AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)

ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，bindingbuffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elutionbuffer，在systemcontrol窗口点击工具栏内的manual，选择pump→pumpwashbasic，选中A1,B1管道为ON，execute。泵清洗将自动结束。4、安装层析柱在manual里选择pump→flowrate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarmpressure，设置highalarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pump→gradient，按照自己的工艺选择targetB（100％）和length（10CV）。5）设定收集：选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积，exectue。结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900，exectue。6、清洗泵及卸下层析柱：将A1和B1入口放入纯水中，启动pumpwashpurifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中，同样操作将乙醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的时候将堵头拧上，再拆柱子的上端，最后拧上上端的堵头。整个过程防止气泡进入。7、关闭电源：从软件控制系统的第一个窗口unicornmanager点击退出，其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源，关闭电脑电源。