GB500982016食品安全国家标准食品中果糖葡萄糖蔗糖麦芽糖乳糖的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.8—2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.8—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T5009.8—2008《食品中蔗糖的测定》、GB/T18932.22—2003《蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法液相色谱示差折光检测法》、GB/T22221—2008《食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定高效液相色谱法》。本标准与GB/T5009.8—2008相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定”;———增加了部分样品前处理。GB5009.8—20161食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定1范围本标准规定了食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定方法。本标准第一法适用于食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定,第二法适用于食品中蔗糖的测定。“第一法”高效液相色谱法,本法适用于谷物类、乳制品、果蔬制品、蜂蜜、糖浆、饮料等食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的测定。“第二法”酸水解-莱因-埃农氏法,本法适用于食品中蔗糖的测定。第一法高效液相色谱法2原理试样中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖经提取后,利用高效液相色谱柱分离,用示差折光检测器或蒸发光散射检测器检测,外标法进行定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈:色谱纯。3.1.2乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]。3.1.3亚铁氰化钾{K4[Fe(CN)6]·3H2O}。3.1.4石油醚:沸程30℃~60℃。3.2试剂配制3.2.1乙酸锌溶液:称取乙酸锌21.9g,加冰乙酸3mL,加水溶解并稀释至100mL。3.2.2亚铁氰化钾溶液:称取亚铁氰化钾10.6g,加水溶解并稀释至100mL。3.3标准品3.3.1果糖(C6H12O6,CAS号:57-48-7)纯度为99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.2葡萄糖(C6H12O6,CAS号:50-99-7)纯度为99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.3蔗糖(C12H22O11,CAS号:57-50-1)纯度为99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准GB5009.8—20162物质。3.3.4麦芽糖(C12H22O11,CAS号:69-79-4)纯度为99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.5乳糖(C6H12O6,CAS号:63-42-3)纯度为99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.4标准溶液配制3.4.1糖标准贮备液(20mg/mL):分别称取上述经过96℃±2℃干燥2h的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖各1g,加水定容于50mL,置于4℃密封可贮藏一个月。3.4.2糖标准使用液:分别吸取糖标准贮备液1.00mL、2.00mL、3.00mL、5.00mL于10mL容量瓶、加水定容,分别相当于2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、10.0mg/mL浓度标准溶液。4仪器和设备4.1天平:感量为0.1mg。4.2超声波振荡器。4.3磁力搅拌器。4.4离心机:转速≥4000r/min。4.5高效液相色谱仪,带示差折光检测器或蒸发光散射检测器。4.6液相色谱柱:氨基色谱柱,柱长250mm,内径4.6mm,膜厚5μm,或具有同等性能的色谱柱。5试样的制备和保存5.1试样的制备5.1.1固体样品取有代表性样品至少200g,用粉碎机粉碎,并通过2.0mm圆孔筛,混匀,装入洁净容器,密封,标明标记。5.1.2半固体和液体样品(除蜂蜜样品外)取有代表性样品至少200g(mL),充分混匀,装入洁净容器,密封,标明标记。5.1.3蜂蜜样品未结晶的样品将其用力搅拌均匀;有结晶析出的样品,可将样品瓶盖塞紧后置于不超过60℃的水浴中温热,待样品全部溶化后,搅匀,迅速冷却至室温以备检验用。在融化时应注意防止水分侵入。5.2保存蜂蜜等易变质试样置于0℃~4℃保存。6分析步骤6.1样品处理6.1.1脂肪小于10%的食品称取粉碎或混匀后的试样0.5g~10g(含糖量≤5%时称取10g;含糖量5%~10%时称取5g;含GB5009.8—20163糖量10%~40%时称取2g;含糖量≥40%时称取0.5g)(精确到0.001g)于100mL容量瓶中,加水约50mL溶解,缓慢加入乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液各5mL,加水定容至刻度,磁力搅拌或超声30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,后续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤或离心获取上清液过0.45μm微孔滤膜至样品瓶,供液相色谱分析。6.1.2糖浆、蜂蜜类称取混匀后的试样1g~2g(精确到0.001g)于50mL容量瓶,加水定容至50mL,充分摇匀,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,后续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤或离心获取上清液过0.45μm微孔滤膜至样品瓶,供液相色谱分析。6.1.3含二氧化碳的饮料吸取混匀后的试样于蒸发皿中,在水浴上微热搅拌去除二氧化碳,吸取50.0mL移入100mL容量瓶中,缓慢加入乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液各5mL,用水定容至刻度,摇匀,静置30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,后续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤或离心获取上清液过0.45μm微孔滤膜至样品瓶,供液相色谱分析。6.1.4脂肪大于10%的食品称取粉碎或混匀后的试样5g~10g(精确到0.001g)置于100mL具塞离心管中,加入50mL石油醚,混匀,放气,振摇2min,1800r/min离心15min,去除石油醚后重复以上步骤至去除大部分脂肪。蒸发残留的石油醚,用玻璃棒将样品捣碎并转移至100mL容量瓶中,用50mL水分两次冲洗离心管,洗液并入100mL容量瓶中,缓慢加入乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液各5mL,加水定容至刻度,磁力搅拌或超声30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,后续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤或离心获取上清液过0.45μm微孔滤膜至样品瓶,供液相色谱分析。6.2色谱参考条件色谱条件应当满足果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖之间的分离度大于1.5。色谱图参见附录A中图A.1和图A.2。a)流动相:乙腈+水=70+30(体积比);b)流动相流速:1.0mL/min;c)柱温:40℃;d)进样量:20μL;e)示差折光检测器条件:温度40℃;f)蒸发光散射检测器条件:飘移管温度:80℃~90℃;氮气压力:350kPa;撞击器:关。6.3标准曲线的制作将糖标准使用液标准依次按上述推荐色谱条件上机测定,记录色谱图峰面积或峰高,以峰面积或峰高为纵坐标,以标准工作液的浓度为横坐标,示差折光检测器采用线性方程;蒸发光散射检测器采用幂函数方程绘制标准曲线。6.4试样溶液的测定将试样溶液注入高效液相色谱仪中,记录峰面积或峰高,从标准曲线中查得试样溶液中糖的浓度。可根据具体试样进行稀释(n)。GB5009.8—201646.5空白试验除不加试样外,均按上述步骤进行。7分析结果的表述试样中目标物的含量按式(1)计算,计算结果需扣除空白值:X=(ρ-ρ0)×V×nm×1000×100…………………………(1)式中:X———试样中糖(果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖)的含量,单位为克每百克(g/100g);ρ———样液中糖的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);ρ0———空白中糖的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);V———样液定容体积,单位为毫升(mL);n———稀释倍数;m———试样的质量,单位为克(g)或毫升(mL);1000———换算系数;100———换算系数。糖的含量≥10g/100g时,结果保留三位有效数字,糖的含量10g/100g时,结果保留两位有效数字。8精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9其他当称样量为10g时,果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖检出限为0.2g/100g。第二法酸水解-莱因-埃农氏法10原理本法适用于各类食品中蔗糖的测定:试样经除去蛋白质后,其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖,按还原糖测定。水解前后的差值乘以相应的系数即为蔗糖含量。11试剂和溶液除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。11.1试剂11.1.1乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]。11.1.2亚铁氰化钾{K4[Fe(CN)6]·3H2O}。GB5009.8—2016511.1.3盐酸(HCl)。11.1.4氢氧化钠(NaOH)。11.1.5甲基红(C15H15N3O2):指示剂。11.1.6亚甲蓝(C16H18ClN3S·3H2O):指示剂。11.1.7硫酸铜(CuSO4·5H2O)。11.1.8酒石酸钾钠(C4H4O6KNa·4H2O)。11.2试剂配制11.2.1乙酸锌溶液:称取乙酸锌21.9g,加冰乙酸3mL,加水溶解并定容于100mL。11.2.2亚铁氰化钾溶液:称取亚铁氰化钾10.6g,加水溶解并定容至100mL。11.2.3盐酸溶液(1+1):量取盐酸50mL,缓慢加入50mL水中,冷却后混匀。11.2.4氢氧化钠(40g/L):称取氢氧化钠4g,加水溶解后,放冷,加水定容至100mL。11.2.5甲基红指示液(1g/L):称取甲基红盐酸盐0.1g,用95%乙醇溶解并定容至100mL。11.2.6氢氧化钠溶液(200g/L):称取氢氧化钠20g,加水溶解后,放冷,加水并定容至100mL。11.2.7碱性酒石酸铜甲液:称取硫酸铜15g和亚甲蓝0.05g,溶于水中,加水定容至1000mL。11.2.8碱性酒石酸铜乙液:称取酒石酸钾钠50g和氢氧化钠75g,溶解于水中,再加入亚铁氰化钾4g,完全溶解后,用水定容至1000mL,贮存于橡胶塞玻璃瓶中。11.3标准品葡萄糖(C6H12O6,CAS号:50-99-7)标准品:纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。11.4标准溶液配制葡萄糖标准溶液(1.0mg/mL):称取经过98℃~100℃烘箱中干燥2h后的葡萄糖1g(精确到0.001g),加水溶解后加入盐酸5mL,并用水定容至1000mL。此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。12仪器和设备12.1天平:感量为0.1mg。12.2水浴锅。12.3可调温电炉。12.4酸式滴定管:25mL。13试样的制备和保存13.1试样的制备13.1.1固体样品取有代表性样品至少200g,用粉碎机粉碎,混匀,装入洁净容器,密封,标明标记。13.1.2半固体和液体样品取有代表性样品至少200g(mL),充分混匀,装入洁净容器,密封,标明标记。GB5009.8—2016613.2保存蜂蜜等易变质试样于0℃~4℃保存。14分析步骤14.1试样处理14.1.1含蛋白质食品称取粉碎或混匀后的固体试样2.5g~5g(精确到0.001g)或液体试样5g~25g(精确到0.001g),置250mL容量瓶中,加水50mL,缓慢加入乙酸锌溶液5mL和亚铁氰化钾溶液5mL,加水至刻度,混匀,静置30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,取后续滤液备用。14.1.2含大量淀粉的食品称取粉碎或混匀后的试样10g~20g(精确到0.001g),置250mL容量瓶中,加水200mL,在45℃水浴中加热1h,并时时振摇,冷却后加水至刻度,混匀,静置,沉淀。吸取200mL上清液于另一250mL容量瓶中,缓慢加入乙酸锌溶液5mL和亚铁氰化钾溶液5mL,加水至刻度,混匀,静置30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,取后续滤液备用。14.1.3酒精饮料称取混匀后的试样100g(精确到0.01g),置于蒸发皿中,用(40g/L)氢氧化钠溶液中和至中性,在水浴上蒸发至原体积的14后,移入250mL容量瓶中,缓慢加入乙酸锌溶液5mL和亚铁氰化钾溶液