BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书

BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书产品简介蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。博奥森开发的BCA蛋白质检测试剂(bicinchoninicacid)是理想的蛋白质定量方法;是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。基本原理碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。主要特点1.准确灵敏,线性范围广:BCA试剂的蛋白质测定范围是10－2000ug/ml；2.快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。3.经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。包装及保存BCA试剂A70ml室温保存BCA试剂B1.4ml室温保存蛋白标准C0.5ml-20℃保存(5mg/1mlBSA)本试剂盒自订购之日起一年内有效。注意事项1.在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使溶解,如发现细菌污染则应丢弃2.样品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。3.要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔,每次均应做标准曲线。4.当试剂A和B混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失，工作液在密闭情况下可保存1周。5．需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水粉蒸发影响检测结果。使用说明1.配制工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。2.稀释标准品：取10微升标准品用PBS稀释至100微升（标准品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足到20微升。3.加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加PBS到20微升。4.各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置30分钟。5.冷却到室温，用酶标仪测定A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书产品简介蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。博奥森开发的BCA蛋白质检测试剂(bicinchoninicacid)是理想的蛋白质定量方法;是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。基本原理碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。主要特点1.准确灵敏,线性范围广:BCA试剂的蛋白质测定范围是10－2000ug/ml；2.快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。3.经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。包装及保存BCA试剂A70ml室温保存BCA试剂B1.4ml室温保存蛋白标准C0.5ml-20℃保存(5mg/1mlBSA)本试剂盒自订购之日起一年内有效。注意事项1.在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使溶解,如发现细菌污染则应丢弃2.样品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。3.要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔,每次均应做标准曲线。4.当试剂A和B混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失，工作液在密闭情况下可保存1周。5．需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水粉蒸发影响检测结果。使用说明1.配制工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。2.稀释标准品：取10微升标准品用PBS稀释至100微升（标准品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足到20微升。3.加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加PBS到20微升。4.各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置30分钟。5.冷却到室温，用酶标仪测定A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。