海洋环境中病原微生物的分子快速检测与评价技术

CHINASCIENCEANDTECHNOLOGYACHIEVEMENTS中国科技成果\2010年\第06期\科技计划成果16编辑\李小莹\E-mail:[e-mail]:10.3772/j.issn.1009-5659.2010.06.008本课题是国家863计划海洋技术领域，海洋环境立体监测技术专题的计划探索导向类课题，执行期：2006年1月～2009年12月。由南开大学环境科学与工程学院、生命科学学院、国家海洋环境监测中心的人员共同承担和完成。我国拥有1.8万公里的大陆海岸线，旅游、渔业和海水养殖是国家重要的经济来源。而近年来，由于海洋污染而造成的经济损失已数以亿计。因此迫切需要开发新型的监测技术来弥补现阶段的不足。快速分子检测技术反应灵敏、操作简单、耗时短、准确性高、易于推广，可以在海洋污染监测，卫生监测及渔业、养殖和旅游的安全监测等多方面得到应用，具有广阔的应用前景，能产生巨大的经济效益和社会效益。本课题的总体目标是现场快速检测及其评价，以达到既能高灵敏度的定性检出（基因芯片技术），又能定量分析（ELISA），也可以对监测对象进行综合评价（PCR技术）。同时可从基因和蛋白两方面相互验证测试结果，避免假阳性。其主要研究内容是研发用于海洋环境（海水及水产品）中病毒、致病菌等病原微生物，重点针对可能引起人类疾病的（如总杆菌数、大肠杆菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌、腺病毒、肠道病毒、甲肝病毒、副溶血弧菌、创伤弧菌、沙门氏菌及李斯特菌）快速检测的分子生物技术，为研制用于这些微生物的现场监测手段和设备奠定理论和技术基础。检测方法采用基因芯片检基因芯片具有高通量，高灵敏度和高特异性等优点。本研究将开发出监测环境中常规指示微生物及对人和水生动物的致病微生物的生物芯片，针对监测对象研制通用引物和特异性探针，探索扩增和芯片杂交的最佳条件，建立判读和分析数据的系统，开发出符合实际使用要求的高灵敏度生物监测芯片，用于所选病源微生物的快速定性检测。虽然酶（蛋白）检测技术在许多领域均得到广泛的发展和应用，但是国内外在对海洋中病毒及致病菌的快速监测的报道仍然相当缺乏。由于酶检测技术的敏感性高、简单快速等优点，适合于对海洋中组成复杂的病毒及病原菌进行现场定性和定量检测。本研究针对所选重要病原微生物开发酶联免疫吸附检测(ELISA)试剂盒，以达到现场快速定量检测的目标。PCR检测的主要目标是检测近岸海水中代表性病原微生物的种类和浓度，主要是粪肠球菌、致病弧菌、腺病毒、肠道病毒和甲肝病毒。预期达到的目标是阐明细菌与病毒之间的数量关系；探索海水中代表性病原微生物的数量与陆地排放物入海和季节的关系；开发出对重点病原生物的快速定量检测技术。本项成果的主要技术指标：（1）基因芯片检测灵敏度达到10CFU，无假阴性结果，假阳性结果控制在3％以内，检验周期为1天。（2）粪肠球菌和弧菌的PCR检测下限达到每个反应5CFU（菌落形成单位），腺病毒和甲肝病毒的检测下限达到每个反应100PFU（噬斑形成单位）。技术达到定量分析要求，检测周期8h以内。（3）酶联免疫检测试剂盒一次检测批量样品不少于48个，检测时间不超过2h，灵敏度不低于10ng蛋白/ml，达到半定量分析的要求。3市场前景分析本成果结构更加简单紧凑、控制更加灵活且具有完全自主知识产权的先进技术，预计在国内及国际市场上会具有更强竞争力。课题组研究的多种不同拓扑结构方案可分别适用于不同类型的混合动力车需要，包括轿车、客车、货车、各种专用车辆及军用车辆，同时，该项技术经过改造可同时适用于纯电动汽车和燃料电池汽车等多种电动汽车车型，提供性能更加优异的新型方案。主持单位：南开大学课题负责人：朱琳*国家863计划课题（2006AA09Z170）。海洋环境中病原微生物的分子快速检测与评价技术*（上接第15页）CSTACSTA海洋环境中病原微生物的分子快速检测与评价技术作者：朱琳作者单位：南开大学刊名：中国科技成果英文刊名：CHINASCIENCEANDTECHNOLOGYACHIEVEMENTS年，卷(期)：2010,11(6)本文读者也读过(5条)1.李春强.姚树然河北省气候变化与生态环境安全对策浅析[会议论文]-20062.罗文怀.胡章立深圳不同营养状态水体浮游藻类群落结构及其有害蓝藻快速检测技术研究[会议论文]-20083.卢铭.LUMing我国海洋环境科学与海洋监测技术的发展问题[期刊论文]-海渤海海洋2000,18(3)4.蔡强.刘亮.何苗.施汉昌雌二醇的电化学免疫传感器的研究[会议论文]-20035.汤新华茶叶安全现场快速检测技术及便携式分析仪器[会议论文]-2009本文链接：