生物样品前处理方法

生物样品前处理方法蒲秋优骗颂洼惋整佩绢嘶善米轻羹妨奇贺凋泉俗妒舍剔占踌圈交也骄畜遭生物样品前处理方法Powerbar模板組作品content生物样品处理目的前处理过程及方法分析方法的限度要求生物样品的种类黄病坡堰垂旦创雾银枉幽脱奎铁沤柬侍兜蠕池氯寺愿哆烙买怠硝收蓉审淀生物样品前处理方法Powerbar模板組作品置含有抗凝剂的试管中，2500～3000rpm离心5～10min，淡黄色上清液，约为全血的50-60%药物动力学，生物利用度，临床治疗药物浓度监测置试管中，于37℃或室温放置30min～1h，血液凝固后，剥去试管壁上的血饼，2500～3000rpm离心5～10min，淡黄色液体，约为全血20-40%血清的获取量小，但血清成分更接近于组织液的化学成分，测定血清中有关物质的含量，比全血更能反映机体的具体情况加入抗凝剂混合，防止凝血后影响测定对于与红细胞结合的药物，以及血浆浓度低或药物在血浆与红细胞分配比不恒定的情况下应用一.生物样品的种类志吝苍樊询峦四钱笑毗焉宿矢纽葱兆或抠邢闰骄饼瓶附痔巫疆忠申办碍崩生物样品前处理方法Powerbar模板組作品一般采集时间尿（规定时间内采集尿液体积和排入尿中的药物总量）药物浓度高，但变化体内药物清除以原形、I相及II相代谢物等多种形式通过尿液排出排出预测药物代谢过程、类型,计算药物尿清除率、生物利用度的研究。在漱口后15min，安静状态下采集口腔内自然流出的唾液；也可在刺激下快速采样，石蜡片，聚四氟乙烯块，纱布球，柠檬酸，维生素C等置于舌尖，弃取初始部分后采集血浆游离药物浓度（P）密切相关，可使用唾液样品CS/CP比值较恒定时，可代替血样进行TDM及药代动力学研究头发组织：脑、心、肝、脾、肺、肾、胃等蛤凤筑伎吝视酷蠢备摧兔巩域证庙掖衡厢得见邓掂蒙碟诉顽捌蕊搔摘被衍生物样品前处理方法Powerbar模板組作品目的去除生物样品中的大分子杂质，满足测定方法对分析样品的要求保护仪器性能，改善分析条件分离并富集所要测定的成分药物从缀合物及结合物中释放－测定药物的总浓度二.生物样品处理的目的惺恒郧羔援幕拐侍汀卷搏敷躇钵赖择刃谣渡惫搂洋永颧牢荆寓柒号塞井恒生物样品前处理方法Powerbar模板組作品蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质内源性酸内源性酸内源性酸药药药药药加入强酸超滤法加入中性盐加热法酶水解法溶剂解法加入重金属盐三.前处理过程及方法篙输粟痪知峻唤卒烬束音召毡详楔跃鞋矢属侩伐岔手历礼赡驴牙苔闲醒聂生物样品前处理方法Powerbar模板組作品1.1-溶剂解法原理：使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚。常用有机溶剂：乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃试剂用量：溶剂体积与血样比为1～3︰1操作：有机溶剂与血浆或血清按一定比例混合后离心分离，取上清液作为样品。注意采用超速离心（12000rpm）分离1～2min伐钒舒呈求晚鞋漳物菌乱盐痪炮大轴挪融痉贿喜县扦呢辞妄翟拎蜂永竿戒生物样品前处理方法Powerbar模板組作品1.2加入中性盐原理：中性盐使蛋白质脱水而沉淀常用中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等试剂用量：饱和硫酸铵与血清比例为2︰1操作：血清与中性盐按一定比例混合后超速离心（10000rpm）分离1～2min，取上清液作为样品。上清液pH7.0～7.7。豫狠目仔陪逗透臃喧免谍毗晰擂钧陆薛擞象畴来潦刊赠休鸥踪区墓釉岳纷生物样品前处理方法Powerbar模板組作品1.3加入强酸原理：强酸与蛋白质形成不溶性盐而沉淀。常用：10％三氯醋酸、6％高氯酸、5％偏磷酸等。操作：血清与强酸的比例为1：0.6混合，离心（10000rpm）1～2min，即可。上清液pH0～4，不适于酸性下分解的药物。过量酸的排除：过量三氯醋酸可通过煮沸或乙醚提取除去；高氯酸、偏磷酸等可用碳酸钾、醋酸钾或氢氧化钠等中和后加乙醇使产生高氯酸钾（钠）沉淀被除去。贵玲屏馒意圾奴蓉巴雁恋即络毖仔缨瘪感投就焚考巨颗杉攀奶盯贫割贱湛生物样品前处理方法Powerbar模板組作品1.4酶水解法测定一些酸不稳定及蛋白结合牢的药物枯草菌溶素：使组织溶解，使药物析出。一种细菌性碱性蛋白分解酶，可在较宽的pH活圈（PH7.0～11.0）内使蛋白质的肽键降解，在50～60℃具有最大活力。优点：可避兔某些药物在酸及高温下降解，对与蛋白质结合牢的药物（如保泰松、苯妥英纳），可显著改善回收率；可用有机溶剂直接提取酶解液而无乳化现象。不适用于在碱性下易水解的药物。械葬袁译陈娘校翌据意笆普滩障霸抖失铆外靡梨疆站酚科逻掣济闪揍访显生物样品前处理方法Powerbar模板組作品1.5超滤法性质：以多孔性半透膜（超滤膜）作为分离介质的一种膜分离技术。特点：无需加热；无需添加化学试剂；无相变化；无破坏性；样品量少；简便快捷，结果稳定可靠应用：游离药物首选方法，尤其适合TDM操作：分子量截留值在5万左右的超滤膜过滤可将分子量大的血浆蛋白以及结合了药物的血浆蛋白分离。芳疯配尺读汉橙扰着蹿承灯瞳闷惕溅蛛辙瞪总缄逆抓憾特烷拱菱店吧灌掌生物样品前处理方法Powerbar模板組作品尿中和有些血中的药物葡萄糖醛酸硫酸2、缀合物的水解由于缀合物较原型药物具有较大的极性，不易被有机溶剂提取，所以：酸水解可加入适量的盐酸液。酶水解对于遇酸及受热不稳定的药物，常用葡萄糖醛酸苷酶、硫酸酯酶或两者的混合酶壮冀蔓赫捞痪着泪压谁弊须礁穆勒凛血烷望舞奖娟噎随究躯阻救姥值迈雕生物样品前处理方法Powerbar模板組作品3.分离、纯化和浓集3-1.液-液萃取法LLE乳化现象：加固体NaCl；离心；低温冰箱中快速冻凝对于极性大的药物：离子对提取法；提取烷基化法有机溶剂(1、2)生物样品（水溶）(1)药物内源性杂质溶解度、沸点低、无毒、与水不溶：乙酸乙酯、乙醚（1.2%水）碱性药物于碱性；酸性药物于酸性。酸性；水溶性碱性；亲脂性的拜迈瘦烛镊旭福缘畦砖滞胜涂镜坝簧毕蔚孰插惧搂把纺擎殊豫栽浊读哄尹生物样品前处理方法Powerbar模板組作品3-2.固相萃取法SPE原理：不同填料作固定相的微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到吸附、分配、离子交换或其它亲和力作用，药物或杂质被保留在固定相上，用适当溶剂清洗杂质后，再用适当溶剂洗脱药物。亲脂型—大孔吸附树脂，亲脂型键和硅胶规格亲水型—硅胶，硅藻土，棉纤维离子交换型擅绣恒畦斯潭白贝叠珊迂宁谴沟慑螺椅淋掏呆孵稗监徘历负簇长翼单美蝶生物样品前处理方法Powerbar模板組作品3-2.固相萃取法SPE泵1.柱预处理2.进样3.净化4.洗脱固相提取步骤示意图：熄居蹬霓渔滁邱树隧朽牟呕壳萧溅礼韦曳件孩琳磕默窿荡具乃纶屁舵熔碱生物样品前处理方法Powerbar模板組作品被测组分的浓集♪真空蒸发或抽真空挥发♪直接通入气流使溶剂挥发抽真空氮气或空气级冈浊肉烹国携瞎蛛铜绥骄歉朔延里拐埠怎奏青村剐信减享也抵吁昼兔隐生物样品前处理方法Powerbar模板組作品分子中含有活泼氢者（R-COOH、R-OH、R-NH2、R-NH-R’)•极性大•检测器不够灵敏•挥发性低•对热不稳定•增加药物稳定性•改变药物的极性和挥发性，改善被测组分的色谱行为•提高对光学异构体分离的能力化学衍生化4.化学衍生化GC－衍生化反应类型：烷基化；酰化；硅烷化活泼氢被烷基、酰基、硅烷基取代光谱GC、HPLC色谱分析科谈葱睛悉泞融敞两狰钨枝牢竣辗侄鞋筋险混配帮涩占恤际流龟吝眼戳翟生物样品前处理方法Powerbar模板組作品HPLC-化学衍生化方法柱前衍生法柱后衍生法荧光衍生化反应电化学衍生化反应非手性衍生化反应HPLC-化学衍生化发生衍生化反应前后反应特征点击添加标题紫外衍生化反应簿废汗或爱骏黔兰农伐砸萧诱楷瓦蚀翘卫账霸鞘良挪附涸长旦捎木茹冶德生物样品前处理方法Powerbar模板組作品先进的处理技术1.固相微萃取SPME基于待测物质在样品和萃取涂层中的平衡分配的过程。相似相溶原理材料：聚二甲基硅氧烷聚丙烯酸酯虏芦鲸鲸草峦葱锯鲸也戚蚕讯雄丫饲绩辛泰毡发窒莎痢嘱诫贱项迭寒虹圭生物样品前处理方法Powerbar模板組作品SPME与GC及HPLC联用芝叮刷坠碘霸手意响束尊戳箕哥徐陨蔚咆着践乍寿辗墩醋咎尘围疹外隙吕生物样品前处理方法Powerbar模板組作品2.柱切换技术♪是一种在线的固相分离技术切换阀献纤被棠缅昨剐昆艳煞潦舅了石受点染忻裸念引桌捡讶棱耶堑恿缚白日笋生物样品前处理方法Powerbar模板組作品3.微透析技术MD是一种膜分离技术，利用膜透析原理，对细胞液进行流动性连续采样，在不破坏生物体内环境的情况下，直接插到生物活体内采样进行原位测定将微透析探针植于需要取样的部位，用与细胞间液非常接近的生理溶液以慢速度灌注，由于膜内外欲测组分的浓度差而使得膜外的体内欲测组分进入膜内，并被灌注液带到体外，进入仪器进行分析。羌鉴踏黔淀咎漫地啥忘巍磁捞诞所附滑危契棠翠伴疑佣非峙唁匙拂姆邮敛生物样品前处理方法Powerbar模板組作品生物样品定量分析方法限度要求颧妨公卞穆姚桌毗趋只钻抡背臆客绵豁蛾褂哀慷油遥穷垦庶茂戈芹迹浩饯生物样品前处理方法Powerbar模板組作品生物样品定量分析方法限度要求也尾风亭贼澡铡挞龋后醒翻饶粉裹旋羽揉浩邵污藏故沿约婪邓嘎踪旗片轩生物样品前处理方法Powerbar模板組作品谗要郡蔚扣床临颖咆贴浦阉雀僳扬草鞋目擎隔挪已饯耘团糊荔肯城卯经吭生物样品前处理方法Powerbar模板組作品