2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体

温故而知新——植物体细胞杂交（马铃薯番茄）融合的原生质体AB再生出细胞壁植物细胞的融合杂种细胞AB杂种植株脱分化愈伤组织再分化植物组织培养原生质体B原生质体A去壁去壁人工诱导植物细胞A植物细胞B动物细胞可以融合吗？如果可以，两者相同吗？2.2动物细胞工程一、动物细胞融合（细胞杂交）1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方法物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。动物细胞融合过程5、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体动物细胞与植物细胞的差别：•无细胞壁•全能性受限制，不能发育成杂种动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：•不需去除细胞壁•不能发育成新的动物个体植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞融合的方法诱导方法用途获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒主要用于制备单克隆抗体1、抗体1.概念：抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。2.来源：B淋巴细胞。B淋巴细胞与抗体的关系：１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？1、单克隆由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂)形成的一个细胞群，叫一个克隆，即单克隆。2、单克隆抗体由一个效应B淋巴细胞经过无性繁殖形成的一个细胞群产生的化学性质单一，特异性强的抗体，即单克隆抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。3、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。单克隆抗体制备过程注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体（选择性培养基）单克隆抗体诱导其融合的方法有哪些？4、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体6.单克隆抗体的应用：特异性强、灵敏度高、产量大①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合优点：准确、高效、简易、快速②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗5、单克隆抗体的特点：思考问题：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？拓展延伸课堂小结动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程两个过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势1、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞2、动物细胞融合过程中所用的诱导剂——灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是（）A.失去抗原性，具有感染力B.具有抗原性，也具有感染力C.失去抗原性，也失去感染力D.具有抗原性，失去感染力BD3、单克隆抗体是指（）A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体4、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（）A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活C.选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成CC5、“生物导弹”是指（）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.在单克隆抗体上连接抗癌药物D6、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的T淋巴细胞B.未经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的B淋巴细胞D.未经过免疫的B淋巴细胞C