第一节检疫性真菌病害

L/O/G/O检疫性真菌病害第五章植物检疫性真菌常见检疫检验技术•直接检验•染色检验•洗涤检验•保湿萌芽检验•分离培养检验1.直接检验•适用范围：具明显症状的植物材料•主要工具：放大镜或解剖镜，主要是利用肉眼现场快速初检2.染色检验法•原理：染病的组织，或病原菌本身，经特殊的化学药品处理后，可带有特殊的颜色。•例如：马铃薯癌肿病（Synchytriumendobioticum）薯块上癌瘤不明显时，可做徒手切片，加1滴1％的“藏花红”染色液，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。3.洗涤检验法•原理：种子表面常附着真菌孢子，将一定量样品放入容器内，加一定量无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类和数量。•主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1％吐温溶液等称取样品洗脱孢子（振荡）离心富集镜检计数主要试验流程1.种子表面的病菌孢子不一定能完全洗涤下来；2.离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子；3.将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布极不均匀；4.操作不够严格，造成人为误差。影响检验结果的因素：4.保湿萌芽检验•原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏于种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。•主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。•主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和土内萌芽检验等三种方法，其中保湿培养检验法是国内外最常用的一种方法。•吸水纸法无菌吸水纸（3层）灭菌培养皿○○○○○吸水1－1.5cm培养、观察12h光照黑暗交替恒温所观察到的结果示意图如下5.分离培养检测•常规植物病理学方法典型检疫性真菌病害小麦矮腥黑穗病Wheatdwarfbunt小麦印度腥黑穗病Wheatkarnalbunt烟草霜霉病Tobaccobluemold马铃薯癌肿病Potatowart榆树枯萎病Dutchelmdisease小麦矮腥黑穗病Wheatdwarfbunt受害麦穗与健康麦穗小麦矮腥黑穗病Wheatdwarfbunt分布：是麦类黑穗病中危害最大、防治最难的一种病害，它于1847年及1860年先后发现于捷克和美国，在全世界范围内传播和蔓延，目前已在欧洲、北美、南美、澳洲、亚洲、非洲等40多个国家发生。寄主：禾本科5个族，18个属，65个种。主要栽培植物有冬小麦、大麦、黑麦，冰草属为天然发病的主要禾草寄主。危害性：1962年美国减产68.7％，1972年西部7州，平均减产17％，损失1.2亿Kg。菌瘿可存活10年以上。症状：系统侵染性，表现为：病株特矮（1/3～1/2），分孽特多（1倍），病穗特密，病粒特硬，有鱼腥臭味。病原菌：小麦矮腥黑穗菌担子菌亚门、冬孢菌纲、黑粉菌目、黑粉菌科、腥黑粉菌属、麦矮化腥黑穗菌种；形态特征：冬孢子堆多生于子房内，形成黑粉状的孢子团，即黑粉病瘿，可含冬孢子10-100万个。冬孢子球形，黄褐色至暗棕褐色，平均直径19-23μm。外孢壁为多角形网眼状纹饰，网眼直径3-5μm，内脊平均高度1.5-3μm，外围有透明胶质鞘包被，不育细胞球形或近球形，无色透明或微绿色。冬孢子萌发及产生的H型孢子生物学特征：冬孢子萌发-2～15（3~8）℃，弱光400～600lx，土壤含水量35～88％，萌发周期长3个月。冬孢子内含有内源孢子萌发抑制剂。生理分化：美国15小种，德国8个小种。初侵染来源：土壤带菌，冬孢子可存活1年，菌瘿可存活3～10年。传播：种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水。发病规律：侵染期长，12月～4月，1～2月是盛期，幼嫩分蘖处侵入，细胞间蔓延，50天到生长点，随寄主生长，菌丝进入穗原始体，到各个花器，破坏子房，形成冬孢子堆。长时间3～8℃低温利于侵染；冬麦区苗期日平均温度0～10℃达45d以上，即使没有雪覆盖也同样利于发病。生长点菌廮冬孢子在土壤，肥料、种表菌丝芽鞘侵入TCK的循环:黑粉散生流行因素：大面积感病品种、足够的菌源、冬季日均温0～10℃的日数大于40d、稳定积雪70d以上，积雪厚度10cm以上。国内适生区域：西北高原冬麦区和新疆、青藏高原晚播冬麦区极为适宜病害的发生，属高度危险区；江淮流域及华北、东北冬麦区基本适合病害发生，属危险区；西南高海拔地区有时也具备病菌入侵条件，也可能受害；春麦区不发病。①直接检查：放大镜菌瘿②洗涤检查：50g＋100ml无菌水，振荡5min，10～15ml离心3min，定容，制片观察。③冬孢子鉴定：孢子形态鉴定（网脊高度、胶鞘厚度、网目径、孢子大小、不育细胞等）。④冬孢子自发荧光实验：TCK孢子于荧光显微镜下有自发荧光现象，而TCT孢子则无。⑤冬孢子萌发试验：5℃、17℃下，光照。孢子5℃下21d开始萌发，17℃不萌发。⑥PCR技术：引物5’-TGACAACGGATCTCTTGGTT-3’、5’-TCACCAACTCCAAGCAATCT-3’，206bp处有特异扩增带。检验与检测：①进口小麦和原粮必须进行检疫，病麦需除害处理。②带菌小麦原粮必须集中在几个规定有条件的口岸加工灭菌处理。采用高温灭菌法，130℃0.5h或120℃1h。③病区用40％五氯硝基苯，种子重量0.5％药量拌种，并在播种沟内施药处理。或单用1％药量拌种。④重病地应轮作倒茬或改种春小麦；冬小麦晚播可减轻发病。⑤种植抗病品种。检疫和防治小麦印度腥黑穗病Wheatkarnalbunt分布：印度、巴基斯坦、尼泊尔、阿富汗、伊拉克、土耳其、黎巴嫩、叙利亚、原苏联、瑞典、美国、墨西哥、澳大利亚等。寄主：小麦、硬粒小麦、六倍体小麦危害及重要性：产量影响不大，对品质影响较大，3%---面粉具臭味（三甲胺）。症状：局部侵染性，部分黑穗病，麦粒的一部分被侵染，小穗顶端麦粒黑斑，颖片张开，主要侵染胚乳，一般不侵染胚，在种子腹面表皮下形成冬孢子堆，背面胚乳部分仍完好。病原菌：印度尾孢黑粉菌属于担子菌亚门、冬孢菌纲、黑粉菌目、黑粉菌科冬孢子：棕褐色，球形，近球形，22～49μm，外壁棘状突起，1.5～5μm；未成熟黄色，透明胶质鞘，成熟消失，外壁有尖形尾丝。不孕细胞球形，近球形，泪珠状，半透明，淡黄褐色，附着菌丝体残体，13～33μm。冬孢子萌发：4月以上休眠期，萌发产生10～190μm先菌丝，上产生65～185个担孢子，长镰刀形，可不配对结合，而直接产生芽管，作侵染菌丝用。ApartiallymatureteliosporeshowingornamentationinmedianviewApartiallymatureteliosporeshowingornamentationinsurfaceview初侵染来源：种子带菌，土壤带菌，秸秆和粪肥等带菌。冬孢子可存活5年。传播：种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水；也可空气传播。生理分化：异宗配合，印度7个生理小种。冬孢子萌发的适温15～22℃，扬花期先菌丝产生的担孢子随气流传播到麦穗上，产生次生担孢子，上生芽管，从颖片、外稃和内稃开张的气孔侵入。在一定温度范围内，该病流行与湿度呈正相关，与温度呈负相关。因此，扬花期遇多云、寡日照、细雨多雾的高湿天气适宜发病。发生规律：①直接检查：根据病粒的特有症状鉴定②洗涤检验③发病轻的麦粒可用0.2％NaOH浸24h（18～25℃），吸去多余液体，实体显微镜下观察。乌黑发亮的种子有病，淡褐色无病。④PCR技术：扩增引物为5’-CGTGTGAGCCATGCTACGACT-3’和5’-AACTTCCAAGGCGACCGTTT-3’，在743bp处有一特异性扩增带，其他近似种或相关种均未出现该扩增带。检验方法：①严格检疫②高温灭菌：带菌小麦原粮必须集中在几个规定有条件的口岸加工灭菌处理。采用高温灭菌法，85℃，相对湿度80％，处理3min可以杀死孢子，处理5min可以杀死菌瘿。③农业措施：小麦与鹰嘴豆间作，适时早播，病轻。④化学防治：三唑类和苯并吡咯类拌种，喷洒药剂（萎锈灵）等。检疫和防治：菲律宾霜霉病•玉米叶片感病症状•菲律宾霜霉病病菌形态特征烟草霜霉病Tobacoobluemold分布与危害：1891年澳大利亚首先报道，后传入欧洲、非洲、美洲和亚洲，现广泛分布，中国尚未发现。苗床和田间均可发病，蔓延速度极快，引起大量植株枯死，是烟草的毁灭性病害。1960年欧洲大流行，烟草损失达27,500吨。寄主范围：侵染，寄主范围窄，主要侵染烟草，自然条件下，还可侵染番茄、辣椒、茄子和马铃薯等茄科植物，人工接种可侵染矮牵牛、酸浆和灯笼草等。①发病时期：主要在苗期，大田期也发生。②发病部位：主要为害叶片。③症状特点：美国生理型，主要危害幼苗，不易感染茎部；澳洲生理型，既危害烟草幼苗，还能危害烟茎和成株。病叶表面和边缘表现淡黄色、黄绿色、暗绿色的病斑，病斑为圆形、近圆形、多角形或形状不规则。病叶背面密生灰蓝色或灰褐色的霜霉层，干烟叶一般表现为灰白色或灰褐色，苗床上的病苗表现为灰蓝色。症状：烟草霜霉病病状烟草霜霉病的病斑有时容易与烟草黑胫病叶部症状相混淆。黑胫病叶部病斑圆形，表现青褐色大斑，呈水渍状，背面霉层稀少，毛短色白，故与霜霉病仍有区别。烟草黑胫病症状④烟草霜霉病与其他病害的症状区别病原菌：烟草霜霉菌，PeronosporahyoscyamideBaryf.sp.tabacina(Adam)Skalicky异名PeronosporatabacinaD.B.AdamPeronosporahyoscyamideBaryPeronosporanicotianaeSpeg英文名称：bluemouldoftobacco；tobaccobluemould；downymildew；angulartobaccoleafspot；tobaccoblackfire；tobaccowildfire分类地位：鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、霜霉属病原菌细胞内菌丝产生细胞内吸器，孢囊梗在叶片的下表面通过气孔口伸出，长450-750μm，二叉式分枝，基部分枝成锐角，上部呈直角，顶端弯曲，末端尖，上生孢子囊；孢子囊透明无色，柠檬形，大小16-28×13-17m，每个孢子含8-22核；卵孢子黄褐色到红褐色，球形。病原菌形态特征L/O/G/O①在适宜湿度条件下，孢子囊生成的最低温度为1-2℃，最适宜温度为15-23℃，最高温度为30℃，而在最适温度条件下，孢子形成所需的最适湿度范围是叶面相对湿度97-100%。②孢子囊萌发的温度范围为：最低l-2℃，最适为15-22℃，30℃有少量萌发，35℃萌发率为0.1%。③卵孢子有极强的抗逆性，经贮存4年后仍能存活；在80℃下烘烤4天，然后在35℃、RH50-60％条件下发酵，孢子仍有侵染能力。④致病性分化：本病菌的美国生理型和澳洲生理型致病性不同。澳洲生理型存在有3个生理小种。病原菌生物学特征：①气流传播：气流传播是烟叶霜霉病得以造成重大危害的主要途径，而孢囊孢子是进行气流传播的主要病原体，根据气流及温度、湿度条件，孢子在两小时之内，可传播200km，最高可达1600km。②卵孢子传播：在加拿大甚至中欧和北欧，卵孢子也是翌年侵染的主要来源。由于卵孢子所具有的特殊抗逆性，存在于烟株下部叶片的卵孢子，可能是病害远地传播的另一途径。传播途径：越冬：菌丝体在田间或温室的病株、自生烟苗、野生烟草上越冬；卵孢子能在病株残体和土壤中越冬。发病条件：温度和湿度是影响病害发生和流行的主要因素，夜间温度10℃，白天21℃，有间歇小雨或结露时间长或叶面湿润，光照弱等有利于病害发生。适生区域：中国大部分烟草种植区。发病规律：1.症状检查：对每批烟叶按上、中、下三层以对角线抽取烟叶，来自烟叶霜霉病疫区的烟叶，每品种每批抽样总数应不少于5万张。抽取的烟叶样品，应在杜绝污染的条件下适当回潮，使叶面舒张，然后在4x40W-5x40W白色荧光灯照射下检查病斑，病斑淡黄褐色，常受叶脉所限，呈不规则圆