16-抗生素类药物分析详解

Logo第十六章抗生素类药物的分析药学院药物分析教研室Logo【大纲要求】1、掌握β-内酰胺类的鉴别和高效液相色谱法等含量测定方法。2、掌握氨基糖苷类抗生素的鉴别试验，庆大霉素C组分的检查方法。3、掌握四环素类抗生素的鉴别试验和特殊杂质的检查方法。4、熟悉本类药物的化学结构与分析方法的关系。5、了解抗生素类药物中高分子杂质的控制方法。药学院药物分析教研室Logo抗生素的概念及特点◆低化学纯度－同系物多、异构体多、降解物多◆活性组分的变异性－生产过程中条件的变化◆不稳定性－不稳定性结构是指“在低浓度情况下对某些生物的生命活动有特异性抑制作用一类化学物质的总称”药学院药物分析教研室第一节概述Logo㈠1、显色反应－特殊基团的反应2、光谱法－特征吸收3、色谱法－保留行为4、生物学方法－抗菌能力药学院药物分析教研室Logo㈡Investigation1、常规检查－水份、酸碱度等2、有机和无机杂质检查3、异常物质的检查－异常毒性、热原等4、其他检查－其他共存组分药学院药物分析教研室Logo（三）(Potency)Determination1、微生物检定法稀释法比浊法管碟琼脂扩散法－抑菌圈灵敏度高、需用量少适用范围广－纯品、不纯品、已知的和新的可一次测定同类型抗生素的总效价－无需分离纯化与临床的应用要求一致操作繁琐、费时费力误差较大Potency:是指每ml或每mg中含有某种抗生素有效成分的多少－u/μg是以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来判断效价的一种方法是结构复杂和多组分抗生素效价测定的首先方法药学院药物分析教研室Logo、物理化学法High-performanceliquidchromatographyLiquidchromatography-Massspectrometr)UV容量法准确可靠、专属性高、操作简单、省时、样品用量少1、对结构已知或提纯的抗生素2、需要标准品对照仪器分析方法药学院药物分析教研室Logo抗生素的分类β－内酰胺类抗生素氨基糖苷类抗生素四环素类抗生素大环内酯类抗生素多烯大环类抗生素－制菌霉素、两性霉素多肽类抗生素－放线菌素、多黏菌素苯烃胺类抗生素－氯霉素药学院药物分析教研室Logo药学院药物分析教研室（一）结构Logo发展史1929年，弗来明(AlexanderFleming)发现青霉素。1958年谢汉合成6-氨基青霉烷酸(6-APA)成功。开创了半合成青霉素的时代1961年，头孢菌素C被发现，头孢菌素迅速发展。80年代:广谱碳青霉烯类上市。Logo青霉素（青霉素钾、钠）药学院药物分析教研室Logo氨苄西林（氨苄青霉素）药学院药物分析教研室Logo阿莫西林（羟氨苄青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2药学院药物分析教研室Logo㈡理化性质1、酸性与溶解性2、旋光性3、紫外吸收特性4、不稳定性NONHRO567SCOOHCH2R181234药学院药物分析教研室Logo与碱金属(Na+、K+)成盐（1）羧基易溶于水药学院药物分析教研室Logo与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2药学院药物分析教研室Logo（2）手性C87654321NOS头孢菌素类C6C7青霉素类C3C5C6旋光性﹡﹡﹡﹡﹡药学院药物分析教研室Logo（3）共轭体系NSO头孢菌素类母核有共轭体系青霉素类母核无明显UV多数有苯环取代基NOSUV药学院药物分析教研室Logo青霉素类某些氧化剂酸、碱、青霉素酶（某些金属离子）（温度）降解失效药学院药物分析教研室Logo弱酸性青霉醛青霉胺ONORNHCH3CH3HSCOOH青霉烯酸NH2OH青霉噻唑酸酰基羟胺酸HgCl2青霉酸与含水量和纯度密切相关药学院药物分析教研室Logo青霉素的降解产物青霉噻唑酸－青霉素酶青霉酸－强酸性环境青霉烯酸－弱酸性环境青霉醛－强酸性-加热青霉胺－强酸性-加热/青霉素酶-重金属降解产物药学院药物分析教研室Logo三、鉴别反应（一）显色反应羟肟酸铁反应NONHRO567SCOOHCH2R181234NaOHHNONHRO567SCOONaCH2R11234NHOHFe3+HNONHRO567SCOONaCH2R11234FeNHO药学院药物分析教研室Logo茚三酮反应α-氨基-氨基茚三酮蓝紫色药学院药物分析教研室Logo双缩脲反应CONH似肽键（开环分解）-内酰胺类碱性酒石酸铜紫药学院药物分析教研室Logo与重氮苯磺酸反应橙黄色重氮苯磺酸56OHHC（偶合）酚羟基头孢哌酮药学院药物分析教研室Logo与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素阿莫西林氨苄西林HCHOCHSOH”羰基侧链含“△（分解）变色酸显色药学院药物分析教研室Logo、Na+的火焰反应（二）各种盐的反应焰色→鲜黄色+醋酸氧铀锌→↓黄Na+焰色→紫色+0.1%四苯硼钠+Ac→↓白K+药学院药物分析教研室Logo沉淀反应（青霉素盐）遇酸→↓在过量HCl或有机溶剂中溶解白青霉素青霉素钠　青霉素钾　H药学院药物分析教研室Logo重氮化-偶合反应重氮化-偶合反应芳伯氨基青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素H红药学院药物分析教研室Logo与三硝基苯酚反应三硝基苯酚二苄基乙二胺苄星青霉素NaOH△二苄基乙二胺药学院药物分析教研室Logo光谱法（三）1、UV法样品、分解产物AEcm,min,max,,%11光谱图头孢氨苄λmax=262nm青霉素V钠A280nm/A264nm=1.30～1.50nm339HA苯唑青霉烯酸苯唑青霉素Cu2+药学院药物分析教研室Logo本类药物的紫外光谱鉴别法通常利用最大吸收波长鉴定法：将供试品配成适当浓度的溶液，直接测定紫外吸收光谱，根据其最大吸收波长或最大吸收波长处的吸光度进行鉴定。如头孢唑啉钠的紫外鉴别法：取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含16g的溶液，在272nm的波长处有最大吸收。Logo红外吸收光谱(IR)红外吸收光谱反映了分子的结构特征，各国药典对收载的β-内酰胺类抗生素几乎均采用了本法进行鉴别。该类抗生素的β-内酰胺环羰基的伸缩振动(1750cm-1～1800cm-1)，仲酰胺的氨基、羰基的伸缩振动(3300cm-1，1525cm-1，1680cm-1)、羧酸离子的伸缩振动(1600cm-1，1410cm-1)是该类抗生素共有的特征峰。LogoN-Hβ–内酰胺C=O1780cm-13470cm-1O-H1690cm-1仲酰胺C=O1250cm-1C-O以阿莫西林为例药学院药物分析教研室Logo色谱法（四）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法和斑点颜色比较供试品对照品相同条件fRRt比较供试品对照品相同条件药学院药物分析教研室Logo三、检查本类抗生素的杂质主要有高分子聚合物，有关物质，异构体等，一般采用HPLC法控制其限量，也有采用测定杂质的吸光度来控制杂质量的。此外，有的还进行结晶性、抽针与悬浮时间等有效性试验，部分抗生素还检查有机溶剂残