生化试剂培训课件

生化试剂培训教材•一、临床化学自动分析使用术语•1、双波长由主波长和副波长构成，可以消除对实验结果的影响。主波长是生成的产物颜色对光吸收的特有波长。副波长是为消除其他干扰物质在主波长造成测定干扰所设定的波长。•2、反应杯空白在特定波长下，光通过以蒸馏水或空气为反应体系所测得的吸光度值。第一部分基本术语一基本术语3、试剂空白在特定波长下光通过以蒸馏水或生理盐水和相应测定项目的试剂所构成的反应体系所测得的吸光度值。4、样品空白主要为了消除样品本身混浊或色度的干扰。常采用空白通道法，测定校正结果=显色反应通道结果—空白通道结果。多数仪器须另外占用测定通道，分析速度减半。•5、延迟时间•指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。一般用于两点法和速率法。•注意：在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底物耗尽.ALT,AST,BUN,HBDH等负反应试剂，浓度极高时测值不一定是超线性，还有可能是底物耗尽而导致测值很低，这时要注意看线并且把吸光度界限设定在0.5。当有吸光度界限超出报警进行稀释再测定。一般进行10倍稀释再做，如有超出继续稀释。一基本术语6、线性范围指该试剂盒按其说明书使用时可准确测量的范围，线性是试剂的主要性能指标之一，如果试剂线性达不到要求，将直接影响高浓度样本的检测。线性的测量与仪器相关。7、标准差标准差是方差的算术平方根。标准差能反映一个数据集的离散程度。平均数相同的，标准差未必相同。一基本术语8、方差样本中各数据与样本平均数的差的平方和的平均数叫做样本方差。方差越大，样本数据的波动就越大。9、变异系数标准差与平均数的比值称变异系数CV,又称离散系数。变异系数可以反映单位均值上的离散程度。一基本术语•1、终点法经过一定反应时间后，当反应达到平衡（终点）时在指定的1个测光点测定吸光度做到的一点分析法。•反应曲线如图2-2所示：图2-21点终点法反应曲线•分析项目：如总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）等。第二部分测试和校准方法图2-21点终点法反应曲线一、测试方法吸光度时间（s）SBB1B2B3S+R1R2•（2）2点终点•在被测物反应尚未开始时，选择第一个测光点，在反应到达终点或平衡时选择第二个测光点，这2个测光点的吸光度之差用于计算样本浓度，称为2点终点法。一、测试方法反应曲线如图2-3所示：一、测试方法吸光度时间（s）SBB1B2B3S+R1R2图2-32点法终点分析项目：如酶法的肌酐（CRE）等。•2点速率测定2个测光点，此两点既不测反应初始吸光度也不是终点吸光度，在单位时间内计算2点间的吸光度之差用于样本浓度的计算，称为2点速率法，反应曲线如图2-4所示：一、测试方法图2-42点速率一、测试方法吸光度时间（s）SBB1B2B3S+R1R2反应界限水平（t）一、测试方法速率法A根据两测光点之间每分钟吸光度的变化率计算浓度或活性值的测定方法，称为速率A法，反应曲线如图2-5示：吸光度时间（s）SBB1B2B3S+R1R2Al反应界限水平（t）分析项目：丙氨酸氨基转移酶（ALT）二、常见校准方法（1）1点线性法（K因数法）通过测定校准液1（试剂空白）的吸光度和输入的K因数而得出的工作曲线图2-61点线性校准曲线（K因数法）二、常见校准方法ALT,AST参数设置时，如果非本公司机器可以将试剂和样本比改为30：1，即试剂1和试剂2和样本比为240：60：10，通过校准确定K值；这样的好处是线性可以提高到1500U/L，抗干扰的能力提高1.5倍，弊端是CV值不够理想，本公司的机器可以将试剂样本比设置为20：1，即试剂1和试剂2和样本比为240：60：15，通过校准确定K值。这样的好处是线性可提高至1000U/L，并且兼顾了CV值。（e）适用的分析方法1点终点法、2点速率法、2点终点法、速率A法二、常见校准方法（2）2点线性法测定校准液1（试剂空白）与校准液2，形成线性工作曲线,校准曲线如图2-7所示：二、常见校准方法（3）多点线性法通过空白（或校准液1）和校准液（第2校准液及第6校准液）的测定用线性回归制成线性工作曲线,校准曲线如图2-8所示:图2-8多点线性校准曲线（线性）（4）Logit-log3P（非线性法）适用于随浓度升高而吸光度表现为收敛的工作曲线,Logit-log3P（非线性法）校准曲线如图2-9所示:三、常见校准方法图2-9Logit-log3P校准曲线（非线性法）（5）Logit-log4P（非线性法）适用于随浓度升高而吸光度表现为收敛的工作曲线,Logit-log3P（非线性法）校准曲线如图2-10所示:三、常见校准方法图2-10Logit-log4P校准曲线（非线性法）（6）Logit-log5P（非线性法）具有与Logit-log4P同样的特征，由于此方法多一个计算参数在某些情况下结果更加精确,校准曲线如图2-11所示:三、常见校准方法图2-11Logit-log5P校准曲线（非线性法）三、常见校准方法图2-12指数函数校准曲线（非线性法）（7）指数函数法（非线性法）工作曲线随浓度的增加吸光度出现离散趋势,校准曲线如图2-12所示:（4）Logit-log3P（非线性法）适用于随浓度升高而吸光度表现为收敛的工作曲线,Logit-log3P（非线性法）校准曲线如图2-9所示:三、常见校准方法图2-9Logit-log3P校准曲线（非线性法）（9）折线法（非线性法）从校准液（1）测定到校准液（5）或（6），绘制出工作曲线。该工作曲线是将校准液各点的吸光度值用多条直线连接起来,校准曲线如图2-14所示:图2-14折线法校准曲线（非线性法）根据校准液数量的不同，有四种不同的校准类型。•1、空白校准•只对校准液1（试剂空白）进行校准。•注意事项：当校准液的数量输入“1”时（K因数法），只能进行试剂空白的校准。•2、量程校准•只校准试剂空白液之外的1点校准液的方法。•3、2点校准•这是一种校准试剂空白液及另1校准液的校准方法。•这是一种校准试剂空白液及另1校准液的校准方法。•4、多点校准•对在“化学参数”窗体设定的校准液全数进行校准（包括试剂空白液），校准后校准结果被更新。•适用校准方法•多点线性、Logit-Log3P、Logit-Log4P、Logit-Log5P、指数函数、样条、折线。一、分类和比较•1、分类•按形态分固体试剂和液体试剂•液体试剂又包括液体单试剂和液体双试剂。2、比较a固体试剂优点储藏运输方便，适合低端基层客户。缺点使用时需要复溶，由于人为原因易造成批间差。b液体双试剂优点稳定性好，测值准确，适合全自动生化分析仪。缺点在全自动分析仪上需要两个试剂位。c液体单试剂优点使用方便，适合半自动、全自动生化分析仪，在全自动分析仪上节省试剂位。缺点稳定性不如液体双试剂。（一）酶促反应曲线或化学反应速度时间曲线观察•终点法试剂盒•（1）试剂空白吸光度值是否符合要求，试剂空白吸光度值大于规定标准，表示试剂质量有变化，会影响测定的精密度、准确度和线性。•（2）试剂空白的反应速度时间曲线平坦，吸光度值在整个反应期间变动不大，否则说明试剂本身不稳定，会导致测定偏差。•（3）反应能否在规定时间内达到平衡。•（4）反应稳定期观察：反应达到平衡后，吸光度值最大并维持不变，这一期间为反应稳定期。•（二）抗干扰作用观察•双试剂型试剂盒抗干扰作用强。•（三）测定线性范围•指该试剂盒按其说明书使用时可准确测量的范围。•三、失控情况的处理•重开一瓶质控品。•更换同一批号的另一批质控品。•更换另一批号的质控品。•更换另一厂家的质控品。原因：1、试剂中含有下一个测试所要测定的底物，或是含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而直接干扰下一反应的测定结果；2、该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来了间接的干扰，因为在有试剂污染的情况下，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。一、肝功能测试项目ALB,TP,ALT/GPT,AST/GOT,γ-GGT，SCHE,ALP,ADA,ICDH,GLDH,AMY,TBIL,DBIL，TBA,NH3肝胆疾病的生物化学检测肝功能实验的内容蛋白质代谢功能检查胆红素代谢检查胆汁酸代谢检查血清肝酶谱的检查1.肝脏的生理功能1、代谢功能：三大物质（糖、蛋白质和脂类）的同化、储存和异化；核酸代谢、维生素的活化和储藏；激素的灭活及排泄；胆红素、胆酸的生成；铁、铜等金属的代谢2、排泄功能：对胆红素和某些染料的排泄3、解毒功能：生物转化功能（同化、异化）4、物质合成功能：凝血和纤溶因子、纤溶抑制因子的生成及对活性凝血因子的灭活清除白蛋白albumin(ALB)测定值受体位影响；躺卧位时较直立时低。1、血清白蛋白浓度降低见于：（1）营养不良。如摄入不足或消化吸收不良。（2）消耗增加。如多种慢性消耗性疾病（严重结核，甲亢或恶性肿瘤等）。（3）合成障碍。主要是肝功能障碍。若持续低于30g/L，则提示可能为慢性肝炎或肝硬化。（4）蛋白丢失过多。如急性大出血，严重烧伤以及慢性肾脏病变等。（5）较罕见的先天性白蛋白缺乏症病例。2、血清白蛋白增高主要见于严重失水导致的血浆浓缩。总蛋白totalprotein(TP)血清蛋白主要反映肝脏合成功能和肾脏病变造成蛋白丢失的情况。1、血清总蛋白增高可见于：（1）血清水分减少，使总蛋白浓度相对增加。（2）血清蛋白合成增加。如多发性骨髓瘤（主要是球蛋白增加）。2、血清总蛋白减少可见于：（1）血清水分增加，使总蛋白浓度相对减少。（2）营养不良。如摄入不足或消化吸收不良。（3）消耗增加。如多种慢性消耗性疾病。（4）合成障碍。主要是肝功能障碍。（5）蛋白丢失。如急性大出血，严重烧伤以及慢性肾脏病变等。丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)ALT活力升高见于：（1）肝胆疾病。（2）心血管疾病。（3）其它疾病：胰腺炎、外伤、严重烧伤、休克等。（4）药物和毒物，如氯丙嗪、四氯化碳、有机磷等亦可导致ALT活力上升。（5）溶血可导致ALT活力升高，严重黄疸及浑浊血清应稀释后再进行测定。天门冬氨酸氨基转移酶AST/GOTAST主要存在于心肌、肝、。血清AST活性升高。1、AST在心肌细胞内含量最高，心肌梗死时（MI）血清AST活力升高，18-24小时达高峰，AST峰值与梗死灶大小大致成比例。如果达参考值上限的10-15倍，往往有致死性的梗死发生。2、肝病。3、AST水平升高还见于进行性肌营养不良、皮肌炎、肺栓塞、急性胰腺炎、等。γ-谷氨酰转移酶γ-GGT许多疾病可导致血清γ-GGT水平升高，但以肝胆疾病最为常见。1、肝胆疾病：（1）肝内或肝后胆道梗阻患者血清γ-GGT上升最高。（2）原发性和继发性肝病者γ-GGT水平也较高。（3）酒精性肝硬化、大多数重度酗酒者γ-GGT常升高。2、胰腺疾病：急慢性胰腺炎，胰腺肿瘤。胆碱酯酶（SCHE）1、有机磷中毒时，SCHE活性显著降，可用于有机磷中毒的诊断及预后估计。2、肝功能评价。碱性磷酸酶（ALP）ALP主要存在于肝脏及骨骼。血清ALP活力升高常见于肝胆及骨骼疾病：腺苷脱氨酶（ADA）1、获得性免疫缺陷综合症（AIDS）红细胞ADA活性特别高，血清中ADA活性也较高。2、肿瘤患者血清及组织中ADA活性均升高。亮氨酸氨基肽酶(LAP)LAP测定主要用于辅助诊断各种类型的肝内外胆汁淤积性疾病：（1）肝胆胰恶性疾病。（2）肝胆胰良性疾病常妊娠时血清lAP活力增高。异柠檬酸脱氢酶（ICDH）ICDH活力是实质性肝脏疾病的敏感指标。谷氨酸脱氢酶（GLDH）只要有肝细胞损害的存在，血清GLDH活力即增加。淀粉酶(AMY)血清淀粉酶测定主要用于急性胰腺炎的诊断。胆红素Bilirubin1、血清总胆红素测定反映了黄疸的程度。2、血清结合胆红素的测定对诊断轻度肝细胞损害也有一定帮助。胆汁酸TBA代谢异常涉及多种消化系统疾病。与肝功能试验联合应用，可提高诊断价值。血氨（NH3）1、生理性血氨增高见于进食高蛋白或运动后。2、理性血氨增高可见于重症肝炎，肝肿瘤，肝昏迷，肝性脑病以及某种神经系统损害的疾病等。3、血