高活性光合细菌荚膜红假单胞菌培养特性初探

高活性光合细菌荚膜红假单胞菌培养特性初探摘要:从洛河水中进行了光合细菌的分离,得到一株细胞活性高的荚膜红假单胞菌JM12,并对其培养条件进行了初步摸索。结果表明:该菌适宜在pH值6～7,盐浓度0%～3%,温度25℃～35℃以及有光照条件下生长。关键词:光合细菌;荚膜红假单胞菌;培养特性当前我国水产业迅猛发展,但由于长期养殖方式不当,导致池塘老化,水质恶化,有机物严重污染,致病微生物大量繁殖,形成大量的鱼虾病害。由于目前大量使用化学药品和抗生素来防治鱼虾病害的发生,化学药品易残留在环境中,带来环境的二次污染,抗生素容易使病毒产生抗药性,长期使用后效果不佳。与其相比,光合细菌具有较多的优点,在水产养殖中具有较大的开发应用价值。光合细菌是广泛存在于自然界的微生物,是一类以光为能源,利用自然界中的有机物、硫化物等为营养体,并能进行光合作用的生物。光合细菌在水产养殖中具有良好的水质调节作用,而且富含B族维生素和辅酶Q等生理活性物质,可促进鱼虾等水生生物的生长,也能防治鱼虾病害的发生。光合细菌的多种良好性能已引起国内外广大学者的关注。我们特从洛河水中进行了光合细菌的分离,得到一株细胞活性高的荚膜红假单胞菌JM12,并对其培养条件进行了初步摸索,为以后的应用研究打下基础。1实验材料1.1光合细菌荚膜红假单胞菌(Rps.capsulata),为本实验室选育保存菌种,能高效降解养殖水体氨氮。选育方法为取洛河水样20mL,接入装有200mL分离培养基的三角瓶中,置于30℃下静置培养2d～3d,待培养液呈现混浊后,以10%接种量转接入新的分离培养基中培养,如此重复2次～3次。后吸取培养液,用无菌水适当稀释,分别涂布在含有2%盐浓度的固体分离培养基上,挑取优势生长菌落,划线在0.5%盐浓度的固体培养基上。最后挑取在0.5%与2%盐浓度下均能良好生长的菌株进行降解氨氮功能的筛选。其步骤为将分离菌株分别接种于212mg/L氨氮(硫酸铵1g)的分离培养基中,于30℃下静置培养2d后测定氨氮的降解率,选取降解氨氮作用最好的菌株斜面保藏。1.2光合细菌基础培养基(g/1L蒸馏水)CH3COONa3.0g,NaCl1.0g,(NH4)2SO40.3g,MgSO40.2g,KH2PO40.5g,K2HPO40.3g,CaCl250mg,酵母膏0.1g,MnSO42.5mg,FeSO45mg,蛋白胨10mg,谷氨酸0.2mg,pH值7.4,121℃蒸汽灭菌20min。2实验方法2.1光合细菌的生长曲线测定将活化后的光合细菌—荚膜红假单胞菌以5%接种于光合细菌基础培养基中,置于30℃、500LX光照强度下静置培养,每隔12h取样,用721分光光度计测定细胞生长量(OD660nm)。2.2光照对光合细菌生长的影响接种5%的荚膜红假单胞菌于光合细菌基础培养基中,置于30℃下、分别在500LX光照强度与无光照下静置培养,每隔12h取样,跟踪测定细胞生长量(OD660nm),探讨光照(有、无)对菌体生长的影响。2.3温度对光合细菌生长的影响将已接种的光合细菌培养液于光照强度为500lx的条件下培养,温度分别控制在15℃、20℃、25℃28℃、30℃、35℃、40℃、45℃,72h后用721分光光度计测定菌体细胞生长量(OD660nm),探讨温度对菌体生长的影响。2.4pH值对光合细菌生长的影响荚膜红假单胞菌接种于光合细菌基础培养基中,72h后测定菌体细胞生长量(OD660nm),探讨不同初00.51234510.80.60.40.20（%）图5盐度对光合细菌的生长影响始pH值(5～10)对菌体生长的影响。2.5盐浓度对光合细菌生长的影响荚膜红假单胞菌接种于光合细菌基础培养基中,72h后测定菌体细胞生长量(OD660nm),探讨盐浓度(0%～5%)对菌体生长的影响。3结果3.1光合细菌的生长曲线结果表明(图1),在培养过程中,荚膜红假单胞菌迅速进入对数生长期,在48h进入稳定期。3.2光照结果显示(图2),在培养初期,荚膜红假单胞菌在有光照条件下会比没有光照更快地生长,说明光合细菌能利用光能作为能源,但在72h内,两种培养条件下的菌体增长量相近,表明光合细菌培养时,可以采用无光照培养。3.3最适生长温度结果表明(图3),荚膜红假单胞菌在25℃～35℃下生长良好,,温度过高或过低都不利于菌体繁殖。3.4最适生长pH值配制pH值5～10的光合细菌基础培养基,72h后测定菌体细胞生长量(OD660nm)。结果表明(图4),在pH值6～7时,荚膜红假单胞菌的细胞增长量相近,长势较好。而偏酸与偏碱的环境均不利于其生长,尤其在pH值5时,荚膜红假单胞菌几乎不生长。3.5盐浓度配制盐浓度从0%～5%的光合细菌基础培养基,72h后测定菌体细胞生长量(OD660nm)。结果表明(图5),菌株在质量分数为0%~1%的NaCl基质上生长良好,随着盐浓度的提高,荚膜红假单胞菌的生长速率越慢。4结论实验对能高效降解养殖水体氨氮的荚膜红假单胞菌进行了生理特征研究,结果表明:该菌适宜在pH值6～7;盐浓度0%～3%;温度25℃～35℃以及有光照条件下生长。参考文献:[1]范秀容,沈萍主编,微生物学试验[M],高等教育出版社,北京,1998,3.[2]周德庆主编,微生物学教程[M],高等教育出版社,北京,1993,5.[3]施安辉等,光合细菌菌中的分离、富集培养、纯化和菌种检定及净化水质[J],内陆水产,2002,10:40～42.[4]李筠,许兵等,红假单胞菌的分离鉴定与生长特性[J],青岛海洋大学学报,1995,4:187～192.[5]朱延钊,沼泽红假单胞菌的分离与培养[J],中国水产,2002,4:69～70.[6]张家春等,一株产辅酶Q10的红假单胞菌的研究[J],云南师范大学学报,2003,23(1):48～50.[7]何明清,我国动物微生态制剂的起源、发展战略及应用前景[J],中国微生态学杂志,2001,13(3):166～167,176.[8]万夕和,水产养殖请慎用抗生素[J].科学养鱼,2001,4:34.(通联:1.河南洛阳师范学院生命科学系,471022;2.河南洛阳市水产科学研究所,471022;3.河南科技大学动物科技学院,471003)图1光合细菌的生长变化曲线1.210.80.60.40.200122436486072时间/hOD660nm有光照无光照OD660nm0122436486072时间/h0.90.80.70.60.50.40.20.10图2光照对光合细菌的生长影响OD660nm152025303540451.41.210.80.60.40.20单位：℃图3温度对光合细菌的生长影响OD660nmOD660nm567891010.80.60.40.20pH值图4pH值对光合细菌的生长影响沅江市阳罗镇永福村渔场优惠供应黄颡鱼、翘鱼白水花，夏花及春片鱼种，并负责技术咨询。杨述平：13487803318基础研究责任编辑/王冬武46