华东地区规模化猪场的回肠炎流行病学调查(预防兽医学报)_doc下载

华东地区规模化主场回肠炎流行病学调查（美国礼来公司）1收稿日期：2011-10-26；基金项目：（本文是由美国礼来公司全球市场部资助，没有基金项目支持）作者简介：曲向阳（1982－），男，山东烟台人，硕士，主要从事动物疫病诊断与防治研究。通信作者：姚火春（1963年-），男，博士，教授，主要从事动物病原微生物及免疫学研究。华东地区规模化猪场的回肠炎流行病学调查曲向阳1,2姚火春2*张璇1黄涛1李喜焕1（1.美国礼来亚洲公司上海代表处，上海，200020；2.南京农业大学动物医学院，江苏南京，210095；）中图分类号：S855.1文献标识码：C文章编号：摘要：为调查回肠炎在华东地区三省一市规模化猪场的感染状态，我们利用商品化的胞内劳森氏菌快速检测试剂盒LawsoniaFirsttestTM对来自21个规模化猪场的321份粪便样品进行胞内劳森氏菌检测。结果表明，所检测的21个规模化猪场100％存在回肠炎感染。而且感染率随着猪只日龄增长而逐渐升高。4周龄仔猪即存在感染,感染率为9.1%，8周龄（41.5%）～10周龄(67.9%)为主要感染开始期，12周龄(94.3%)～14周龄(87.9%)为感染高峰期，所检测样品的总体阳性率为59.81%，强阳性率为31.2%，结果表明：华东地区规模化猪场普遍存在亚临床型回肠炎感染。此外，检测结果受药物保健方案影响较大。关键词：猪回肠炎；胞内劳森氏菌；流行病学调查；LawsoniaFIRSTtestTM；粪便；EpidemiologicalsurveyofPorcineIleitisonIntensiveSwineFarmsinEastChinaQUXiangyang1,2,YAOHuochun2*,ZHANGXuan1,HUANGTao1,LIXihuan1(1.ElancoChina,Shanghai200020,China2.VeterinaryMedicineCollegeofNanjingAgriculturalUniversity,Nanjing,210095,China)Abstract：TheepidemiologicalsurveyofporcineileitisonintensiveswinefarmsinEastChinawascarriedoutbyusingcommercializedLawsoniaintracellularistestkit(LawsoniaFIRSTtestTM).Atotalof321fecalsamplesofpigswithdifferentweeks-oldwerecollectedfordetectionofL.intracellularis.TheresultsshowedthatL.intracellularisinfectionwas100%onthe21intensiveswinefarms.Thepositiverateofthepiginfectionwasincreasedasthepigsgrowing.Theearliestpositivesamplesweredetectedfrom4week-oldpigletswith9.1%positive.Onsetofileitisinpigsonmostofthefarmswasbetween8weeksoldwith41.5%positiveto10weeksoldwith67.9%positive.Pigswiththehighestpositiveratofileitiswereduring12weeksold(94.3%)to14weeksold(87.9%).Thetotalpositivepercentageofthe321sampleswas59.81%including31.2%strongpositive.TheresultsindicatedthatpigsweremainlydisplayedthesubclinicalsignsofileitisonintensiveswinefarmsinEastChina.However,thedetectionresultscouldbeinfluencedintensivelybymedicationinterfering.Keywords：PorcineIleitis;Lawsoniaintracellularis;EpidemiologicalInvestigation；LawsoniaFIRSTtestTM;Fecal华东地区猪回肠炎流行病学调查（美国礼来公司）2猪回肠炎又名猪增生性肠炎、猪增生性出血性肠炎,是由胞内劳森氏菌(Lawsoniaintracellularis)感染所致的以回肠、盲肠、结肠粘膜呈腺瘤样增生为主要特征的一种重要猪肠道疾病。该病易感染生长育肥猪、后备母猪，严重影响猪只饲料效率与生长速度，对养猪业的经济效益影响严重[1]。据Jensen报道，在美国每头回肠炎感染猪的经济损失至少1.531美元[2]。依据临床症状差异，可分为急性型、慢性型与亚临床型。急性型多发于新引进的后备母猪及17周龄以上的育肥猪，健康猪群似乎更易感染急性型回肠炎[3]。常表现为出血性下痢，甚至突然死亡。慢性型与亚临床型回肠炎无典型临床症状，2周龄～20周龄的猪只均易感染[4]，无法依据临床症状进行诊断。为研究回肠炎在华东三省一市的流行情况，从2009年12月至2011年4月采用LawsoniaFIRSTtestTM回肠炎诊断试剂盒对规模化猪场粪便样品中的胞内劳森氏菌进行了病原学调查，以期了解回肠炎在该地区的感染率及感染时间点，为该病的精准化策略性用药预防或疫苗免疫提供实验依据。1材料与方法1.1样品采集从华东三省一市21个规模化猪场随机采集特定周龄的新鲜松软或水泥样的粪便样品，各3克。粪便主要来自于4周龄、6周龄、8周龄、10周龄、12周龄、14周龄、后备母猪与经产母猪，每阶段样品作2～3份重复，采样后立即检测。1.2检测试剂本实验采用德国Microcoat公司开发的LawsoniaFIRSTtestTM回肠炎现场诊断试剂盒（免疫磁珠法，美国礼来公司拥有专利权）。其原理与双抗体夹心ELISA类似。通过对比颜色变化，对胞内劳森氏菌的感染状态进行半定量检测。1.3检测方法依照FIRSTtestTM试剂盒说明书进行，步骤如下。①样品稀释与沉淀：将1g粪便样品与5mL样品稀释缓冲液在样品收集管中混合，摇匀后，放在试管架上静置5min；②样品转移：分别使用不同的移液管吸取0.5mL的上清液至分析管（管内含有劳森氏菌多克隆抗体包被的免疫磁珠）中，设立阳性对照组（阳性对照为0.5mL劳森氏菌菌液），摇匀后，将分析管放在试管架上孵育30min；③磁珠分离与洗涤：将分析管转移至磁体架上进行磁头分离，然后洗涤2次；④加入抗体－过氧化物酶共轭物：分别向分析管中加入0.5mL的抗体－过氧化物酶共轭物，摇匀后，将分析管放置在试管架上孵育20min；⑤磁珠分离与洗涤：同步骤③；⑥加入TMB显色：分别向分析管中加入0.5mL的TMB底物显色液，并设立阴性对照（阴性对照管内含有劳森氏菌多克隆抗体包被的免疫磁珠），摇匀后，孵育7分钟；⑦结果判读：将分析管放置在磁铁架上，记录颜色变化，阳性呈蓝色，阴性液体透明。2结果我们从2010年12月至2012年4月间利用商品化的胞内劳森氏菌快速检测试剂盒（Lawsonia华东地区猪回肠炎流行病学调查（美国礼来公司）3FirsttestTM）对来自华东地区三省一市21个规模化猪场的321份粪便样品进行胞内劳森氏菌检测。检测结果表明：所检测的21个规模化猪场100％存在回肠炎感染，而且感染率随着猪只日龄增长而逐渐升高。2.1华东三省一市总体感染状态表1数据显示可知，21个猪场100％存在劳森氏菌感染，321份样品的总体阳性率为59.8%（192/321），且不同地区的总体阳性率差异不显著。从表2可知，不同生长阶段的感染率为：4周龄，9.1%；6周龄，28.3%；8周龄，41.5%；10周龄，67.9%；12周龄、14周龄及经产母猪均超过85％。说明华东地区大部分猪场从8周龄～10周龄开始感染回肠炎，12周龄～14周龄达到感染高峰期。感染率随周龄的增加而升高，且呈高比例持续性感染状态（如:后备母猪与经产母猪）。表1不同省市回肠炎的发病率Table1PrevalencestatusofPorcineileitisindifferentregionsofEastChina地区Region猪场数No.ofswinefarms感染猪场数No.ofpositiveswinefarms样品阳性数率PositiveNo./TotalsampleNo.江苏Jiangsu66（100%）68/101(67.3%)浙江Zhejiang88(100%)71/120（59.2%）安徽Anhui22(100%)18/30（60.0）上海Shanghai55(100%)35/70（50.0%）总计Total2121(100%)192/321(59.8%)表2华东地区不同省市不同阶段猪回肠炎的感染状况Table2Positiverateofporcineileitisatdifferentstagesinpigs地区Region4周龄4weeksold6周龄6weeksold8周龄8weeksold10周龄10weeksold12周龄12weeksold14周龄14weeksold后备母猪Gilts经产母猪Sows江苏Jiangsu0.0%(0/12)43.8%(7/16)50.0%(8/16)93.8%(15/16)100.0%(16/16)100.0%(12/12)75.0%3/4100%(9/9)浙江Zhejiang16.7%(2/12)20.0%(4/20)50.0%(10/20)60.0%(12/20)100%(20/20)75.0%(9/12)0/087.5%(14/16)安徽Anhui33.3%(1/3)20.0%(1/5)20.0%(1/5)100.0%(5/5)100.0%(5/5)66.7%(2/3)0/0100%(4/4)上海Shanghai0.0%(0/6)25.0%(3/12)25.0%(3/12)33.3%(4/12)75.0%(9/12)100%(6/6)100%(2/2)100%(8/8)总计Total9.1%(3/33)28.3%(15/53)41.5%(22/53)67.9%(36/53)94.3%(50/53)87.9%(29/33)83.3%(5/6)94.6%(35/37)从表3可知，所检样品的总体强阳性率为31.2%。强阳性率也随着周龄的增加而显著提高，14周龄时高达66.7%。后备母猪与经产母猪的强阳性率分别为66.7%与48.6%。华东地区猪回肠炎流行病学调查（美国礼来公司）4表3各生长阶段回肠炎感染强阳性率Table3Strongpositiverateofporcineileitisatdifferentgrowingstages生长阶段Growingstage4周龄4weeksold6周龄6weeksold8周龄8weeksold10周龄10weeksold12周龄12weeksold14周龄14weeksold后备母猪Gilts经产母猪Sows汇总Total强阳性率Strongpositiverate0/33(0.0%)8/53(15.1%)13/53(24.5%)18/36(34.0%)17/53(32.1%)22/33(66.7%)4/6(66.7%)18/37(48.6%)31.2%阳性率Positiverate3/33(9.1%)15/53(28.3%)22/53(41.5%)36/53(67.9%)50/53(94.3%)29/33(87.9%)5/6(83.3%)35/37(94.59%)59.8%2.2不同省市间感染的差异性从区域角度分析（安徽检测样本较少