氯霉素检测培训课件

动物源食品中氯霉素类药物的测定液相色谱-串联质谱法GB/T20756-2006李兴珍2017.12.05Page2一、氯霉素类药物的介绍二、实验原理三、检测步骤四、LC-MS参数五、技术要求及检出限六、注意事项主要内容氯霉素又名氯胺苯醇，是由氯链丝菌产生的一种具有抑制细菌生长作用的广谱抗菌素，天然氯霉素是左旋体(也称左霉素)。合成品为白色或微黄色针状或片状晶体，无臭，味极苦，稍溶于水、乙醚和氯仿，易溶于甲醇、酒精、丙酮或乙酸乙酯，不溶于苯和石油醚。可用于治疗伤寒菌痢、尿道感染、百日咳、肺炎、败血症等疾病。氟苯尼考用途：动物专用抗菌药，用于敏感细菌所致的猪、鸡及鱼的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗效显著。氯霉素类药物介绍氯霉素结构中芳香环上对位硝基是引起再生障碍性贫血的主要基团，氟苯尼考在结构上以H3C－SO2取代了O2N用药后不产生再生障碍性贫血的不良反应，因此在动物疾病防治上，尤其是食品动物，氟苯尼考将替代氯霉素，在兽医临床具有广阔应用前景甲砜霉素为白色到类白色结晶性粉末或晶体，在二甲基甲酰胺中易溶，在无水乙醇中略溶，在水中微溶。临床上主要用于治疗呼吸、泌尿、肝胆、伤寒等肠道外科、妇产科和五官科感染等症，特别对中轻度感染作用尤其明显。氯霉素类药物介绍•骨髓抑制：可逆性骨髓抑制是本药最严重的不良反应。此反应与用药剂量及疗程有关，常见于血药浓度超过25μg/ml的患者。临床表现为贫血，并可伴白细胞和血小板减少等。•再生障碍性贫血：用药后发生再生障碍性贫血者罕见。其临床表现有血小板减少引起的出血倾向，并发淤点、淤斑和鼻出血等，以及由粒细胞减少所致感染征象，如高热、咽痛、黄疸等。•灰婴综合征：尚未发现早产儿及新生儿有使用本药致“灰婴综合征”的报道，仅有出现短暂性皮肤和面色苍白的个案报道。•肝毒性：原有肝病者用药后可能引起黄疸、肝脂肪浸润、甚至急性重型肝炎。不良反应•神经系统：长期用药后可出现周围神经炎和视神经炎，表现为听力减退、失眠、幻视、谵妄等神经系统症状，多属可逆性。也有长期用药后发生视神经萎缩而致盲的报道。•胃肠道反应：用药后出现食欲减退、恶心、呕吐、上腹不适和腹泻等胃肠道症状较为常见，其发生率约在10%以下•二重感染：长期用药后可使体内正常菌群减少，引起二重感染。•其他：(1)某些先天性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶不足的患者用药后可发生溶血性贫血；(2)长期口服给药，可能抑制肠道菌群而使维生素K合成受阻，诱发出血倾向。•2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，氯霉素在2A类致癌物清单中不良反应GB/T20756-2006实验原理2.1实验原理试样中的氯霉素类药物，用乙酸乙酯提取。提取液旋转蒸干后，液相色谱仪—串联质谱仪测定，内标法定量。3.1试样制备从样本中取具有代表性的1kg样品，均分为两份，装入洁净样品袋中，标记标明清楚，取其一份用组织捣碎机绞碎均匀。3.2试样的保存将试样于-18℃下保存。检测步骤3.3提取：称取制备好的试样2g（精确至0.01g）样品于50mL离心管中，加入内、外标准工作液和15mL乙酸乙酯，涡旋混合均匀，超声提取30min，11000r/min离心10min，取上清液于鸡心瓶中，下层再加入15mL乙酸乙酯，重复提取一次，合并两次清液，旋转蒸发至近干，残渣用1mL乙腈:水（1:9）复溶，加入10ml正己烷混合均匀，吸取下层澄清液体过0.22um有机相过滤头，上机LC-MS/MS测定。检测步骤3.4标准曲线的绘制标准溶液配制的浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以定量离子峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作图，得到标准曲线回归方程。3.5空白试验取空白试料，采用完全相同的测定步骤进行平行测定检测步骤Page11LCsystemColumnInjectionVolumn:Agilent1290RRLC:AgilentZorbaxPlus-C18,2.1×100mm,3.5µm:10µLTemp:30℃FlowrateMobilephase:0.3mL/min:A-0.5%的甲酸水含5mmoL/L乙酸铵:B-AcetonitrileGB/T20756-2006的方法液相条件如下：LC-MS参数Page12◆MSsystem◆Ionsource◆Polarity◆SourceTemp◆GasFlow◆Nebulizer◆SheathGasTemp◆SheathGasFlow◆Capillary◆Resolution◆Scanmode:Agilent6460LC/MS/MS:ESI:Postive:325℃:6L/min:45psi:400℃:12L/min:3500V:Q1(wide)Q3(unit):MultipleReactionMonitoring(MRM)4.2MSParametersLC-MS参数技术要求及检出限项目名称检验依据单位表达技术要求检出限甲砜霉素GB/T20756-2006ug/kg＜50.01.0氟苯尼考＜100.01.0氯霉素不得检出0.1注意事项•1.加标要加好，加对,内外标千万不要加混。•2样品制备过程避免样品污染和被分析物残留量变化。•3离心结束后尽快转移上清液，避免底部残渣散开，影响后续操作。•4控制好旋蒸温度和压力，避免速度过快导致被分析物损失。•5操作过程中严禁涂抹护手霜等含有氯霉素类药物的护肤产品。•6整个实验操作过程中须在通风橱内进行，佩戴好适合的劳动防护用品，既保护自己也确保实验的准确性。