Phyto-pam操作应用指南

浮游植物分类荧光仪PHYTO-PAM操作应用指南‹使用注意事项‹简易操作流程‹应用指导‹软件操作指南‹快速光曲线拟合方法‹文献目录泽泉科技有限公司ZealquestScientificTechnologyCo.,Ltd泽泉生态开放实验室ZealquestLaboratoryforEcologicalResearch上海总部：中江路879号天地软件园28幢402-403座(200333)电话：[phone]/7/8传真：[phone]北京分公司：西三环北路72号世纪经贸大厦2600室(100037)电话：[phone]传真：转605分机广州代表处：天河区马赛国际公寓C栋2213A(510632)电话：[phone]传真：转806分机成都代表处：人民南路一段97号现代之窗1018室(610016)电话：[phone]传真：[phone]新疆代表处：乌鲁木齐人民路33号瑞达国际大厦1501室(830004)电话：[phone]传真：[e-mail]泽泉科技有限公司ZealQuestScientificTechnologyCo.,Ltd上海市中江路879号天地软件园28号楼402-403室（邮编：200333）:021-51556111E-Mail:[e-mail]-PAM使用注意事项1.PHYTO-PAM属于高级研究型仪器，仪器应轻拿轻放，操作前请仔细阅读操作指南。2.仪器应放置在防潮、防尘、通风、远离热源的地方。3.建议使用带过载保护功能的接线板连接仪器，以防止由于电压剧烈波动造成仪器烧坏。4.室内使用时可以一直连接外接电源；野外测量完后，应立即充满电；仪器长期放置不用时，也应当每隔3个月充电一次。5.当仪器内置电池的电压降到11V附近时，会发出低电警报，此时应马上关机，然后连接交流电源充电。一块空电池充满电约需12小时。6.仪器所有接头都应在关机状态下插拔，严禁在开机状态下插拔接头，严禁在开机状态下连接交流电源，严禁在开机状态下连接电脑！7.激发-检测单元PHYTO-ED上的“红灯亮”表明检测器处于“关闭”状态，“绿灯亮”表明检测器处于“打开”状态。默认状态下红灯亮，测量时需手工打开检测器（绿灯亮）。在打开样品盖时，一定要先按一下红色按钮等红灯亮后再打开样品盖！8.安装完PhytoWin软件后，一定要将Config光盘里所有的文件拷贝到“桌面/PhytoPamFolder/Data_ED”下，才能正常运行软件。9.PHYTO-ED的发光二极管（LED）发出的光非常强，在打开饱和脉冲或打开较强的光化光时，请勿打开样品盖用肉眼直视光源，以防灼伤。10.如果样品有较强的本底荧光（黄色物质发出），建议利用微孔过滤器制作过滤水样，利用滤液做为空白消除本底荧光的影响。泽泉科技有限公司ZealQuestScientificTechnologyCo.,Ltd上海市中江路879号天地软件园28号楼402-403室（邮编：200333）:021-51556111E-Mail:[e-mail]简易操作流程1．检查仪器连接，连好后开机，并打开PhytoWin软件2．取出样品杯，放入样品1-2ml（每次体积应统一），盖上盖子后暗适应3．点击Gain，调节最适信号强度4．在Settings窗中设置Meas.Freq.为2，切换到Channels窗，点击SAT-Pulse，测量Fv/Fm（此时的Y为Fv/Fm）5．在Settings窗中设置Meas.Freq.为32，切换到Channels窗，点击Chl[MF32]，测量叶绿素a浓度6．切换到LightCurve窗，点击Start测量光响应曲线7．换样品继续测量8．测量完成后，切换到Report窗，点击File/SaveReport，存储数据泽泉科技有限公司ZealQuestScientificTechnologyCo.,Ltd上海市中江路879号天地软件园28号楼402-403室（邮编：200333）:021-51556111E-Mail:[e-mail]浮游植物分类荧光仪PHYTO-PAM应用指导泽泉生态开放实验室浮游植物分类荧光仪PHYTO-PAM作为国际上第一台可根据浮游植物色素组成不同而对其进行分类的荧光仪，面世16年在国际科研和监测领域得到了广泛而成功的应用。PHYTO-PAM的主要功能是：1）根据藻类主要捕光色素对光谱的吸收不同，对自然水样中的蓝藻、绿藻、硅/甲藻自动分类（定性）；2）利用叶绿素荧光技术测量蓝藻、绿藻、硅/甲藻分别的叶绿素a浓度以及水样的总叶绿素a浓度（定量）；3）利用调制叶绿素荧光技术测量水样中蓝藻、绿藻、硅/甲藻的光合作用活性，包括藻细胞的“生长潜能”、藻细胞耐受强光的能力等（光合）。为了协助广大用户更深入的了解PHYTO-PAM，更好的发挥PHYTO-PAM的强大功能，泽泉生态开放实验室撰写了这份应用指导，希望对广大用户有所帮助。1.PHYTO-PAM使用注意事项‹PHYTO-PAM属于高级研究型仪器，仪器应轻拿轻放，操作前请仔细阅读操作指南。‹仪器应放置在防潮、防尘、通风、远离热源的地方。‹强烈建议实验室配置电源稳压器，并使用带过载保护功能的接线板连接仪器，以防止由于电压剧烈波动造成仪器烧坏。‹室内使用时可以一直连接外接电源；野外测量完后，应立即充满电；仪器长期放置不用时，也应当每隔3个月充电一次。‹当仪器内置电池的电压降到11V附近时，会发出低电警报，此时应马上关机，然后连接交流电源充电。一块空电池充满电约需12小时。‹仪器所有接头都应在关机状态下插拔，严禁在开机状态下插拔接头，严禁在开机状态下连接交流电源，严禁在开机状态下连接电脑！‹激发-检测单元PHYTO-ED上的“红灯亮”表明检测器处于“关闭”状态，“绿灯亮”表明检测器处泽泉科技有限公司ZealQuestScientificTechnologyCo.,Ltd上海市中江路879号天地软件园28号楼402-403室（邮编：200333）:021-51556111E-Mail:[e-mail]于“打开”状态。默认状态下红灯亮，测量时需手工打开检测器（绿灯亮）。在打开样品盖时，一定要先按一下红色按钮等红灯亮后再打开样品盖！‹安装完PhytoWin软件后，一定要将Config光盘里所有的文件拷贝到“桌面/PhytoPamFolder/Data_ED”下，才能正常运行软件。‹PHYTO-ED的发光二极管（LED）发出的光非常强，在打开饱和脉冲或打开较强的光化光时，请勿打开样品盖用肉眼直视光源，以防灼伤。‹如果样品有较强的本底荧光（黄色物质发出），建议利用微孔过滤器制作过滤水样，利用滤液做为空白消除本底荧光的影响。2.PHYTO-PAM基本测量流程2.1开机检查仪器连接，连好后开机，并打开PhytoWin软件，选择测量头（绝大多数用户都是选购的PHYTO-ED测量头，选中PHYTO-ED后点击OK即可进入测量界面。泽泉科技有限公司ZealQuestScientificTechnologyCo.,Ltd上海市中江路879号天地软件园28号楼402-403室（邮编：200333）:021-51556111E-Mail:[e-mail]2.2加入样品首先按一下PHYTO-ED上的红色按钮，确保红灯亮。此时仪器检测器关闭，可以打开样品室的盖子更换样品。取出样品杯，用移液器加入2ml样品（检查样品杯外部是否干净，没有水滴？）。将样品杯放入样品室中，盖上盖子，并按绿色按钮（绿灯亮）打开检测器。尽快用鼠标点击软件界面上的“Gain”按钮（下图中红框区），仪器会通过自动调节Gain的高低（注意观察Gain的数值在变化）来合理放大信号，保证昀佳检测质量。当Gain降到1，软件仍提示信号饱和时，需要对样品进行稀释。注意：‹如果水中的溶解态有机质过多，则它们发出的荧光可能会干扰测量结果。为避免这种影响，可以用做一个过滤水样，拿过滤掉藻细胞后的滤液作为样品，通过点击上图中的Zoff按钮来消除噪音。‹当水样的叶绿素浓度高于300μg/L时，叶绿素分子对荧光的“重吸收”会干扰测量结果。为避免这种影响，当测量出的叶绿素含量高于300μg/L时，请对样品稀释后重新测量。泽泉科技有限公司ZealQuestScientificTechnologyCo.,Ltd上海市中江路879号天地软件园28号楼402-403室（邮编：200333）:021-51556111E-Mail:[e-mail]2.3测量PHYTO-PAM的常规测量包括三种类型：1）只测量叶绿素浓度；2）只测量光合作用；3）测量叶绿素浓度和光合作用。不同的测量有不同的步骤，请分别参考2.3.1-2.3.3节内容。2.3.1叶绿素浓度的测量首先进入Settings窗口，确保Meas.Freq.设置在32（下图红框区）。这是经过反复验证昀适合叶绿素浓度测量的频率。然后点击Chl[MF32]（下图红框区）按钮等待软件出数据即可。叶绿素浓度数据会自动保存在Report文件中。测量完成后，切换到Report窗，点击File/SaveReport，存储数据泽泉科技有限公司ZealQuestScientificTechnologyCo.,Ltd上海市中江路879号天地软件园28号楼402-403室（邮编：200333）:021-51556111E-Mail:[e-mail]2.3.2光合作用的测量测量光合作用时，样品需要一定时间的暗适应。这里牵涉到两个问题：‹如何暗适应：一种是放入样品室后暗适应，但每个样品都这样做，会耽误很多时间，效率低；另一种是将水样加入样品杯中后，用黑布（或纸箱或泡沫箱或其它材料）盖住暗适应，测量时在遮光的条件下将样品杯放入样品室即可。我们推荐第二种方法，多个样品杯可以综合利用，统筹安排时间，大大提高测量效率。‹暗适应时间如何确定：藻类样品的暗适应时间，在整个藻类学界没有固定标准。对于蓝藻而言，由于存在“状态转换”现象，导致暗适应时间太长，Fm会降低，导致Fv/Fm测量不准确。对于某些硅藻和甲藻，也存在类似的现象，长期暗适应会导致Fm降低。以我们的经验，对于藻类样品，5-10分钟的暗适应时间足够了。2.3.2.1Fv/Fm的测量样品经过暗适应后，按2.2节步骤调节信号强度。然后进入Settings窗口，确保Meas.Freq.设置在1或2（下图红框区）。点击SAT-Pulse（下图红框区），得到的Yield就是Fv/Fm。泽泉科技有限公司ZealQuestScientificTechnologyCo.,Ltd上海市中江路879号天地软件园28号楼402-403室（邮编：200333）:021-51556111E-Mail:s