫苗填表说明：1．该表由县（市、区、旗）动物疫病控制机构分年度填写，包括2007年及历年来的布病检疫情况。2．病原学检测是指细菌分离鉴定情况，PCR检测需要单独标注。3．捕杀补偿是指在捕杀时对饲养场及农户的补偿情况，包括是否有补偿、补偿标准是否按照市场价补偿等。7附表3-3：定点县布鲁氏病检出阳性情况调查表填报单位（盖章）：省县（市、区、旗）邮编：电话：传真：检疫时间乡镇/场名场/户名称饲养数检疫阳性数检疫阳性率地区情况（牧、农、半农半牧区，集约化或散养）检出阳性前家畜及畜产品流动情况检出阳性后家畜及畜产品流动情况阳性隔离数阳性隔离率阳性淘汰数阳性淘汰率阳性家畜及畜产品处理情况畜场职工发生布病数畜场职工发生布病率发病或出现阳性的原因判定填表说明：1．该表由县（市、区、旗）动物疫病控制机构分年度填写，包括2007年及历年来的布病检疫阳性情况。2．地区情况是指在牧区、农区、半农半牧区中选择一个；在集约化、散养中选择一个填写，如农区、散养。3．发病后家畜及畜产品流动情况是指在发病后是否输出过奶牛及其他活畜，是否进行检疫，牛奶、牛肉等畜产品是否经过灭菌后出售等情况。4．发病后家畜及畜产品的处理情况是指发病后家畜是否进行隔离、捕杀等，畜产品是否进行灭菌处理。8附表3-4：定点县奶牛结核病历史情况调查表填报单位：省县（市、区、旗）邮编：电话：传真：年度乡镇/场数村/场数户数饲养数年检疫次数免疫学检疫情况病原学检测情况捕杀情况免疫情况屠宰场表现结核病变数发病或阳性原因单纯牛PPD检疫阳性数/率比较皮试阳性数/率检查数阳性数阳性率扑杀数扑杀率捕杀补偿免疫数免疫率使用疫苗填表说明：1．该表由县（市、区、旗）动物疫病控制机构分年度填写，包括2007年及历年来的结核病检疫情况。2．单纯牛PPD检疫是指仅使用牛PPD进行的检测，比较皮试是指同时利用禽PPD进行的检测。9附表3-5：定点县奶牛结核病检出阳性情况调查表填报单位：省县（市、区、旗）邮编：电话：传真：检疫时间乡镇/场名户/场名饲养数检疫阳性数检疫阳性率地区情况检出阳性前家畜及畜产品流动情况检出阳性后家畜及畜产品流动情况阳性隔离数阳性隔离率阳性宰杀数阳性宰杀率宰杀时发现结核病变数宰杀时发现结核病变率宰杀时结核的病变情况发病后家畜及畜产品的处理情况畜场职工（含亲属）发生结核数畜场职工（含亲属）发生结核率发病或出现阳性的原因判定填表说明：1．该表由县（市、区、旗）动物疫病控制机构分年度填写，包括2007年及历年来的结核病检疫阳性情况。2．地区情况是指在牧区、农区、半农半牧区中选择一个；在集约化、散养中选择一个填写，如农区、散养。3．发病后家畜及畜产品流动情况是指在发病后是否输出过奶牛及其他活畜，是否进行检疫，牛奶、牛肉等畜产品是否经过灭菌后出售等情况。4．发病后家畜及畜产品的处理情况是指发病后家畜是否进行隔离、捕杀等，畜产品是否进行灭菌处理。10附表3-6：定点县近5年布鲁氏杆菌病免疫情况填报单位：联系地址、邮编：联系电话：传真：单位：头填表人：填报日期：责任人：注：本表由定点县（市、区、旗）动物疫病控制机构填写。年份疫苗种类免疫数免疫率S19羊5号苗（M5）猪2号苗（S2）牛羊猪牛羊猪11附表3-7：定点县近5年布鲁氏菌病监测情况填报单位：联系地址、邮编：联系电话：传真：单位：头（只）年份监测动物种类监测场点情况血清学监测病原学监测情况备注规模场散养户市场屠宰场免疫监测情况非免疫监测情况种畜场商品场采样数检测数阳性数采样数检测数阳性数阳性率（%）采样数检测数阳性数阳性率（%）牛羊猪牛羊猪牛羊猪牛羊猪填表人：填报日期：责任人：注：本表由定点县（市、区、旗）动物疫病控制机构填写。12附表3-8：定点县近5年结核病监测情况填报单位：联系地址、邮编：联系电话：传真：单位：头（只）年份监测动物种类监测场点情况血清学监测病原学监测情况备注规模场散养户市场屠宰场免疫监测情况非免疫监测情况种畜场商品场采样数检测数阳性数采样数检测数阳性数阳性率（%）采样数检测数阳性数阳性率（%）奶牛羊猪奶牛羊猪奶牛羊猪奶牛羊猪填表人：填报日期：责任人：注：本表由定点县动物疫病控制机构填写。13附件3-1：样品采集、包装、运送方案样品采集、包装、运送应由经过培训的兽医技术人员进行操作，实验室检测由专业实验技术人员进行操作。一、样品采集、包装和运送（一）采样器材准备1．防护服、无粉乳胶手套、防护口罩等。2．灭菌的剪刀、镊子、手术刀、注射器、针头等。3．可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔、空白标签纸、胶布等。4．用来采集器官、组织的带螺口盖的塑料管等灭菌容器。5．血平板和增菌培养瓶。6．带有冰袋或干冰的冷藏容器。7．病料送检单。（二）样品的采集采集流产的胎儿（胃内容物、脾、肺、淋巴结）、胎膜、阴道分泌物（棉试签）、发病牛捕杀后的肺部及其他组织的结核病变、屠宰场发现的类结核病变和全血、血清等样品。（三）样品运输保存与运输1．装病料的容器要作好标记。142．冷藏容器应包装完善，防止运输中破损。3．采集的样品如不能马上进行检测，则应立即置于安全密闭的保温容器中冷藏运输。4．用来检测的标本可在4－8℃冰箱暂放，剩余样品应放置于－70℃保存。（四）注意事项1．采样过程应严格无菌操作，采取一头家畜的病料，使用一套器械和容器，避免混用。2．用于分离培养的标本应在抗菌治疗前采集。3．在标本采集过程中，应穿戴防护用具，注意安全防护，严防剪、刀、针头等锐器刺伤。15附件3-2：牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测操作规程一、简介牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测的原理基于血液T淋巴细胞对牛结核菌素PPD的细胞免疫反应。结核菌素PPD抗原递呈到全血组织培养物中的淋巴细胞后，感染牛结核杆菌的细胞就能产生IFN-γ，并通过基于单克隆抗体的夹心ELISA检测到。未感染牛结核杆菌的淋巴细胞不会产生IFN-γ，因此，γ-干扰素的检测与牛结核杆菌感染密切相关。二、试验所需材料（一）血液培养所需材料肝素锂真空管每头动物1支18号针头－1英寸每头动物1支针管每位采血人员2-3支无菌的5或10mL移液器每头动物1根无菌的24孔组织培养板每8头动物1块分装用的枪头（5mL）每群动物3支无菌的磷酸盐缓冲液(0.01MpH7.2)每头动物100µLBovigam牛型提纯结核菌素(PPD)150