动物细胞培养(三佰)

细胞工程细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。按操作对象分植物细胞工程动物细胞工程研究的水平研究的目的细胞水平一、概念动物细胞工程：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础选修3现代生物科技专题教学目标重点难点问题探讨教学过程知识结构教学反馈课后习题教学参考2.1动物细胞培养问题讨论烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植情景导入动物细胞培养从动物机体中取出相关的组织或器官，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。原理：细胞增殖概念结果：获得细胞群思考题多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据课本22页探究活动资料，总结细胞培养应该具备哪些条件？1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。）3、温度和PH36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。4、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）补充合成培养基中缺乏的物质防止代谢产物积累对细胞自身造成危害温热的盐水：满足细胞对水分、温度和无机盐的要求，同时，无机盐离子对维持细胞生存所必需的渗透压平衡，离子平衡，PH恒定都起着重要作用。动物血清：提供基本的营养物质，如：氨基酸、维生素、无机物、脂质、核酸衍生物等，它们都是细胞生长所必需的物质，还可以提供激素和各种生长因子，如：胰岛素、肾上腺皮质激素、血小板生长因子等。鸡胚浸出液：与动物血清相似，含有多种促进细胞生长的营养物质培养器皿动物细胞培养请同学们阅读课本后，简述动物细胞培养的基本过程？注意关键词:细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养培养过程动物细胞培养的过程:思考题1、为什么选用动物胚胎或幼龄动物的组织、器官做动物培养材料？2、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？3、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？4、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质思考题5、细胞膜的主要成份是什么？6、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？7、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？8、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？蛋白质和磷脂能注意时间的控制不能，因为两的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近思考题9、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？10、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。这样的过程叫做传代培养思考题11、如何理解原代培养和传代培养？12、传代培养的细胞能有些为何能一直传下去？上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养发生突变，朝着癌细胞方向发展动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液原代培养胰蛋白酶剪碎细胞株细胞系遗传物质未改变遗传物质已改变细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。原代培养传代培养时间机体取出后立即培养将原代细胞分瓶继续培养培养代数1—10代10代以后遗传物质是否改变不改变改变，并有癌细胞特点细胞名称细胞悬浮液细胞株、细胞系•（1）生产蛋白质生物制品：酶、生长因子、病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。•（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。•（3）用于检测有毒物质和药物。•（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？2、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清独特之处：1、液体培养基2、成分中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体知识小结动物细胞培养细胞培养的应用和概念细胞培养的过程细胞培养的条件细胞培养技术的应用教学参考1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？细胞间的成分主要是蛋白质。胃蛋白酶适宜的PH约为2，当PH6时，胃蛋白酶就会失去活性，而胰蛋白酶作用的适宜环境PH为7.2----8.4，多数动物细胞培养的适宜PH为7.2----7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。2.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。3.单层细胞培养：1957年，科学家采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对细胞培养的发展起了很大的推动作用。4.为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，有些动物细胞不能合成，必须由培养液提供；激素有胰岛素、生长激素等促进细胞的生长、增殖、贴附。因此，细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般要添加10%----20%的血清。5.无血清培养：在科学研究中，有时需要明确界定培养液的成分，而血清中由于含有许多未知成分，会对研究结果有影响，因此，在进行细胞培养时，也可采用无血清培养。无血清培养基是在基本培养基中，添加一些已知的促进细胞生长和增殖的物质。6.去核方法：目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。还有人采用其他方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核DNA变性，从而达到去核目的。