贝克曼ACCESS2说明书

叶酸检测步骤用ACCESS®免疫分析系统对人血清、血浆或红细胞内叶酸的定量检测内容表原理2标本采集2试剂和必须品3定标6质控6步骤7检测结果7开始检测9检测注意事项9参考文献10BeckmanCoulter,Inc.•Fullerton,CA92834FormattedperNCCLSDocumentGP2-A3105295C©Copyright2000BeckmanCoulter,Inc.Page1of10FormattedperNCCLSDocumentGP2-A3105295C©Copyright2000BeckmanCoulter,Inc.原理检测原理Access中叶酸检测是一种竞争结合受体的分析方法，再此检测中，血清或肝素抗凝血浆不需要预处理即可对所含叶酸进行检测。对于红细胞中叶酸的检测，全血标本首先用溶血剂进行手工溶血，该溶血剂由抗坏血酸和与叶酸游离的人血清白蛋白组成。前处理液溶解了红细胞并将红细胞中以聚合谷氨酸形式存在的叶酸转化为血清中的存在形式，即单谷氨酸形式（1），经全血预处理后得到的标本被定义为溶血产物。血清、肝素抗凝血浆或溶血产物标本中的叶酸被处理由内源性结合蛋白中解离出来，在中和了反应混合物后，叶酸结合蛋白，小鼠抗叶酸结合蛋白抗体，标记了碱性磷酸酶的叶酸作为酶结合物，包被了羊抗小鼠捕获抗体的磁性颗粒被加入到反应管中。标本中的叶酸和作为酶结合物的标记了碱性磷酸酶的叶酸和定量的叶酸结合蛋白表面的位点进行竞争结合，最后复合物通过小鼠抗叶酸结合蛋白抗体与磁性颗粒结合。在磁性分离区域进行分离和冲洗以去除未和固相结合的游离成分。化学发光底物，Lumi-Phos*530加入到反应管中，与反应体系中的碱性磷酸酶进行反应并，发出的光量子被光电倍增管检测，光量子的强度与标本中的叶酸含量成反比，对照仪器中储存的多点定标曲线即可得知样品中叶酸的含量。概述叶酸是一种必须维生素，可由多种食物提供，如深叶蔬菜，柑橘类水果，酵母菌类，大豆，鸡蛋和牛奶。它在小肠吸收，在肝脏储存。自然状态下叶酸可存在多种形式，该些形式均可通过同功酶的形式表达它的生物学功能，即转运单个的碳单位（2.3.4），它对于正常细胞的生长和DNA的合成至关重要。叶酸的缺乏可导致巨细胞贫血和最终导致多种神经症状（4.5）。叶酸缺乏可由食物摄入过少，无效吸收或过度叶酸利用等原因引起，过度利用在怀孕时的发生非常普遍，其它例如酗酒、肝炎或其它肝脏损害性疾病均可导致叶酸的过度利用（5.6）。血清和红细胞内叶酸水平的检测均可反应体内的叶酸状态，血清中叶酸的浓度提示近期的叶酸摄入情况，红细胞内叶酸浓度是提示长时期内叶酸的储存的最佳指标。红细胞内叶酸水平的过低提示长期的叶酸缺乏。叶酸和维生素B12由蛋氨酸合成的反应途径所联系在一气，两者中任何一种的缺失都将影响该途径并导致相似的临床症状（4.5）。此外该普通的代谢途径还将引起这样的结果，即维生素B12的无效会破坏叶酸进入红细胞，这将会导致红细胞内叶酸浓度的下降，即便叶酸的摄入正常。由于上述原因，在临床工作中一般应同时检测两种维生素，治疗的方法则视是哪一种维生素缺乏而定。标本采集血清或肝素抗凝血浆叶酸A.空腹时的血清或肝素抗凝血浆是推荐的样品类型，样品应避光保存以防降解。如果检测不能立即进行，将样品保存于2到8°C冰箱，如果检测不能在8小时内完成或要将样品分装保存，则将样品保存于–20°C冰箱种(7,8)。B.遵守以下推荐的血清标本处理、运行和储存步骤(9，10):1.用真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。2.血清标本应在离心前使标本完全自然形成凝块。3.全程保证样品管的密闭状态。4.离心获得血清后的两小时内，至少将500µl血清或肝素抗凝血浆转移到一个密闭的储存试管中备用。Page2of10FormattedperNCCLSDocumentGP2-A3105295C©Copyright2000BeckmanCoulter,Inc.5.贝克曼公司推荐冻存标本最多保存6个月而不影响检测。6.标本只能复溶一次。C.不要使用溶血标本，红细胞中叶酸浓度大大高于血清或肝素抗凝血浆中的浓度，溶血会导致假阳性结果。D.样品中最高含有10mg/dL(171µmol/L)的胆红素和含有相当于1800mg/dL(20.32mmol/L)甘油三酯的脂血标本不影响叶酸浓度的检测，另外，样品中加入含有5g/dL(50g/L)的人白蛋白作为内源性白蛋白不影响叶酸浓度的检测。红细胞叶酸测定A.采集全血标本，用EDTA或肝素抗凝，检测并计算公式中需要的红细胞压积，在准备溶血前于2到8°C至多保存4小时。B.将Access红细胞叶酸溶血剂用25毫升去离子水复溶，放置至少40分钟，直到完全溶解。使用前缓慢的旋转混合，在2到8°C至多保存2周，每次使用前要使该液体恢复至室温。C.慢慢的颠倒混匀全血标本数次以确定完全混匀，吸取50微升全血用1毫升溶血剂进行溶血。D.慢慢的颠倒混匀数次并在室温下避光保存至少90分钟以使其稳定，90分钟后可在3小时内检测该溶血液或在–20°C下保存标本或分装标本。在–20°C条件下该溶血液最长可稳定30天。E.检测冷冻后的溶血液，复溶并使避光使标本恢复室温，用颠倒混匀的方法混匀标本，3小时内分析样品。F.样品中最高含有10mg/dL(171µmol/L)的胆红素和含有相当于1800mg/dL(20.32mmol/L)甘油三酯的脂血标本不影响叶酸浓度的检测，另外，样品中加入含有5g/dL(50g/L)的人白蛋白作为内源性白蛋白不影响叶酸浓度的检测。试剂和仪器BeckmanCoulter,Inc.4300S.HarborBlvd.Fullerton,CA92834A.R1:Access叶酸试剂盒：2盒装货号：33010，100个测试，50测试/盒。•现成可用•在2到10°C冰箱中顶端朝上存放•试剂盒必须在2到10°C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用•在2~10°C冰箱中可一直保存到标签中注明的失效期•试剂盒被吸取使用后，在2到10°C条件下可稳定14天•一旦发现有试剂盒上弹性体破裂或质控结果超出范围等现象出现即代表试剂盒失效•所有的抗血清是多抗，除非特殊说明1.R1a:标记了碱性磷酸酶（牛源性）的叶酸酶结合物和悬浮于缓冲液中的包被了羊抗小鼠IgG的磁性颗粒，含有人血清白蛋白，0.1%叠氮钠和0.25%ProClin**300。2.R1b:抗坏血酸钠溶液，PH~7。Page3of10FormattedperNCCLSDocumentGP2-A3105295C©Copyright2000BeckmanCoulter,Inc.3.R1c:叶酸结合蛋白（牛源性）乳剂和小鼠抗叶酸结合蛋白单抗包含在缓冲液中，含有人血清白蛋白，0.1%叠氮钠和0.25%ProClin**300。4.R1d:0.1N盐酸溶液。5.R1e:0.5N氢氧化钠溶液。B.Access叶酸定标品货号：33015，4.0毫升/瓶定量检测的定标是用已知分析浓度的标本，象病人标本一样进行检测以观察光量子值。光量子值和已知浓度之间的数学关系就构成了定标曲线。定标曲线可将样本检测中得到的光量子值转化成特定的分析浓度。•现成可用•−20°C保存，只可复溶一次•使用前轻轻颠倒混匀，避免产生气泡•−20°C保存可稳定至失效期•2-10°C可稳定三个月•质控结果不在范围表明失效详情请参见操作指南和参考手册中有关定标原理、设置定标、定标要求的输入和回顾定标数据等内容。针对不同的标本类型，如血清、肝素抗凝血浆或红细胞叶酸溶血液标本均需建立各自的定标曲线。血清或肝素抗凝血浆检测时的测试名称是叶酸（Folate），而红细胞溶血液检测时的检测名称是红细胞叶酸（RBCFol）。每一种样品类型的定标曲线都有单独的定标卡并在不同的样品架上进行定标，但所用定标品为同一套。1.S0:以人血清白蛋白(HSA)为基质的缓冲液，离子表面活性剂，0.1%叠氮钠和0.25%ProClin**300，含有0.0ng/mL(nmol/L)的叶酸。2.S1,S2,S3,S4,S5:在缓冲基质中的叶酸（蝶酰谷氨酸）的浓度约为1.0，2.5，5.0，10.0和20.0ng/mL(大约2.3,5.7,11.3,22.7,and45.3nmol/L)，另外含有人血清白蛋白，离子表面活性剂和0.1%叠氮钠和0.25%ProClin**300。准确浓度请参见各定标品瓶上的注明。3.定标卡：一张是提供给血清或肝素抗凝标本检测所用，标记有AccessFolate，另一张是提供给红细胞叶酸检测所用，标记有AccessRBCFolate。C.Access底物货号为81906:4瓶x130ml/瓶。现成可用，下表注明了储存条件和稳定性，底物本底检测值的增高提示底物的不稳定。前提储存稳定性未开瓶2到8°C可一直保存到标签注明的失效期使用前的平衡(未开瓶)15到30°C(室温条件)至少18小时最长14天使用中(已开瓶)内部底物支持位置最长5天Page4of10FormattedperNCCLSDocumentGP2-A3105295C©Copyright2000BeckmanCoulter,Inc.使用中(已开瓶)外部液体架的底物位置最长14天R2底物：Lumi-Phos530(缓冲液中包含有dioxetaneLumigen*PPD,荧光素和离子表面活性剂量)。按照Access仪器操作指南中介绍的使用方法使用。D.Access冲洗缓冲液货号：819074x1950ml/箱现成可用。在室温条件下(15到30°C)可稳定到包装上注明的失效期。底物本底检测值的增高或在“双抗”体夹心法中的0点定标品的相关发光值的增高则提示冲洗缓冲液的不稳定。R3冲洗缓冲液：Tris盐缓冲液，离子表面活性剂，0.1%的叠氮钠和0.1%ProClin300。按照Access仪器操作指南中介绍的使用方法使用。E.Access红细胞溶血液AccessRedBloodCellFolateLysingAgent货号33017：2×25毫升;1毫升/测试Cat.No.33017:2x25mL;1mL/test瓶内含有：抗坏血酸（0.05g）和人血清白蛋白（HAS），每瓶可配置25毫升0.2%的抗坏血酸，在2~8°C存放。F.质控品：商用血清和全血质控品。G.Access免疫分析系统和消耗品H.警告和注意点1.只可用于体外诊断。2.用来制备试剂和红细胞叶酸溶血液的人源性材料已作检测，未发现已肝病毒抗原(HBsAg)、丙肝抗体(HCV-Ab)和人免疫缺陷病毒抗体(HIV1-Ab和HIV2-Ab)存在。因为没有一个测试方法的阴性能完全保证没有感染源，因此处理试剂和样品时应视为在传递感染性疾病样品一样(11)。3.病人样品和血制品应按照阐述的最底危险性的常规操作进行操作，将这些物品当作潜在的传染物品，按照常规操作注意点和优秀实验室的操作常规进行处理，无论该些物质是原型、处理物或离心前。用合适的消毒剂进去污。按照各实验室规定和操作规程存放和处理该些物品及其容器(11)。4.试剂中所含的叠氮钠可以和铅和铜反应形成有高度腐蚀性的重氮金属盐，如果被溅到含该物质的液体，则可用大量水冲洗来防止重氮的堆积(12)。5.Xi.刺激物：0.5N氢氧化钠R36/38：会刺激眼睛和皮肤。S26,37/39：如果溅到眼睛，立即用大量清水冲洗并医生处获得建议，请佩带合适的手套和眼/面部的防护镜。6.Xi.刺激物：0.25%ProClin300R43：可能导致皮肤接触后的过敏。S28-37：皮肤接触后立即用大量肥皂和清水冲洗，佩带合适的手套来保护。Page5of10FormattedperNCCLSDocumentGP2-A3105295C©Copyright2000BeckmanCoulter,Inc.7.底物暴露在空气中容易衰变，应保持瓶口紧盖，不要将不同瓶的底物相混后使用。定标每个测试均需有效的定标曲线，叶酸的定标曲线有效期为28天，参见《操作指南》和《参考手册》来了解定标原理，完成定标设置和