生物实验常用溶液的配制(整理版)

生物实验常用溶液的配制一、DNA电泳相关：1、DNA电泳缓冲液：（1）Tris-乙酸（TAE）缓冲液：TAE较为常用，且价格低，但其缓冲能力较弱。所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环，而且TAE需要经常更新；且要加入EDTA，目的在于鳌合二价离子，抑制DNase，以保护DNA。①TAE使用液：1×：40mmol/LTris-乙酸1mmol/LEDTA②TAE贮存液（每L）：50×：242gTris碱57.1ml冰乙酸100ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）（2）Tris-硼酸（TBE）缓冲液：①TBE使用液：0.5×：0.045mol/LTris-硼酸1mmol/LEDTA②TBE贮存液（每L）：5×：54gTris碱27.5ml硼酸20ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）（3）Tris-磷酸（TPE）缓冲液：①TPE使用液：1×：90mmol/LTris-磷酸2mmol/LEDTA②TPE贮存液（每L）：10×：108gTris碱15.5ml85%磷酸40ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）2、1%（线性DNA分子大小为400-6000）琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程：①制胶：按要求取1g琼脂糖加入1×TAE（或0.5×TAE）电泳缓冲液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴或微波炉中加热至琼脂糖溶解（一般中低火温，3-5min即可）；②溶液冷却至60℃，加入EB至0.5μg/ml（2-3ml即可）,充分混匀；③迅速倒入备好的胶模中；④凝胶完全凝固后，小心移去梳子和封口胶带，将凝胶放入电泳槽中；⑤加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液（TAE）；⑥DNA样品与加样缓冲液（溴酚蓝）混合后，用微量移液吸头加样；⑦盖上电泳槽并通电，使DNA向正极移动（黑极→红极），1-5V/cm（80V电压左右）进行电泳（30min左右）；⑧电泳完毕，切断电源，取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。二、12％SDS-PAGE的相关溶液1、5×加样缓冲液：10%w/vSDS，10mMDTT或β-巯基乙醇，20%v/v甘油，0.2MTris-HClpH6.8，0.05%w/v溴酚蓝。（注意：将不含DTT的1×SDS凝胶上样缓冲液置于室温下储存，临用前从1mol/LDTT储液中添加到上述缓冲液中。）5×SampleBuffer：10%w/vSDS10mmol/LDithiothreitol,orbeta-mercapto-ethanol20%v/vGlycerol0.2mol/LTris-HClpH6.80.05%w/vBromophenolblue另：2×SDS上样液缓冲液:100mL溶液中含0.5mol/LTris-HCl(pH=6.8)20mL,SDS4g,甘油20mL,溴酚蓝0.2g,DTT3g;2、1×电泳缓冲液：25mMTris-HClpH8.8，200mM甘氨酸，0.1%w/vSDS。1×RunningBuffer25mmol/LTris-HClpH8.8200～250mmol/LGlycine（电泳级）（pH8.3）0.1%w/vSDS可以配成5×贮存液，在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱和94g甘氨酸，然后加入50ml10%（m/v）电泳级SDS的贮存液，用去离子水补至1000ml即可。3、分离胶配方：H2O10.5，1.5MTris-HClpH8.87.5，20%w/vSDS0.15，30%丙烯酰胺/0.8%亚甲双丙烯酰胺(/w/v)12.0，10%w/v过硫酸铵15，TEMED0.02（单位：mL，总体积25mL）。注：过硫酸铵会缓慢分解，故应每周新鲜配制，可用去离子水配制少量10%（m/v）储存液于4℃保存。RunningGelSolution(mL)：H2O10.21.5mol/LTris-HClpH8.87.520%SDS(w/v)0.15Acrylamide/Bis-acrylamide(30%/0.8%w/v)12.010%ammoniumpersulfate(w/v)0.15TEMED0.024、积层胶配方(4%丙烯酰胺)：H2O3.05，0.5MTris-HClpH6.81.25，20%w/vSDS0.025，30%丙烯酰胺/0.8%亚甲双丙烯酰胺(/w/v)0.65，10%w/v过硫酸铵0.025，TEMED0.005（单位：mL，总体积5mL）。StackingGelSolution(4%Acrylamide)(mL)：H2O3.0750.5mol/LTris-HClpH6.81.2520%SDS(w/v)0.025Acrylamide/Bis-acrylamide(30%/0.8%w/v)0.6710%ammoniumpersulfate(w/v)0.025TEMED0.0055、考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R250溶解于90mL甲醇：水（1:1v/v）和10mL冰乙酸的混合液中，过滤除去颗粒状物质。（或考马斯亮蓝R-2500.5g,乙醇250mL,乙酸110mL,水740mL,混匀;）另：0.2％考马斯亮兰R-250染液：甲醇46.5ml醋酸7.0ml考马斯亮兰0.2g蒸馏水加至100ml6、脱色液：170mL甲醇,加70mL冰乙酸，加蒸馏水定容至1000mL。三、蛋白质纯化的相关溶液1、超声破菌缓冲液：20mmol/LTris-HClpH8.0、0.5mol/LNaCl、1mmol/LEDTA、1mg/mL溶菌酶2、包涵体洗涤缓冲液：20mmol/LTris－HClpH8.0，0.5mol/LNaCl，2mol/L尿素，2％Triton。3、包涵体溶解缓冲液：20mmol/LTris－HClpH8.0，0.5mol/LNaCl，8mol/L尿素，0.2mmol/LDTT或100mmol/Lβ-巯基乙醇，2％Triton。4、Ni2+亲和层析柱纯化缓冲液：ReagentsBindingBufferWashBufferEluteBufferStripBufferChargeBufferTris-HClpH7.920mM20mM20mM20mMImidazole5mM60mM1MNaCl0.5M0.5M0.5M0.5MEDTA100mMNiSO450mM结合缓冲液（pH7.8）：20mmol/L磷酸钠500mmol/LNaCl洗涤缓冲液（pH6.0）：20mmol/L磷酸钠500mmol/LNaCl咪唑洗脱缓冲液（pH6.0）：20mmol/L磷酸钠500mmol/LNaCl在洗涤缓冲液（pH6.0）中加入适量3mol/L咪唑分别配成10mmol/L、50mmol/L、100mmol/L和150mmol/L的咪唑洗脱缓冲液。TritonX-100(10%v/v)酶和缓冲液：DNase(1mg/ml)溶菌酶RNase(1mg/ml)5、2％TritonX－100溶液：量取2mlTritonX一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。6、50％PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycolmwl500)：称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37℃予热的MEM培养液，混匀，保温在37℃水浴中待用。7、1％SDS(十二烷基硫酸钠Sodiumdodecylsulfate,SDS)：SDS10g45％乙醇100ml8、1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液TrihydroxymethylaminomethaneTris/HCL)pH7.8：Tris12.114g蒸馏水lOOml先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml四、PH缓冲液的配制：（1）磷酸缓冲盐溶液（PBS）：①137mmol/LNaCl2.7mmol/LKCl10mmol/LNa2HPO42mmol/LKH2PO4用800ml蒸馏水溶解8gNaCl，0.2gKCl，1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4。用HCl调节溶液的PH值至7.4，加水至1L。分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压蒸汽灭菌20min，或过滤除菌，保存于室温。（注：PBS是一种通用试剂，值得指出的是上述列出的配方缺乏双价阳离子，如果需要，PBS可以补加成1mmol/LCaCl2和0.5mmol/LMgCl2）②0.01mol／LPBS(磷酸盐缓冲液PhosphateBufferSaline，PBS)，pH7.2：A：0.2mol／L磷酸氢二钠液(甲液)：NaH2PO4·12H2O35.814g双蒸水加至500mlB：0.2mol／L磷酸二氢钠液(乙液):NaH2PO4·2H2O15.601g双蒸水加至500ml取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。③1/15mol/LPBS(磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution，PBS)：甲液：1/15mol/LNa2HPO4溶液Na2HPO49.465g蒸馏水加至1000ml乙液：l/15mol/LKH2PO4溶液KH2P049.07g蒸馏水加至1000m1分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH甲液ml乙液mlpH甲液ml乙液ml4.925.295.595.916.246.476.646.811.02.55.010.020.030.040.050.099.097.595.090.080.070.060.050.06.987.177.387.738.048.348.678.1860.070.080.090.095.097.599.0100.040.030.020.010.05.02.51.00（2）10×TrisEDTA(TE):①pH7.4:100mmol/LTris-Cl(pH7.4)10mmol/LEDTA(pH8.0)②pH7.6:100mmol/LTris-Cl(pH7.6)10mmol/LEDTA(pH8.0)③pH8.0:100mmol/LTris-Cl(pH8.0)10mmol/LEDTA(pH8.0)分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压蒸汽灭菌20min，保存于室温。（3）Tris-Cl（1mol/L）:用800ml蒸馏水溶解121.1gTris碱，加浓盐酸调pH至所需值。pHHCl7.470ml7.660ml8.042ml应使溶液冷至室温后，方可最后调定pH值。加水定容至1L。分装后高压蒸汽灭菌。如果1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃。并使用质量更好的Tris。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03单位，0.05mol/L溶液在5℃，25℃和37℃时的pH值分别为9.5，8.9和8.6。（4）Tris缓冲盐溶液（TBS）：用800ml蒸馏水溶解8gNaCl，0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015g酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L。分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压下蒸汽灭菌20min，保存于室温。五、常用缓冲液配制：（1）碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液贮备液A：0.2mol/L碳酸钠（Na2CO3·H2O24.8g配成1000ml）；贮备液B：0.2mol/L碳酸氢钠（NaHCO316.8g配成1000ml）。xmlA液+ymlB液稀释至200mlpHxypHxy9.24.046.010.027.522.59.37.542.510.130.020.09.49.540.510.233.017.09.513.037.010.338.514.59.616.034.010.438.511.59.719.530.510.540.39.59.822.028.010.642.57.59.925.025.010.745.55.0（2）磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液贮备液A：0.2mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO3·H2O27.6g或NaH2PO3·2H