《微生物学实验》实验课程教学大纲

吉首大学化学化工学院实验（实践）课程教学大纲食品科学与工程专业32《微生物学实验》实验课程教学大纲一、课程说明课程编码4303195课程性质独立设课课程开课单位化学化工学院开课学期3课程总学32课程总学分1实验学时32实验学分1课程类别学科基础课实验项目数9面向专业食品科学与工程、食品质量与安全实验室名称食品微生物实验室二、实验目的、任务及要求1.本实验课程的目的（1）微生物学实验课是与微生物学理论课同学期开设的一门重要的技术基础课。通过本课程的教学，使学生较熟练的掌握微生物学实验的基本操作技术和初步掌握研究微生物的基本方法；（2）通过对具体微生物材料的观察、分析，进一步加深和巩固对微生物学理论课所学知识的理解并提高学生分析和解决实际问题的能力。2.本实验课程的任务学生经过普通微生物学实验的严格训练，能够规范的掌握实验的基本操作、基本技术和基本技能。（1）通过验证性实验，学生进一步掌握微生物实验操作流程及技能训练；（2）通过综合性实验，学生可以直接观察到大量的微生物形态及生理特性，经过思维、归纳、总结，从感性认识上升到理性认识，综合培养学生动手、观察、查阅、记忆、思维、想象及表达等全部智力因素，从而使学生具备分析问题、解决问题的独立工作能力；（3）通过设计性实验，学生由提出问题、查阅资料、设计方案、动手实验、观察吉首大学化学化工学院实验（实践）课程教学大纲食品科学与工程专业33现象、测定数据，到正确处理和概括实验结果，练习解决化学问题思维方式，以使学生初步具备从事科学研究的能力。3.本实验课程的要求（1）通过本课程的教学，使学生掌握进行常规常见微生物检测的实验原理和基本方法，具有独立进行微生物学检测实验方案的设计、初步具备利用微生物学手段分析和解决发酵生产过程中有关实际问题和从事有关科学研究工作的能力；（2）要求学生了解实验室的布置以及实验室的规则；使学生熟练掌握显微镜的使用技术并熟悉显微镜的使用技术并熟悉显微镜的构造及保养方法；学会干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱的使用；具有选择和制备培养基的能力；掌握基本染色原理和方法以及制片技术；熟悉细菌、酵母菌、霉菌的基本形态结构、生理生化特征和血清学特性，具有菌种初步鉴定的基本技能；通过实验，使学生学会无菌操作方法，掌握微生物的分离、筛选和育种的基本知识和技能，了解菌种保藏的一般方法。三、成绩考核方法本课程成绩考核方法采用平时考核、期末考试来综合评定学生成绩。平时考核占50%，期末考试占50%。平时考核由日常考勤考核25%、提交实验报告50%，平时考核（每次实验预习、实验记录、实验操作等）25%组成；期末考试分为笔试和操作考试两部分，各占50%。四、实验项目设置序号实验项目名称实验学时实验要求实验类型分组人数1显微镜油镜的使用2必做验证22无菌器材的准备、培养基的配置及灭菌4必做验证23产淀粉酶微生物的分离培养4必做设计24细菌染色与形态观察4必做综合25酵母菌水浸片的制备和形态观察及霉菌的形态观察4必做综合26酵母菌细胞计数及细胞大小的测定4必做综合27微生物菌种保藏2必做验证2吉首大学化学化工学院实验（实践）课程教学大纲食品科学与工程专业348细菌生理生化实验4必做综合29风雨湖水细菌总数和大肠菌群的测定4必做综合2五、教学方式与预习要求1.教学方法现场讲解，操作示范与指导。2.预习要求仔细阅读实验书中有关的实验内容及基础知识，明确实验的目的和要求，掌握实验的原理及方法，了解实验操作及所用仪器的使用方法，记住安全注意事项，并在此基础上按要求写出预习报告。六、实验项目内容1.实验项目一：显微镜油镜的使用（1）实验目的学习并掌握显微镜油镜的使用技术及维护的基本知识；使用油镜观察细菌的几种基本形态；用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的运动。（2）实验内容①显微镜的操作及维护；②显微镜油镜的使用。（3）主要仪器及耗材主要仪器：显微镜。主要耗材：香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、细菌染色标本。2.验项目二：无菌器材的准备、培养基的配置及灭菌（1）实验目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程；了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法；熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。（2）实验内容①培养基的配制：牛肉膏蛋白胨培养基的配制、马丁氏培养基的配制、无菌水的制备；②培养基与玻璃器材的灭菌：干热灭菌法（即热空气灭菌法）、高压蒸汽灭菌。（3）主要仪器及耗材吉首大学化学化工学院实验（实践）课程教学大纲食品科学与工程专业35主要仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯主要耗材：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/LNaOH、lmol/LHCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。3.实验项目三：产淀粉酶微生物的分离培养（1）实验目的掌握从环境（土壤、水体、活性污泥等）中分离培养细菌的方法，从而获得若干种细菌纯培养技能；掌握细菌纯种分离的方法：稀释平板分离法和平板划线法；掌握几种接种技术：斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等。（2）实验内容①用稀释平板法从土壤中分离真菌；②用平板涂抹法分离土壤中的菌；③用划线法分离土壤中的细菌；④斜面接种；⑤液体接种；⑥穿刺接种。（3）主要仪器及耗材主要仪器：高压灭菌锅、超净工作台。主要耗材：牛肉膏蛋白胨培养基、盛9ml无菌水的试管，盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，1ml和5ml无菌吸管，无菌培养皿。4.实验项目四：细菌染色与形态观察（1）实验目的学习微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术；掌握细菌的一般染色法和革兰氏染色法；进一步熟练显微镜油镜的使用技术；观察和识别细菌细胞的特殊构造。（2）实验内容①简单染色法：染色水洗、干燥、镜检；②革兰氏染色法：初染、媒染、脱色、复染、镜检；混合涂片。（3）主要仪器及耗材主要仪器：显微镜。主要耗材：大肠杆菌，枯草芽孢杆菌、革兰氏染色液，载玻片。5.实验项目五：酵母菌水浸片的制备和形态观察及霉菌的形态观察（1）实验目的观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式;学习鉴别死活细胞的实验方法;观察霉菌的形态特征;进一步熟悉掌握无菌操作技术。（2）实验内容吉首大学化学化工学院实验（实践）课程教学大纲食品科学与工程专业36①酵母菌---美蓝染液水浸片法；②霉菌---乳酸石炭酸棉蓝直接压片法观察。（3）主要仪器及耗材主要仪器：显微镜。主要耗材：吕氏碱性美蓝染色液，乳酸石炭酸棉蓝染液。6.实验项目六：酵母菌细胞计数及细胞大小的测定（1）实验目的了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理;学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术;了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。（2）实验内容①使用血球计数板对酵母细胞进行计数；②使用显微尺对酵母菌细胞进行测定。（3）主要仪器及耗材主要仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板。主要耗材：酵母菌液。7.实验项目七：微生物菌种保藏（1）实验目的学习与比较几种菌种保藏的方法。（2）实验内容①斜面冰箱保藏法；②石蜡封藏法；③沙土管保藏法；④冷冻真空干燥保藏法。（3）主要仪器及耗材主要仪器：冰箱、离心机、真空干燥箱。主要耗材：肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙。8.实验项目八：细菌生理生化实验（1）实验目的了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法;了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况;了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。吉首大学化学化工学院实验（实践）课程教学大纲食品科学与工程专业37（2）实验内容①糖(醇)类发酵试验；②甲基红试验(M.R.试验)；③伏一普试验(V．P．试验)；④靛基质(吲哚)试验；⑤硫化氢试验；⑥明胶液化试验；⑦柠檬酸盐利用试验；⑧淀粉水解试验。（3）主要仪器及耗材主要仪器：恒温培养箱、度冰箱。主要耗材：甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂，KOH溶液。9.实验项目九：风雨湖水细菌总数和大肠菌群的测定（1）实验目的了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义;学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法;学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。（2）实验内容①培养基、试剂的配制与灭菌；②样品处理；③接种与培养；细菌菌落计数；④大肠菌群测定。（3）主要仪器及耗材主要仪器：显微镜。主要耗材：风雨湖水、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、乳糖蛋白胨培养基、伊红美蓝培养基、无菌生理盐水。七、实验教材及主要参考书1.实验教材余佶.微生物学实验指导书.吉首大学食品教研室,2008.2.主要参考书[1]刘约权,李贵深.实验化学[M].北京:高等教育额出版社,2005.[2]北京师范大学无机化学教研室等编.无机化学实验(第三版)[M].北京:高等教育出版社,2001.[3]郑春生,杨南,李梅等.基础化学实验,无机及化学分析实验部分[M].天津:南开大学出版社,2001.[4]华东理工大学无机教研组.无机化学实验[M].北京:高教出版社,2007.[5]徐家宁,门瑞芝,张寒琪.基础化学实验(上册),无机化学和化学分析实验[M].北京:吉首大学化学化工学院实验（实践）课程教学大纲食品科学与工程专业38高等教育出版社,2006.七、主体仪器设备、软件及所需耗材1.实验所需仪器设备（软件）清单序号仪器（软件）名称型号数量用途备注1显微镜BA21015观察2生化培养箱EX1804生物培养3高压灭菌锅T1502消毒灭菌4超净工作台X2002接种5水浴锅XGF-312培养基制备6电子分析天平MTY094称重7血球计数板20计数8显微测微尺20细胞测量2.实验所需耗材清单序号耗材名称规格数量用途备注1牛肉膏分析纯（500g/瓶）5培养基配制2蛋白胨分析纯（500g/瓶）5培养基配制3琼脂粉分析纯（500g/瓶）5培养基配制4酵母浸膏分析纯（500g/瓶）5培养基配制5结晶紫5g/瓶2染色剂配制6二甲苯分析纯（500mL/瓶）2显微镜镜头清洁7香柏油5mL/瓶20显微镜使用8擦镜纸本20显微镜使用9吸水纸盒15显微镜使用10可溶性淀粉分析纯（500g/瓶）1培养基配置11葡萄糖分析纯（500g/瓶）1培养基配置12链霉素2g/瓶2培养基配置吉首大学化学化工学院实验（实践）课程教学大纲食品科学与工程专业39大纲执笔人：余佶大纲审核人：顾仁勇、李佑稷13硝酸钾分析纯（500g/瓶）1培养基配置14磷酸二氢钾分析纯（500g/瓶）1培养基配置15硫酸镁分析纯（500g/瓶）1培养基配置16葡萄糖分析纯（500g/瓶）1培养基配置17硫酸亚铁分析纯（500g/瓶）1培养基配置18革兰氏染色液500mL/瓶6革兰氏染色19载玻片盒20显微观察20吕氏碱性美蓝染色液500mL/瓶2简单染色21乳酸石炭酸棉蓝染液500mL/瓶2简单染色22棉花Kg10无菌包扎23纱布包30无菌包扎24液体石蜡500mL/瓶4菌种保藏26甘油500mL/瓶4菌种保藏27五氧化二磷分析纯（500g/瓶）1培养基制作28酒精Kg50消毒