pH值的测定

pH值的测定测定溶液pH值通常有两种方法，最简便但较粗略的方法是用pH试纸，分为广泛和精密pH试纸两种。广泛pH试纸的变色范围是pH=1～14、9～14等，只能粗略确定溶液的pH值。另一种是精密pH试纸，可以较精确地测定溶液的pH值，其变色范围是2～3个pH单位，例如有pH=1.4～3.0、0.5～5.0、5.4～7.0、7.6～8.5、8.0～10.0、9.5～13.0等许多种，可根据待测溶液的酸、碱性选用某一范围的试纸。测定的方法是将试纸条剪成小块，用镊子夹一小块试纸（不可用手拿，以免污染试纸），用玻璃棒蘸少许溶液与试纸接触，试纸变色后与色阶板对照，估读出所测pH值。切不可将试纸直接放入溶液中，以免污染样品溶液。也可将试纸块放在白色点滴板上观察和估测。试纸要存放在有盖的容器中，以免受到实验室内各种气体的污染。精确测定溶液pH值要使用pH计，其精确度可达0.005pH单位，关键是要正确选用和校对pH电极。过去是使用两个电极，即玻璃电极和参比电极（甘汞或银—氯化银电极），现在它们已淘汰，被两种电极合一的复合电极所代替。玻璃电极对溶液中的氢离子浓度敏感，其头部为一薄玻璃泡，内装有0.1NHCl，上部由银～氯化银电极与铂金丝联结。当玻璃电极浸入样品溶液时，薄玻璃泡内外两侧的电位差取决于溶液的pH，即玻璃电极的电极电位随样品溶液中氢离子浓度（活度）的变化而变化。参比电极的功能是提供一个恒定的电位，作为测量玻璃电极薄玻璃泡内外两侧电位差的参照。常用的参比电极是甘汞电极（Hg/HgCl）或银—氯化银电极（Ag/AgCl）。参比电极电位是氯离子浓度的函数，因而电极内充以4MKCl或饱和KCl，以保持恒定的氯离子浓度和恒定的电极电位。使用饱和KCl是为使电极内沉积有部分KCl结晶，以使KCl的饱和浓度不受温度和湿度的影响。现在pH测定已都改用玻璃电极与参比电极合一的复合电极，即将它们共同组装在一根玻璃管或塑料管内，下端玻璃泡处有保护罩，使用十分方便，尤其是便于测定少量液体的pH值。(A)玻璃电极(B)复合电极(C)参比电极（银－氯化银电极）图1－3pH电极示意图测定pH值时，玻璃电极和参比电极同时浸入溶液中，构成一个“全电池”，如下图所示：使用时应注意：⑴经常检查电极内的4mol/LKCl溶液的液面，如液面过低则应补充4mol/LKCl溶液。⑵玻璃泡极易破碎，使用时必须极为小心。⑶复合电极长期不用，可浸泡在2mol/LKCl溶液中，平时可浸泡在无离子水或缓冲溶液中，使用时取出，用洗并冲洗玻璃泡部分，然后用吸水纸吸干余水，将电极浸入待测溶液中，稍加搅拌，读数时电极应静止不动，以免数字跳动不稳定。⑷使用时复合电极的玻璃泡和半透膜小孔要浸入到溶液中。⑸使用前要用标准缓冲液校正电极，其数据见书后附录，常用的三种标准缓冲液是pH=4.00、6.88和9.23（20℃），精度为±0.002pH单位。校正时先将电极放入6.88的标准缓冲液中，用pH计上的“标准”旋钮校正pH读数，然后取出电极洗净，再放入4.00或9.23的标准缓冲液中，用“斜率”旋钮校正pH读数，如此反复多次，直至二点校正正确，再用第三种标准缓冲液检查。标准缓冲液不用时应冷藏。⑹电极的玻璃泡容易被污染。若测定浓蛋白质溶液的pH值时，玻璃泡表面会覆盖一层蛋白质膜，不易洗净而干扰测定，此时可用0.1mol/LHCl的1mg/mL胃蛋白酶溶液浸泡过夜。若被油脂污染，可用丙酮浸泡。若电极保存时间过长，校正数值不准时，可将电极放入2mol/LKCl溶液中，40℃加热一小时以上，进行电极活化。pH测定时会有几方面的误差：⑴钠离子的干扰：多数复合电极对Na+和H+都非常敏感，尤其是高pH值的碱性溶液，Na+的干扰更加明显。例如，当Na+浓度为0.1mol/L时，可使pH值偏低0.4～0.5单位。为减少Na+对pH测定的干扰，每个复合电极都应附有一条校正Na+干扰的标准曲线，有的新式的复合电极具有Na+不透过性能，如无以上两个条件，则可以将电极内的KCl换成NaCl。⑵浓度效应：溶液的pH值与溶液中缓冲离子浓度和其他盐离子浓度有关，因为溶液pH值取决于溶液中的离子活度而不是浓度，只有在很稀的溶液中，离子的活度才与其浓度相等。生化实验中经常配制比使用浓度高十倍的“贮液”，使用时再稀释到所需浓度，由于浓度变化很大，溶液pH会有变化，因而稀释后仍需对其pH进行调整。⑶温度效应：有的缓冲液的pH值受温度影响很大，如“Tris”缓冲液，因而配制和使用都要在同一温度下进行。