实时荧光定量PCR仪介绍

东胜创新生物科技有限公司东胜创新生物科技有限公司OpticonOpticon及及OpticonOpticon22实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪介绍仪介绍聂尚海博士2东胜创新东胜创新仪之仪之图片图片生产商：美国MJResearch公司3东胜创新东胜创新仪之仪之组成介绍组成介绍‰热循环仪（PCR仪）‰荧光检测系统‰计算机及软件系统4东胜创新东胜创新仪仪‰热循环仪（PCR仪）‰荧光检测系统‰计算机及软件系统5东胜创新东胜创新仪仪加热方式：‰水加热‰空气加热‰电热丝加热‰半导体+电热丝加热致冷方式：‰水致冷‰空气致冷‰压缩机致冷‰半导体致冷6东胜创新东胜创新‰加热:电热丝+半导体‰制冷:半导体7东胜创新东胜创新仪结构：‰三传感器‰双区域温度-----温度梯度8东胜创新东胜创新、温度变化曲线比较II、温度梯度曲线MJResearch特点：同时到达目标温度以保证：‰延伸时间基本相同‰实验结果可信度高‰实验重复性好Column1Column2Column3Column4Column5Column6Column7Column8Column9Column10Column11Column129东胜创新东胜创新仪之仪之热循环仪优点热循环仪优点优点：‰体积小‰控温快速准确‰精确性、均一性能良好‰主动致冷，可低于室温‰带温度梯度11东胜创新东胜创新仪之仪之组成介绍组成介绍‰热循环仪（PCR仪）‰荧光检测系统‰计算机及软件系统12东胜创新东胜创新仪之仪之光源及检测器光源及检测器光源：‰钨灯‰氩离子激光‰发光二极管(LED)检测器：‰摄像头(CCD)‰光电二极管‰光电倍增管(PMT)14东胜创新东胜创新优势‰价格便宜‰寿命长稳定‰体积小‰产热少劣势‰需要滤光片发光二极管（LED）15东胜创新东胜创新仪之仪之光电倍增管（光电倍增管（PMTPMT））优势‰超灵敏:可检测到单个光子‰检测线性范围广劣势‰体积大‰一次只能读一个样品光电倍增管(PMT)16东胜创新东胜创新™™‰蓝色LED（96个）‰96个发光管依次发光，每个2ms‰扫描的各种参数都可控‰每2秒钟扫描96个样本17东胜创新东胜创新仪之仪之检测系统检测系统--------结构结构‰绿色LED阵列（96个）‰96个发光二极管依次发光，每个1-100,000ms‰扫描的各种参数都可控‰每2秒钟扫描96个样本‰双PMT检测器18东胜创新东胜创新仪之仪之检测系统检测系统--------小结小结‰不产热的光源---发光二极管（LED）‰灵敏度高的检测器---光电倍增管（PMT）19东胜创新东胜创新仪之仪之检测器优点检测器优点优点：‰不产热---无散热装置，全封闭‰无机械转动装置---抗震性强，无需经常校准，耐用‰灵敏度高‰线性范围广20东胜创新东胜创新仪之仪之组成介绍组成介绍‰热循环仪（PCR仪）‰荧光检测系统‰计算机及软件系统21东胜创新东胜创新监控软件Opticon2WindowsNT4.0;Option1.04监控软件Opticon操作系统光盘刻录机光驱15英寸液晶，VIEWSONIC显示器40G硬盘128兆内存奔腾四1.7GCPUIBM原装计算机22东胜创新东胜创新性能小结性能小结荧光检测热循环仪光色:蓝色光均一性:±0.4°C染料:FAM,SYBRGreenI,MolecularbeaconsTaqManProbes精确性:±0.3°C激发光波长：450-495nm发射光波长:515-545nm升降温速率:最高3°C/秒.灵敏度:5nM的荧光素温度梯度:有检测范围:100-108拷贝容量:96样品反应管:0.2mL反应管&96孔板操作系统:WindowsNT23东胜创新东胜创新荧光检测光色:绿色光染料:第一通道：FAM,SYBRGreen第二通道：VIC,HEX,Joe,TAMRA,ROX等激发光波长：470-505nm发射光波长:523-543nm;540-700nm灵敏度:5nM的荧光素检测范围:100-1010拷贝容量:96样品反应管:0.2mL反应管&96孔板操作系统:WindowsXP24东胜创新东胜创新仪之仪之性能特点性能特点™96个绿色LED依次激发样品™激发范围:470-505nm™通过两个PMT实现同时双色检测，™双通道™通道一(523-543nm)：FAM,SYBRGreenI™通道二(540nm以上)：VIC,HEX,Joe,TAMRA,ROX等25东胜创新东胜创新仪之仪之新增功能新增功能新增分析功能：™同时显示双色检测的数据及标准曲线™新的基因型分析窗口--CtvsCt及终点分析™有单色及双色两种模式26东胜创新东胜创新仪之仪之性能优点性能优点优点：‰热循环仪技术可靠‰检测系统不发热，光源瞬时发光‰无机械转动部分系统经久耐用‰灵敏度高‰有温度梯度27东胜创新东胜创新仪之仪之结果分析结果分析--标准定量曲线标准定量曲线原理：初始模板量的对数与C(T)循环数之间呈线性关系荧光强度---循环数曲线初始模板量对数---C(T)循环数标准曲线28东胜创新东胜创新仪之仪之结果分析结果分析--样品模板定量样品模板定量确定初始模板的浓度‰初始DNA量越多,荧光达到某一值（域值）时所需要的循环数越少‰Log浓度与循环数呈线性关系，根据样品扩增达到域值的循环数就可计算出样品中所含的模板量29东胜创新东胜创新仪之仪之结果分析结果分析--融解曲线融解曲线溶解曲线分析（Tm）30东胜创新东胜创新仪之仪之监控软件监控软件孔类型空（Empty)空白(Blank)定量标准(Quantitationstandard)样品(Sample)平板设置(PlateSetup)孔描述样品体积定量标准温度（Temperature)读板（PlateRead)梯度（Gradient）融解曲线（MeltingCurve)循环（Goto)主界面(Master)程序程序设置(Protocol)计算（Calculated）模块（Block)温度热盖温度及热盖模式恒温（Constant)随温（Tracking)关闭（Off)32东胜创新东胜创新