三聚氰胺的检测方法ppt课件

牛奶中三聚氰胺(Melamine)ELISA检测以勤邦CA301试剂盒为例农业部农产品质量安全监督检验测试中心（呼和浩特）狄彩霞（）0471--5904559内容一、概要二、原理三、检测步骤四、注意事项一、概要•三聚氰胺（Melamine）简称三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水、对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物。长期或反复大量摄入对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。•检测方法：①气相色谱质谱法（GC-MS）②液相色谱串联质谱法（LC-MS-MS）③高效液相色谱法(HPLC)准确；成本高、操作复杂④ELISA——试剂盒检测，快速、简便、准确、灵敏度高二、原理•采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争三聚氰胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物三聚氰胺成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。三、检测步骤1.准备：试剂盒20℃回至室温，摇匀；配洗涤工作液—20倍浓缩（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），4℃下保存1个月。2.编号：取需要数量微孔板，将样本和标准品对应微孔编号；3.加液：加标准品、样本20µl；加酶标二抗50µl；再加抗体工作液80µl；振荡混匀，盖板避光反应20min;4.洗板：孔内液体甩干，每孔加洗涤液250µl，洗涤4-5次，最后用吸水纸拍干；5.显色：加显色液A、B各50µl，混匀，盖板避光反应10min;6.测定：加终止液50µl，混匀，在酶标仪450nm读OD值。7.结果判定：标准品、样品输入软件计算四、注意事项1.试剂盒选用不同，操作过程不同，请按购买试剂盒说明操作；2.室温低于20℃或试剂及样本未回到室温20-25℃，会导致OD偏低；3.每加一种试剂前要将其摇匀；4.不同批号试剂盒不要混用；5.试剂盒2-8℃保存；6.0标准的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能变质；7.加入底物液A、B后，一般显色10min，若颜色较浅可延长反应时间到15min，但不可超过20min，反之则减短反应时间；8.每种液体加入速度尽量一致、快。•1ppm=1000ppb•1ppb=1000ppt•ppm即：mg/L（毫克/升）•ppb即：ug/L（微克/升）•ppt即：ng/L（纳克/升）此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！