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个人收集整理-ZQ1/3实验十四血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)胆固醇地测定方法很多;通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类.化学试剂比色法中有直接法和间接法;前者可用血清直接测定,后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量.酶法由于操作简便、结果准确,试剂无腐蚀性,而且因使用特异性酶,大大减少了血液中其它成分地干扰,目前已成为测定胆固醇地主要方法.b5E2R。【目地】.了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇地原理,能进行血清胆固醇测定地操作..掌握血清胆固醇测定地临床意义.【原理】血清中总胆固醇()包括胆固醇酯()和游离型胆固醇(),酯型占,游离型占.胆固醇酯酶()先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸(),胆固醇在胆固醇氧化酶()地作用下氧化生成Δ胆甾烯酮和过氧化氢.后者经过氧化物酶()催化氢与氨基安替比林()和酚反应,生成红色地醌亚胺,其颜色深浅与胆固醇地含量呈正比,在波长处测定吸光度,与标准管比较可计算出血清胆固醇地含量.反应式如下:p1Ean。胆固醇酯胆固醇+脂肪酸CEH胆固醇+O2△4-胆甾烯酮+H2O2COD2H2O2+4-氨基安替比林+酚红色醌亚胺POD【器材】试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计.【试剂】酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒..酶应用液胆固醇酶试剂地组成为:磷酸盐缓冲液胆固醇酯酶≥胆固醇氧化酶≥过氧化物酶≥氨基安替比林个人收集整理-ZQ2/3苯酚此外还含有胆酸钠和,胆酸钠是胆固醇酯酶地激活剂,表面活性剂能促进脂蛋白释放胆固醇和胆固醇酯,有利于胆固醇酯地水解.DXDiT。.()胆固醇标准液精确称取胆固醇溶于无水乙醇,移入容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度(也可用异丙醇等配制).【操作】取试管支,编号,按下操作.表酶法测定血清胆固醇操作步骤加入物()测定管标准管空白管血清--胆固醇标准液--蒸馏水--酶应用液混匀后,℃水浴保温分钟,在波长处比色,以空白管调零,读取各管吸光度.【计算】血清胆固醇(mmol/L)=测定管吸光度标准管吸光度×5.17【注意事项】.黄疸血清过高地胆红素可还原—部分反应中地,降低显色反应,使结果偏低.但测定胆固醇,胆红素对酶法地干扰比化学法小.RTCrp。.用胆固醇标准液引起地误差较大,故目前提倡采用胆固醇定值血清为标准..轻度溶血对测定结果无影响,但明显溶血可使结果增高,此时可用一个不加地空白管从结果中减去后纠正..其它影响因素,如维生素、谷胱甘肽、氟化物引起负偏差.【正常参考范围】~【临床意义】.血清胆固醇增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症、糖尿病、肾病综合征、胆管阻塞、甲状腺功能减退.5PCzV。个人收集整理-ZQ3/3.血清胆固醇降低常见严重贫血、甲状腺功能亢进、长期营养不良等.【结果及分析】【思考题】.胆固醇有哪些重要地生理功能,血清胆固醇升高对机体最严重地危害是什么?.胆固醇在体内可转变为哪些物质,如何排泄?.实验中需要哪几种酶参加,各有什么作用?
本文标题:实验十四--血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)
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