免疫学技术在食品安全检测应用

免疫学技术在食品安全检测中的应用组员：Page2小组成员分工资料搜索：PPT制作：后期审阅：所选论文：《免疫学技术在食品安全检测中的应用》论文作者：郎需龙刘文森王兴龙作者所在单位：解放军军事医学科学院军事兽医研究所动物性食品安全研究室论文发表日期：2009年5月25日Page3本小组所选的论文中一共提到8种免疫学技术，但其中只有4种是我们学过的，因此本次的PPT汇报中仅列出了学过的4项。Page4免疫荧光技术论文中提及的检测技术酶联免疫吸附实验免疫芯片免疫传感器技术Page5酶联免疫吸附实验(ELISA)酶联免疫吸附实验(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)，是将可溶性抗原（抗体）吸附到某种固相载体表面，并保持抗原（抗体）免疫活性，这样在与标本中的抗体（抗原）反应后，只需经过固相洗涤的洗涤，就可以达到抗原抗体复合物与其他物质分离，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。Page6试验操作图和试验专用仪器Page7试验所需试剂Page8Page9ELISA法在食品安全监测中的应用1977年LaWell首先采用了ELISA法来检测了黄曲霉毒素，目前食品中许多致病菌如沙门氏菌、大肠杆菌O157等微生物都可用此方法来进行检测。另外主要的药物残留如抗生素类，碘胺药类、呋喃类、抗球虫类，激素药类和驱虫药类等的ELISA检测方法都已经建立。其中T-2毒素、黄曲霉毒素B1、脱氧雪腐镰刀烯醇等的ELISA检测方法已列入我国标准方法。基于ELISA方法的检测抗生素、农药、食品添加剂等的残留检测试剂盒已经实现了产业化。Page10单击此处添加标题间接法双抗体夹心法竞争法捕获法Page11间接法间接法是检测抗体最常用的方法，将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗体）与之结合形成固体抗原复合物。洗涤后，计入酶标二抗与故乡复合物中的抗体结合，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。最后加酶的底物显色，终止反应后，目测性或用酶标仪测光密度值测定，颜色的深度与标本中受检抗体的量成正比。Page12双抗体夹心法双抗体夹心法常用于测定大分子及颗粒多价抗原。将已知抗体A吸附于固相载体上，加入待检标本（喊相应抗原）与之结合形成固相抗体-A-抗原复合物。温育后洗涤，加入酶标抗体B形成固相抗体-A-抗原-酶标抗体B夹心式复合物，固相载体上带有的酶量与标本中待测物质量成正比。最后加入底物，夹心式复合物的酶催化底物成为有色产物，颜色的深度与抗原的量成正比。Page13竞争法将抗原连接到固相载体上，样品中待测抗体与之结合成固相抗原-受检抗体复合物，再用酶标二抗(针对受检抗体的抗体，如羊抗人IgG抗体)与固相免疫复合物中的抗体结合，形成固相抗原-受检抗体-酶标二抗复合物，测定加底物后的显色程度，确定待测抗体含量。Page14捕获法捕获法（亦称反向间接法）ELISA，主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。先将针对IgM的第二抗体（如羊抗人IgMµ链抗体）连接于固相载体，用以结合（“捕获”）样品中所有IgM（特异或非特异），洗涤出去IgG等无关物质，然后加入特异抗原与待检IgM结合；再加入抗原特异的酶标抗体，最后形成固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体复合物，加酶底物作用显色后，即可对样品中待检IgM是否存在及其含量进行测定。Page15免疫荧光技术Page16免疫荧光技术基本原理：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光（黄绿色或橘红色），可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。Page17Page18方法分类直接法间接法补体法Page19直接法Page20Page21Page22免疫传感器技术Page23免疫传感器技术是将免疫测定技术和传感器技术相结合的一类新型生物传感器，该技术具有精确度、灵敏度高、特异性强、样品前处理简单的特点。其选择性好、操作简单、携带方便、能重复利用，并能实现现场检测盒在线检测等优点，有望成为食品安全检测中最有效的新技术。Page24免疫传感器是以抗原抗体作为分子感应器的生物传感器，利用抗原与抗体专一性结合引起的直接或间接物理化学变化，通过一定的信号转化，大多转化为光信号，再经过放大处理即可检测出反应物量的变化，通过相关仪器可以进行某些物质的分析检测。免疫传感器一般有三部分组成：分子感应器、转导体、电子滤波放大器免疫传感器类型：非标记免疫传感器和标记免疫传感器Page25非标记免疫传感器抗原抗体直接或间接的方式连接至转导体上，当抗原和抗体在相互结合后，它们的结构发生了变化，这种结构的改变可以通过化学、光学、压电和热量改变的变化表现出来，从而能被转导体直接或间接检测到。Page26标记免疫传感器标记免疫传感器不是直接检测抗原抗体反应，而是检测免疫复合物上标记物的信号（如荧光、放射性、酶催化反应），因为使用了具有化学放大作用作用的标记物，因此，其灵敏度比非标记免疫传感器有显著提高。Page27免疫传感器在食品中的应用免疫传感器在食品中的应用，主要体现在对食品中的有毒有害物质的检测。食品中的有毒有害物质有生物性物质，如细菌、真菌、有毒动植物和病毒及其产生的毒素或特征蛋白质。目前已成功运用于测定污染食品的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门菌，利用光纤传感器与核酸放大系统相偶联，可检测食品中的少量病原菌、非生物性有毒有害物质（包括农药、激素等小分子半抗原物质）。Page28免疫芯片Page29免疫芯片分析的实质是在很小的表面积上有序的集成多重抗原（或抗体），利用抗原与抗体可进行特异性的结合反应来进行检测。免疫芯片是由于固定于不同种类支持载体上的抗原或抗体微阵列组成，阵列中固定成分的位置及组成是已知的，用标，然后精确定位提取信号，通过计算机综合记录分析。免疫芯片根据原理不同可分为间接法、双抗体夹心法、竞争法免疫芯片和免疫-PCR芯片。Page30免疫芯片构建步骤一、确定检测目标，建立抗原抗体库二、载体及抗原或抗体的固定三、抗原抗体反应与分析检测Page31免疫芯片技术的优点只需要少量的样品，最突出的优点是通过一次检测即可获得几种甚至几万种有关的生物信息或疾病的检测结果，并且能检测到样品中很低浓度的抗原。与现行检测方法比，具有信息量大、快速、及时、操作简便、生产成本低、用途广泛以及自动化程度高等优点。