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荧光分析法测定维生素C维生素C及维生素C的测定原理荧光分析法测定维生素C实验荧光分析法测定维生素C应用讲解人:贺政轩一、维生素C及维生素的测定原理1.1维生素C维生素C又名抗坏血酸,是维持机体正常生理功能的重要维生素之一,而人体不能自身合成,只能从食物和药物中摄取,因此,食品、药物中维生素C的分析具有重要意义。1.2维生素C测定方法维生素C的测定常用的方法有光度法、电化学法、滴定法、酶法、色谱法等。本实验提出了一种新的测定维生素C的荧光分析方法:维生素C被Cu2+氧化为脱氢抗坏血酸,再与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用,通过对体系荧光强度的测定进行维生素C的定量分析。二、荧光分析法测定维生素C实验1实验1.1主要仪器与试剂分子发光仪:LS-55型酸度计:pH-211型榨汁机:CW-JE04型电热恒温水浴锅:HH.SY11-Ni1型CuSO4溶液:2.0×10-3gm/L十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)溶液:6.0×10-4g/mL苯甲酸溶液:1.0×10-4gm/L维生素C标准储备液:5.0×10-4g/mL,2~8℃(避光保存);维生素C标准溶液:1.0×10-5g/mL,2~8℃(避光保存);NaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液:pH=6.0;1.2实验步骤(1)配置待测样品及空白对照在25mL比色管中依次加入0.6mLCuSO4溶液,2.0mL十六烷基三甲基溴化铵溶液,2.0mL苯甲酸溶液,一定体积的维生素C标准溶液,5.0mLNaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液,用蒸馏水定容,摇匀;以不含维生素C溶液为空白对照。(2)水浴加热在35℃恒温水浴中加热30min,将溶液流水冷却至室温。(3)荧光分析将待测样品放置于样品架上,设定激发波长为308nm,发射波长为408nm,测量荧光强度F,以不含维生素C的试剂空白为F0,计算F测=F-F0。2结果与讨论2.1激发光谱和发射光谱取3.0mL维生素C标准溶液,按实验方法进行操作,分别在290~330nm、360~460nm内扫描得到激发光谱和发射光谱如图1、图2所示。从图1、图2中可看出,当激发波长为308nm,发射波长为408nm时体系的荧光强度最大,试剂空白的荧光值比较低且稳定,故本实验选择激发波长为308nm,发射波长为408nm。1—Cu2++BA+缓冲溶液+CTMAB;2—Cu2++BA+维生素C+缓冲溶液+CTMAB1—Cu2++BA+缓冲溶液+CTMAB;2—Cu2++BA+维生素C+缓冲溶液+CTMAB激发光谱发射光谱2.2试剂加入顺序按照实验方法操作,在各试剂加入量相同的情况下,试验了试剂的不同加入顺序对荧光强度的影响。试验结果表明,当所加试剂顺序依次为CuSO4溶液、苯甲酸溶液、维生素C标准溶液、NaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液时,体系的荧光强度最大,因此选用此加入顺序为最佳试剂加入顺序。2.3缓冲溶液溶液的pH值对体系荧光强度有较大的影响,试验了不同的pH值对荧光强度的影响。由pH值—荧光强度的曲线可知,当pH值为5.9~6.2时,荧光强度达到最大值且比较稳定,因此确定最佳pH值为6.0。缓冲溶液的种类对体系的荧光强度也有一定的影响。试验了以下几种pH值为6.0的缓冲溶液:NaOH-KH2PO4、KH2PO4-硼砂、KH2PO4-Na2HPO4、NaOH-邻苯二甲酸氢钾、Na2HPO4-柠檬酸、NaOH-柠檬酸钠、HAc-NaAc等。试验结果表明,当所加的缓冲溶液为NaOH-邻苯二甲酸氢钾时,荧光强度最大且稳定。因此本实验选择NaOH-邻苯二甲酸氢钾为缓冲溶液,其最佳用量为5.0mL。2.4加热温度和加热时间试验了不同温度对体系荧光强度的影响。结果表明,当加热温度为35℃时,既有利于提高体系反应速度,又不使反应物与产物结构受到破坏。改变加热时间进行试验,结果发现,在35℃水浴中加热30min,体系荧光强度达到最大值且相对稳定。2.5硫酸铜和苯甲酸的用量其它条件不变,试验了硫酸铜和苯甲酸的用量对体系荧光强度的影响。结果表明,当硫酸铜的用量为0.6mL、苯甲酸的用量为2.0mL时,体系荧光强度最大。2.6表面活性剂分别试验了十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)、十二烷基磺酸钠及β-环糊精对体系荧光强度的影响。结果表明,表面活性剂对体系的荧光强度有一定的增敏效果,其中CTMAB对体系的增敏效果最好。进一步试验了CTMAB的用量对体系的荧光强度的影响,当CTMAB的用量为2.0mL时,体系荧光强度最大。三、荧光分析法测定维生素C应用样品测定取一片维生素C药片,研细,混匀,准确称取0.1520g溶于二次蒸馏水中,转移至500mL容量瓶中定容,配成水溶液。再准确移取10mL此溶液,将其稀释成100mL的溶液,作为样品稀释液。对样品稀释液进行测定并做加标回收试验。同时利用本法对西红柿和果珍进行测定。准确称取一定量的果珍,将其配成100mL的溶液。将清洗干净的西红柿榨汁,称取一定量的西红柿汁,将其配成100mL的溶液。其它步骤和维生素C药片的测定方法相同。样品测定结果列于表3表3样品测定结果(n=3)。由表3可知,用荧光分析法测定维生素C药片、西红柿和果珍中维生素C的含量,回收率为96.7%~100.5%准确度较高。表3样品测定结果(n=3)荧光分析法测定维生素C具有操作简单,精密度高,检出限低等优点,该法可以应用于水果、蔬菜和药物中维生素C的检测,适于推广。谢谢观赏!Theend利用某些物质受光照射时所发生的荧光特性和强度,进行物质的定性分析或定量分析的方法,称为荧光光谱分析。使激发光的波长和强度保持不变,而让荧光物质所发生的荧光通过发射单色器照射于检测器上,调节发射单色器至各种不同波长处,由检测器测出相应的荧光强度,然后以荧光波长为横坐标,荧光强度为纵坐标作图,即为荧光光谱,又称荧光发射光谱。荧光发射光谱反映物质下能级的信息。让不同波长的激发光激发荧光物质使之发生荧光,而让荧光以固定的发射波长照射到检测器上,然后以激发光波长为横坐标,以荧光强度为纵坐标,所绘制的图即为荧光激发光谱,又称激发光谱。1.2荧光光谱分析法
本文标题:荧光分析测定维生素c
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