主要荧光素一览表

（1）荧光素类Fluorescein标准荧光素（Referencestandard）之一,在其基础上进行结构改造,可产生一系列荧光素衍生物。Fluorescein适用于Argon-ionLaser的488nm光谱线，有相对高的荧光吸收，较好的荧光产率以及良好的水溶性。标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀。与其他荧光素类衍生物一样，Fluorescein具有光淬灭率高，pH敏感性强与发射波谱宽的缺点。主要应用于聚焦激光扫描微阵列（Confocallaserscanningmicroscopy）和流式细胞计应用（Flowcytometry）。FITC异硫氰酸荧光素，Fluoresceinisothiocyanate，是荧光素衍生物的一种，5-FITC较6-FITC更经常使用。FITC的异硫氰酸基能与氨基反应，可用于标记氨基修饰DNA，一旦形成，产物极为稳定。适用于Argon-ionLaser的488nm光谱线，Abs/Em=492/519nm（pH=9.0）。与蛋白的结合力也强。FITC具有荧光素衍生物的普遍特性。在水中易变坏，不能长久保存。FITC-Oligo广泛用于杂交探针；FITC-多肽用于Edman降解蛋白测序；FITC也经常被用于蛋白电泳检测（即使是毛细管电泳）和荧光能量激发转移测试。FAM羧基荧光素，Carboxyfluorescein，是荧光素衍生物的一种，5-FAM较6-FAM更经常使用。Carboxyfluorescein-5-succimidylester，即5-FAM（NHS）广泛存在于荧光标记试剂盒。与FITC相比，FAM与氨基反应更快，产物也更稳定，但FITC结合蛋白的量更大且进程更易于控制。FAM也适用于Argon-ionLaser的488nm光谱线，Abs/Em=492/518nm（pH=9.0），具有荧光素衍生物的普遍特性，在水中稳定。5-FAM主要应用于DNA自动测序中，标记其中的d/ddCTP（PE公司），也经常用于PCR产物定量，核酸探针等。TET四氯荧光素，Tetrachlorofluorescein，是荧光素衍生物的一种。TET以及HEX均是在FAM基础上加以改进的，氯原子使FAM的Abs与Em值都产生一定的红移，并在一定程度上减弱了pH敏感性。TET也适用于Argon-ionLaser激发光源，Abs/Em=521/536nm。TET，HEX，FAM和TAMRA可配合用于DNA自动测序中，其中TET用于标记d/ddATP，HEX用于标记d/ddGTP或d/ddATP（PE公司）HEX六氯荧光素，Hexachlorofluorescein，是荧光素衍生物的一种。适用于Argon-ionLaser激发光源，Abs/Em=535/556nm。（请参见TET介绍）JOE羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素，Carboxy-4',5'-dichloro-2'，7'-dimethoxyfluorescein，是荧光素衍生物的一种，6-JOE更被广泛使用。JOE荧光产量高，pH敏感性弱，适合于标记蛋白。6-JOE也适合于Argon-ionLaser激发光源，Abs/Em=520/548（pH=9.0）常用于DNA自动测序，标记d/ddATP，也经常被用于进行电泳检测与PCR产物定量。（2）罗丹明类（Rhodaminedye）R110标准荧光素（Referencestandard）之一,在其基础上进行结构改造,即可产生一系列罗丹明类衍生物。与Fluorescein类衍生物相比，罗丹明类荧光素具有更强的光稳定性，更高的荧光产量以及更低的pH敏感性罗丹明类荧光素极为适合于标记寡核甘酸，但蛋白会引起大多数罗丹明类荧光素的荧光淬灭，故大多数不适宜用于标记蛋白。R110被用于DNA自动测序。TAMRA全称羧基四甲基罗丹明，即Carboxytetramethylrhodamine，是罗丹明类荧光素衍生物，6-TAMRA被广泛使用。TAMRA是少数几个能用于标记蛋白的，6-TAMRA适用于Argon-ionLaser激发光源，Abs/Em=547/573nm（Ph=8.0），6-TAMRA（NHS）常用于荧光标记试剂盒中。6-TAMRA主要用于DNA自动测序中。TexasRedTexasRed是一个长波长荧光素,与Fluorescein几乎没有波谱重叠,只适合于Ar-KrLaser的568nm光谱线或He-NeLaser的594光谱线,比Tetramethylrhodamine和LissamineTMRhodamineB波长更长，荧光量更高。TexasRed在荧光微阵列和流式细胞计中更被经常作为第三波长标记(Thirdlabels)。（3）BODIPY类BODIPY类荧光素是由分子探针公司开发，以用来替代那些有部分缺陷的传统荧光素，普遍具有荧光产量高，pH敏感性低（无离子变化），光稳定性强以及发射波谱窄的优点，故BODIPY类荧光素已被广泛用于核酸，，脂肪酸，磷脂以及各种受体。同时，由于在电泳过程中对序列片段影响小，故已被逐渐用于DNA自动测序。但相对而言,BODIPY类荧光素并不特别适合标记蛋白.BODIPYFL可代替FluoresceinBODIPYR6G可代替Rhodamine6GBODIPYTMR可代替TetramethylrhodamineBODIPYTR可代替TexasRed这些BODIPY类荧光素具有与被替代物几乎类似的光谱特征，能共用同样的光过滤器与激发光源，但更具优点。（4）其他荧光素CascadeblueCascadeblue是在芘(pyrene)结构基础上改造得来的,即sulfonatedpyrene,它是一种短波长紫外激发荧光素,与另一种常用的紫外荧光素Aminocoumarin相比,Cascadeblue的Em与Fluorescein有更小的光谱重叠,有更高的荧光吸收和更大的荧光产量.Cascadeblue在376nm处存在第二个吸收峰,水中不稳定。Cascadeblue主要用于标记蛋白,作为极性示踪子(polartracer)可进行膜蛋白定位等.但也能用于标记核酸和葡聚糖。Aminocoumarin一种短波长紫外激发荧光素，通常使用的是7-amino-4-methylcoumarin,红移现象明显,比Cascadeblue有更长的发射波长,肉眼观察明显，更适用于confocal。表1：主要荧光激发光源ExcitationsourcePrincipalspectrumlines（nm）Mercury-arcLamp366,405,436,546,578Xenon-arcLamp250-1000(continous)Tungsten-halogenLamp350-1000(continous)Cr:LiSAFLaser430Helium-cadmiumLaser325,442Argon-ionLaser488,514Nd:YAGLaser532Helium-neonLaser543,594,633Krypton-ionLaser568,647表2：主要荧光素一览表DyeAbs/EmMax(nm)NotesAcridineorange500/526greenfluorescenceboundtoDNA,andredshiftto~650uponassociationwithRNA,usefulforflowcytometry.FAM492/518Mostwidelyusedgreenfluorescein,absorptionoverlapsthe488nmspectrallineoftheargon-ionlaser,pronetophotobleaching,pHsensitivebetweenpH5-8,iswidelyusedforautomatedDNAsequencingFITC494/519Subjecttoargon-ionlaser,widespreaduseforhybridization,immunoreagent,proteinsequencingandFRETHEX535/556pHinsensitive,usedforautomatedDNAsequencingJOE520/548Intermediate-wavelengthspectra,importantdyeforautomatedDNAsequencing.LissaminerhodamineB570/590Optimalfor568nmexcitationphotostable,usedinconfocallaserscanningmicroscope.easiertolabelproteinthanTMR.Pyrene340/378Excimer:470Longexcited-statelifetime,spectralshiftsduetoexcimeremission,usedinproteincomformationandoxygensensors.ROX570/590spectrabetweenLissaminerhodamineBandTexasRed,usedinautomatedDNAsequencing.TET521/536pHinsensitive,usedforautomatedDNAsequencingTetramethylrhodamine555/580pHinsensitive,photostable,WidelyusedforautomatedDNAsequencingTexasRed595/615SuitedfortheAr-Kr568nmandHe-Ne594nmspectra,brighterandlowerbackgroundthanotherreddyesasthirdlabel,usedinconfocallaserscanningmicroscopesDansylChloride372/NDEnvironmentallysensitive,largestokesshiftforproteisequencingDabcyl453/noneBroadabsorption,nofluorescence,asaquenchinggroupusefulforfluorescenceresonanceenergytransfer(FRET)CR-6G525/555Spectralbetweenfluoresceinandtetramethylrhodamine,goodphotostable,preferrednucleotideoffproteinCascadeBlue400/420Resistanttoquenchinguponproteinconjugation,Watersoluble.BODIPYR6G528/547Substituteforrhodamine6G,UsefulforautomatedDNAsequencingBODIPYFL505/513pHinsensitive,narrowspectralbandwidth,usefulforautomatedDNAsequencing,preferredproteinconjugation.Amino--coumarin345/445Widelyusedbluefluorescentdye,visiblybrighterandeasierformicroscopes