CCK8中文说明书

CellCountingKit-8产品编号产品名称包装C0038CellCountingKit-8(CCK-8试剂盒)500次产品简介：CellCountingKit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。图1.WST-8检测原理图(EC=electroncouplingreagent，即电子耦合试剂)WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。WST-8对细胞无明显毒性。加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到昀佳测定时间。关于不同细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择，请参考。本试剂盒可以测定500个样品。包装清单：产品编号产品名称包装C0038CCK-8溶液5ml—说明书1份保存条件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。注意事项：由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈昀容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：1.通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。2.每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200微升，则需加入20微升CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。3.在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。4.在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。使用本产品的文献：1.HouG,XueL,LuZ,FanT,TianF,XueY.AnactivatedmTOR/p70S6KsignalingpathwayinesophagealsquamouscellcarcinomacelllinesandinhibitionofthepathwaybyrapamycinandsiRNAagainstmTOR.CancerLett.2007Aug18;253(2):236-48.2.YeCL,JinYL,ZhouGX,QinL.EffectsofEGb761ontheantioxygenandcellapoptosisinducedbyH2O2inRIN2mbetacells.JournalofJinanUniversity(MedicineEdition).Aug.2007;Vol.28No.4.3.ZhuHL,ShenW,ChenZY.Apoptosisofhepaticstellatecellsinducedbysulfasalazine.Actaacademiaemedicnaemlitaristertiae.Jan.2008;Vol.30,No.1.4.YangM,ZhouH.Grasscarptransforminggrowthfactor-beta1(TGF-beta1):molecularcloning,tissuedistributionandimmunobiologicalactivityinteleostperipheralbloodlymphocytes.MolImmunol.2008Mar;45(6):1792-8.5.ZhouJR,XuZ,JiangCL.NeuropeptideYpromotesTGF-beta1productioninRAW264.7cellsbyactivatingPI3KpathwayviaY1receptor.NeurosciBull.2008Jun;24(3):155-9.6.LiXT,ZhangY,ChenGQ.Nanofibrouspolyhydroxyalkanoatematricesascellgrowthsupportingmaterials.Biomaterials.2008Sep;29(27):3720-8.7.ChengST,ChenZF,ChenGQ.Theexpressionofcross-linkedelastinbyrabbitbloodvesselsmoothmusclecellsculturedinpolyhydroxyalkanoatescaffolds.Biomaterials.2008Nov;29(31):4187-94.8.LuJ,YueBH,WangCM,BaiST,ShengGY.EfficacyofRNAi-induceddown-regulationofwild-typeFLT3onNF-kBpathwayinTHP-1cellline.LifeScienceJournal.Vol.5,No.2,2008.9.PanJ,LiG,ChenZ,ChenX,ZhuW,XuK.Alternativeblockpolyurethanesbasedonpoly(3-hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate)andpoly(ethyleneglycol).Biomaterials.2009Jun;30(16):2975-84.10.DaiZW,ZouXH,ChenGQ.Poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate)asaninjectableimplantsystemforpreventionofpost-surgicaltissueadhesion.Biomaterials.2009Jun;30(17):3075-83.11.SuX,ZhengX,NiJ.LanthanumcitrateinducesanoikisofHelacells.CancerLett.2009Nov28;285(2):200-9.Epub2009Aug12.12.LiN,LiQ,QianZ,ZhangY,ChenM,ShiG.ImpairedTLR3/IFN-betasignalinginmonocyte-deriveddendriticcellsfrompatientswithacute-on-chronichepatitisBliverfailure:relevancetotheseverityofliverdamage.BiochemBiophysResCommun.2009Dec18;390(3):630-5.13.WangH,JiJ,ZhangW,WangW,ZhangY,WuZ,ZhangY,ChuPK.RatcalvariaosteoblastbehaviorandantibacterialpropertiesofO(2)andN(2)plasma-implantedbiodegradablepoly(butylenesuccinate).ActaBiomater.2010Jan;6(1):154-9.14.WangH,KwokDT,WangW,WuZ,TongL,ZhangY,ChuPK.Osteoblastbehavioronpolytetrafluoroethylenemodifiedbylongpulse,highfrequencyoxygenplasmaimmersionionimplantation.Biomaterials.2010Jan;31(3):413-9.15.ZhangHY,SunH.Up-regulationofFoxp3inhibitscellproliferation,migrationandinvasioninepithelialovariancancer.CancerLett.2010Jan1;287(1):91-7.16.ChenS,ChenY,HuC,JingH,CaoY,LiuX.AssociationofclinicopathologicalfeatureswithUbcH10expressionincolorectalcancer.JCancerResClinOncol.2010Mar;136(3):419-26.17.WangL,XueL,YanH,LiJ,LuY.EffectsofROCKinhibitor,Y-27632,onadhesionandmobilityinesophagealsquamouscellcancercells.MolBiolRep.2010Apr;37(4):1971-7.Epub2009Aug2.18.WangP,XuCS,XuJ,WangX,LeungAW.HypocrellinBenhancesultrasound-inducedcelldeathofnasopharyngealcarcinomacells.UltrasoundMedBiol.2010;36(2):336-42.Epub2009Dec16.19.DuanW,LiX,ShiJ,GuoY,LiZ,LiC.MutantTARDNA-bindingprotein-43inducesoxidativeinjuryinmotorneuron-likecell.Neuroscience.2010;169(4):1621-9.Epub2010Jul2.20.WangL,WangZH,ShenCY,YouML,XiaoJF,ChenGQ.Differentiationofhumanbonemarrowmesenchymalstemcellsgrowninterpolyestersof3-hydroxyalkano