如何正确选择二抗——丁香园

如何正确选择二抗二抗选择指南2012-03-2820:18来源：丁香园点击次数：691关键词：二抗单抗一抗片段基因如何选择正确的二抗？以下指南将帮助您选择最适合该应用的二抗。常见问题1.一抗的宿主物种是什么？2.需要了解哪些有关一抗同型的内容？3.需要酶学或荧光检测吗？4.是否需要预吸附的二抗？5.是否需要亲和纯化的抗体或IgG片段？6.有必要使用F(ab)或F(ab')2片段抗体吗？7.是否需要抗IgG重链和轻链、抗轻链或抗F(ab')2二抗？1.一抗的宿主物种是什么？二抗指向一抗的物种。如果使用来源于兔的一抗，则需要来源于除兔以外的其它物种的抗兔二抗。例如山羊多克隆抗兔IgG-H&L(HRP)二抗(ab6721)可以检测兔多克隆抗Ki67一抗(ab15580)。2.需要了解哪些有关一抗同型的内容？二抗必须指向一抗同型。多克隆一抗通常来源于兔、山羊、绵羊或驴，并且是IgG同型。二抗通常为抗IgG重链和轻链的抗体。单克隆一抗通常来源于小鼠、兔和大鼠。例如，如果单克隆一抗为小鼠IgG1，则需要抗小鼠IgG或特异性较低的F(ab)片段抗小鼠IgG。人免疫球蛋白类、亚类、型和亚型：•类或同型：IgG(γheavychains),IgM(μ),IgA(α),IgE(ε),IgD(δ)•亚类：IgG1(γ1heavychains),IgG2(γ2),IgG3(γ3),IgG4(γ4);IgA1(α1),IgA2(α2)•型：κlightchain,λlightchain•亚型：λ1,λ2,λ3,λ4其它类型的反应：•多价抗体与所有免疫球蛋白类反应•抗Fc或重链(α,δ,ε,γ,andμ)抗体仅与重链反应•抗F(ab)或完整分子抗体与重链和轻链反应，而与免疫球蛋白类无关•由于所有免疫球蛋白类均使用相同的κ和λ轻链，因此抗轻链（κ和λ）抗体与所有免疫球蛋白类反应3.需要酶学或荧光检测吗？偶联类型是依赖于应用的。对于酶学和生物素检测，例如，在WB或ELISA中，建议将二抗偶联于HRP,AP或生物素。不论抗体宿主物种是什麽，抗生物素蛋白和链霉亲和素与生物素的结合作用均很强，并且均能使信号放大。如果使用了激光，例如，在流式细胞术、ICC/IF或IHC中使用时，则建议将二抗偶联于荧光染料进行荧光检测。访问我们荧光染料指南，为您的实验选择染料。Learnmoreaboutthe查看更多关于使用DyLight®荧光染料的特性与优点.4.是否需要预吸附的二抗？对于富含免疫球蛋白的组织和细胞，通常推荐使用预吸附血清的二抗于蛋白质印迹应用。预吸附的二抗与内源免疫球蛋白发生相互作用的可能性较低，因此可降低非特异性背景。二抗进行预吸附时，预吸附样品应来源于与检测样品相同的物种。例如，在人组织中检测时，将需要人预吸附抗体。查看更多关于DyLight®预吸附二抗的信息.5.是否需要亲和纯化的抗体或IgG片段？使用亲和纯化的抗体或IgG片段的优点将取决于预期的结合类型。亲和纯化的抗体的非特异性结合量最低，而IgG片段包含高亲和抗体。事实上，在亲和纯化中，高亲和力抗体保持固定在基质上并且不能被洗脱。6.有必要使用F(ab)或F(ab')2片段抗体吗？F(ab))和F(ab')2片段抗体消除了抗体Fc部分与细胞（如巨噬细胞、树突细胞、中性粒细胞、NK细胞和B细胞）上Fc受体之间的非特异性结合，并且由于它们尺寸较小而能够更有效地渗透组织。由于片段抗体不具有Fc部分，因此它们不干扰抗Fc介导的抗体检测。查看使用F(ab)或F(ab')2片段抗体的优点7.是否需要抗IgG重链和轻链、抗轻链或抗F(ab')2二抗？我们以不同形式提供二抗：•抗IgG重链和轻链的抗体同时与IgG亚类的重链和轻链反应•抗轻链抗体与在所有免疫球蛋白类中均相同的一抗轻链反应•抗F(ab')2二抗与一抗的F(ab')2部分反应