实验室消毒灭菌

1病原微生物实验室消毒灭菌沈伟2内容基本概念常用消毒和灭菌方法病原微生物实验室消毒和灭菌制度病原微生物实验室消毒和灭菌原则不同设备与物品的消毒方法消毒灭菌操作与效果监测3一、基本概念消毒（disinfection）杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达到无害化的处理。（不一定杀灭芽孢）灭菌（sterilization）杀灭或清除传播媒介上所有微生物的处理。（包括芽孢）4一、基本概念消毒剂（disinfectant）用于杀灭微生物使其达消毒或灭菌要求的化学制剂，但不一定杀灭孢子。消毒剂常用于非生命物体或其表面。灭菌剂（sterilant）可杀灭一切微生物(包括细菌芽孢)使其达到灭菌要求的化学制剂。5一、基本概念有效氯（availablechlorine）有效氯是衡量含氯消毒剂氧化能力的标志，是指与含氯消毒剂氧化能力相当的氯量(非指消毒剂所含氯量)，其含量用mg/L或%浓度表示。有效碘、有效溴定义和表示法与有效氯对应。6消毒剂的分类高效（水平）消毒剂：杀灭所有微生物，除了大量细菌芽孢。中效：杀灭除了细菌芽孢以外的所有微生物，包括分支杆菌与亲水病毒。低效：杀灭多数细菌繁殖体和亲脂性病毒。7亲脂类病毒或中等大小的病毒（如：HSV,CMV,RSV,HIV,HBV）细菌繁殖体（如：金葡，绿脓）真菌（如，念珠菌属，曲霉属）非脂类或小病毒（如脊髓灰质炎病毒,柯萨奇病毒）分枝杆菌（如TB，M.terrae）Cryptosporidiumparvum细菌芽孢Prions敏感耐受低效中效高效灭菌（高，延时）消毒剂水平气体灭菌蒸汽灭菌8消毒和灭菌是保护人员和环境不被病原微生物感染和污染的重要环节含有病原微生物的废物必须经过消毒或灭菌才能作为普通废物处理；对操作中可能产生的迸溅或泄漏，必须通过消毒达到对病原微生物的杀灭，对操作人员进行保护,对环境保护。消毒和灭菌的基本常识对于实验室生物安全是至关重要的。9消毒和灭菌的基本原则及时,彻底,有效,预清洁,避免二次污染,减少对人/物品/环境的损害清除污染的特殊要求，应根据实验工作类型以及所操作的感染性物质的特性来决定。本章所提供的一般性资料，可用于各个病原微生物实验室建立标准和操作程序，以处理特定实验室中所涉及的生物危害。10消毒与灭菌的方法化学消毒灭菌通过液体化学试剂杀灭微生物繁殖体或芽孢。消毒对象：物体表面、空气、污染物品等。消毒方式：擦洗、熏蒸、浸泡等。物理消毒灭菌包括压力蒸汽、紫外线、焚烧、HEPA过滤除菌等。11清洁的作用清洁（cleaning）：指去除污垢、有机物和污渍。方法包括刷、吸、干擦、洗涤或擦洗。严重污染的物品能影响杀菌作用，许多杀菌剂只对经过预清洁的物品才具有杀菌活性。是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定。预清洁时必须小心，以避免暴露于感染性物质。预清洁时必须用与随后使用的杀菌剂相容的物质。通常采用相同的化学杀菌剂进行预清洁和消毒。12防止过度使用消毒剂!正确使用化学消毒剂可以确保实验场所的安全，减少来自感染性物质的危险。应考虑经济、库存控制以及限制环境污染等因素，尽可能减少化学消毒剂的使用量。化学消毒剂的作用时间因品种和厂商而异，应按产品说明书配制和使用。13二、常用消毒和灭菌方法14常用化学消毒灭菌剂的性能比较杀菌剂使用浓度（％）消毒水平杀灭特点细菌亲脂病毒亲水病毒分枝杆菌细菌芽孢含氯高效+++++/-过氧乙酸0.001-0.2高效+++++戊二醛2灭菌/高消毒+++++甲醛3-8高效/中效+++++/-酒精60-95中效++-+-季胺盐0.4～1.6低效++---15常用化学消毒灭菌剂的安全性杀菌剂腐蚀性残留物有害被有机物灭活皮肤、眼刺激性呼吸道刺激性含氯++++-过氧乙酸+-++-戊二醛-+-++甲醛-+-++酒精+/--++-季胺盐--++-161、压力蒸汽灭菌是最可靠、首选的消毒灭菌方法。适用范围：耐湿热物品的消毒或灭菌。常见类型：-下排气式压力蒸汽灭菌器：121℃作用20-30min-预真空与脉动真空压力蒸汽灭菌器:134℃作用4min注意事项：资质、装载、防护、监测、维护。171、压力蒸汽灭菌182、紫外线消毒可达高水平消毒，使用方便；但由于对人皮肤黏膜有刺激作用，并产生臭氧，在有人情况下使用受到限制。适用范围：室内空气消毒、能直接照射到的光滑物体表面的消毒。常见类型：①普通直管型；②高强度紫外线灯；③低臭氧紫外线灯；④高臭氧紫外线消毒灯。注意事项：安装数量、强度监测、防护措施等。193、高效过滤除菌高效过滤除菌技术，对空气中≤0.3μm颗粒与微生物的阻留率能达到99.97%以上。适用范围：主要用于生物安全柜与生物安全实验室的空气净化除菌。注意事项：*必须定期更换高效过滤器（HEPA），*更换前应先用甲醛或过氧乙酸进行熏蒸消毒，*更换时严格做好工作人员防护；*换下的过滤装置装入密封袋内由具有资质的单位焚烧处理。HEPA滤膜•可抛型固体薄层滤膜•成褶皱状以增加表面积•按吸附0.3UM颗粒的效率划分等级，滤膜效率为99.97%•吸附颗粒214、含氯消毒剂常用含氯消毒剂：次氯酸钠、二氯、三氯等常用剂型：粉剂、片剂、液体杀菌能力：高水平消毒；1000-5000mg/L浓度。适用范围：饮用水、餐饮具、果蔬、环境、物表、污水、污物、排泄物、分泌物注意事项：密闭干燥保存；消毒后去除残留；使用液不稳定，加盖，有效期；对织物漂白，对金属腐蚀用；操作时应做好个人防护。225、过氧乙酸酸性透明液体，易挥发易分解，爆炸危险。杀菌能力：灭菌，高水平消毒适用范围：餐饮具、果蔬、环境、物表、空气薰蒸消毒：18-20%过氧乙酸5-6ml（1g）/m3，放瓷或玻璃容器中，加热密闭薰蒸1-2h。喷雾消毒：0.1-0.5%，20ml/m3，作用1h。注意事项：性质不稳，用前配，有盖塑料容器；对金属腐蚀，对织物漂白作用；操作时应做好个人防护；消毒完成后用清水去除残留。236、二氧化氯有粉剂、片剂、液体，临用前须进行活化。杀菌能力：高水平消毒适用范围：食品加工工具、餐饮具、饮用水、污水、物体表面等消毒。使用方法：用前活化，250-500-1000mg/L浓度。注意事项：活化液不稳定，现配现用；对金属腐蚀，对织物漂白；操作时应做好个人防护；消毒完成后用清水去除残留。247、碘伏是碘以表面活性剂为载体的不定型结合物。杀菌能力：中水平消毒适用范围：适用于手、皮肤、粘膜等消毒。注意事项：*于阴凉避光、防潮、密封保存；*避免接触银、铝和二价合金；*用于敏感者与敏感组织需慎重；*存在有机物，提高浓度或延长消毒时间。258、乙醇别名酒精，无色透明液体，易挥发，易燃烧。杀菌能力：中水平消毒适用范围：手、皮肤、小面积物表、医疗器械使用方法：手与皮肤用75%溶液擦拭1min物表用75%溶液浸泡或擦拭10min以上注意事项：乙醇易燃，忌明火；可使蛋白质变性凝固形成保护层，消毒前应将物品表面的有机物清除，不宜用于被血、脓、粪便等污染表面消毒；破坏仪器胶粘物与镜头，橡胶塑料变硬膨胀。269、戊二醛酸性戊二醛为存储形式，pH7.0-8.5的2%中碱性戊二醛杀菌好腐蚀小作为使用液。杀菌能力：灭菌，高水平消毒适用范围：不耐热不耐腐蚀医疗器械与精密仪器。使用方法：多浸泡，大型仪器设备用擦拭法；2%，灭菌须10h，消毒30-45min。注意事项：碳钢消毒加0.5%亚硝酸钠防锈；温度20℃以下杀菌作用显著降低；使用中戊二醛浓度检测以及时更换；对皮肤粘膜有刺激性，个人防护，充分去残留。2710、甲醛具有强烈的刺激性，常见消毒剂为福尔马林（即含36-40%甲醛的水溶液）与白色粉末状的多聚甲醛。杀菌能力：高水平消毒适用范围：室内空气以及对湿热敏感、易腐蚀物体表面与物品等的消毒。使用方法：温度18℃以上，相对湿度70-90%。加热熏蒸：福尔马林25ml/m3作用12h。化学熏蒸：福尔马林40ml/m3加高锰酸钾30g/m3作用12h。28三、实验室消毒和灭菌制度每次实验前：先开启送风和通风设备以及紫外线灯---30分钟后关闭紫外线灯---人员进入。环境、物体与设备等表面消毒：—每一实验步骤完成后：均应清理消毒台面；—每次实验结束：对环境、物体与设备表面消毒；—检测过程中发生污染：立即消毒---遇细胞、培养液、体液或血液等有机物污染，立即用有效氯含量为5000mg/L的消毒溶液处理，作用60分钟后立即用清水与干净的抹布擦净。29三、实验室消毒和灭菌制度工作完毕：将器材与废弃物品收集在专用包装与容器内压力蒸汽处理---对生物安全柜、仪器设备、工作台面、地面等消毒---开启紫外线灯照射60分钟---用清水擦拭去除消毒液残留---逐一关闭送风和通风设备。尖锐物品：直接丢入防渗漏防刺破的硬质密闭安全处置容器内---压力蒸汽消毒---严防操作过程中人员损伤与环境污染。防护用品：工作服、口罩明显污染或手套破损---随时更换并消毒；呼吸道传染病实验室工作人员，每次连续戴口罩时间不得超过4小时。30三、实验室消毒和灭菌制度手的清洗消毒：接触微生物或含有微生物的物品后、脱掉手套后、离开实验室前。污染物品消毒：出实验室前必须进行。-首选压力蒸汽法,不行者密封包装后外送有资质的专业单位辐照或环氧乙烷消毒。-不能压力蒸汽消毒的废弃物品密封包装后交有资质的单位收集、焚烧，严禁混入生活垃圾。31三、实验室消毒和灭菌制度实验设备：修理或维护前必须消毒，方法应符合卫生部《消毒技术规范》。必需运出实验室处理的物品应装入专用密闭包装与容器内，容器外表面消毒后由专人专车运至指定单位处理，在处理前严禁泄漏与扩散。甲醛熏蒸：需操作不同的病原微生物前、实验室内设备进行维修前、更换过滤器（网）前、出现重大污染或意外暴露事故后进行。效果监测：按规范进行，有书面记录。32四、实验室消毒和灭菌原则消毒顺序清洁区、半污染区和污染区应分别进行清洁、消毒处理；各区域按先上而下、先左后右的程序，依次进行消毒。消毒剂量*受结核分支杆菌、亲水性病毒与芽孢污染的环境与表面以及操作不同的病原微生物前的消毒，选用消毒剂量范围中的高浓度与长时间。*受细胞、培养液、体液或血液等有机物污染，有效氯含量加大至5000mg/L。33四、实验室消毒和灭菌原则消毒灭菌方法---符合《消毒技术规范》*所有培养物、废弃物、防护用品等在出实验室之前必须经压力蒸汽处理。*实验设备在运出修理或维护前需消毒。工作资质*消毒人员经传染病与消毒知识培训并合格*压力蒸汽灭菌与污水处理人员上岗培训证34五、不同设备与物品的消毒方法生物安全柜—实验完毕，生物安全柜内所有物品(包括仪器设备)都应进行消毒，并从生物安全柜内取出。—用有效氯2000mg/L的含氯消毒剂溶液擦拭台面、内壁和前后面玻璃，保持完全湿润30～60分钟。—开启紫外线灯照射30～60分钟。—然后用清水与干净的抹布擦净，以防消毒液腐蚀。—消毒完毕，逐一关闭送风和通风设备。—更换过滤器（网）前用甲醛进行熏蒸消毒，然后轻轻取下过滤器（网）装入专用密闭包装与容器内，容器外表面消毒后由专车运至指定单位焚烧处理。35五、不同设备与物品的消毒方法仪器设备—局部轻度污染。用有效氯1000-2000mg/L擦拭，保持湿润30-60分钟；贵重或精密仪器用2%戊二醛擦拭30-60分钟（按制造商说明），消毒完毕用清水与干净的布擦净；紧急时对非芽孢污染仪器设备用75%乙醇溶液擦拭三遍。—离心管未密闭、试管破裂等液体外溢时。用2%戊二醛擦拭离心机内部，保持湿润至少60分钟（按制造商说明）。—有内腔的或严重污染的仪器设备（如受细胞、培养液、体液或血液等污染），整机装入专用密闭包装与容器内，容器外表面消毒后由专车运至指定单位用环氧乙烷消毒。—需操作不同的病原微生物前、设备维修前、出现重大污染或意外暴露事故后，应用甲醛或过氧乙酸熏蒸消毒。36五、不同设备与物品的消毒方法感染性材料与器材—使用后丢入专用密闭收集袋与容器内，连同包装与容器一起经压力蒸汽