过氧化氢酶测试

过氧化氢酶测试什么是过氧化氢酶？过氧化氢酶是生活在充满氧气的环境中的微生物产生的一种酶，可以保护自己免受过氧化氢（H2O2）的氧化损伤。过氧化氢是利用氧气的微生物中细胞呼吸的副产物。过氧化氢酶将过氧化氢水解成无毒的水和氧气。图1：过氧化氢酶催化的反应。过氧化氢酶阳性的微生物包括专性需氧菌和兼性厌氧菌。他们具有使用氧作为最终电子受体的能力。仅发酵且不使用氧气作为最终电子受体的专性厌氧菌或兼性厌氧菌是过氧化氢酶阴性的。过氧化氢酶测试的目的进行过氧化氢酶测试以确定微生物中过氧化氢酶的存在。该测试可以帮助识别和区分不同的微生物。更具体地说，该测试用于：从链球菌和肠球菌（过氧化氢酶阴性）中区分出形态相似的革兰氏阳性球菌-葡萄球菌（过氧化氢酶阳性）区分革兰氏阳性孢子形成杆菌–芽孢杆菌属物种（过氧化氢酶阳性）的耐气梭菌（过氧化氢酶阴性）。区分需氧菌（过氧化氢酶阳性）和专性厌氧菌（过氧化氢酶阴性）鉴定和区分肠杆菌科细菌使用半定量过氧化氢酶测试鉴定结核分枝杆菌确定细菌的毒力过氧化氢酶测试原理过氧化氢酶将过氧化氢水解成水和氧气，这可以通过立即形成气泡（起泡）来证明。当接种物与过氧化氢接触时发生氧气鼓泡时，微生物菌落中就会出现过氧化氢酶。当暴露于过氧化氢时没有气泡产生或气泡产生较弱时，则明显没有过氧化氢酶。（4）过氧化氢酶测试程序过氧化氢酶测试有多种变体。这里讨论的方法是滑动方法，管方法和管（倾斜）方法。其他方法，例如用于鉴定结核分枝杆菌的半定量过氧化氢酶测试，用于区分分枝杆菌种类的热稳定过氧化氢酶测试，毛细管法和盖玻片法，在此不作详细介绍。（5）滑动法/下降法使用无菌接种环或无菌木棍，取出少量18至24小时的微生物菌落，并将其放在干净，干燥的玻璃载玻片上。避免捡起任何琼脂，尤其是使用含有红细胞的琼脂时。红细胞含有过氧化氢酶，会产生假阳性结果。使用滴管，向显微镜载玻片上的细菌菌落中加入一滴3％的过氧化氢。立即观察气泡的形成。将幻灯片放在深色背景上便于观察。管法向试管中加入4至5滴3％的过氧化氢。使用木制涂药棒，取少量18至24小时的微生物菌落，并将其放入试管中。避免捡起任何琼脂，尤其是使用含有红细胞的琼脂时。立即观察木制涂药棒末端是否有气泡形成。将试管放在深色背景上便于观察。管（倾斜）法1.向在营养琼脂斜面上生长的18至24小时的微生物培养物中添加1mL的3％过氧化氢。2.立即观察气泡的形成。将试管放在深色背景上便于观察。过氧化氢浓度对于需氧量的常规测试，使用3％的过氧化氢。为了测试厌氧菌，使用了15％的过氧化氢。在这种情况下，过氧化氢酶测试用于区分梭菌和芽孢杆菌。为了使用Superoxol测试（类似于过氧化氢酶测试的测试）识别不同的奈瑟氏球菌，使用30％过氧化氢。过氧化氢酶测试的质量控制阳性对照：金黄色葡萄球菌阴性对照：粪肠球菌过氧化氢酶测试结果积极成果：立即大量泡沫形成例子：使用3％过氧化氢的常规测试：葡萄球菌，微球菌，李斯特菌，白喉棒状杆菌，洋葱伯克霍尔德菌，诺卡氏菌，肠杆菌科成员（柠檬酸杆菌，大肠杆菌，肠杆菌，克雷伯菌，志贺氏菌，耶尔森氏菌，变形杆菌，沙门氏菌，沙雷氏菌结核分枝杆菌，曲霉，隐球菌和马红球菌使用15％的过氧化氢：芽孢杆菌属物种使用30％的过氧化氢进行过氧苯酚试验：淋病奈瑟氏球菌阴性结果：无气泡或气泡很少例子：使用3％过氧化氢的常规测试：链球菌和肠球菌使用15％的过氧化氢：耐氧梭菌属使用30％过氧化氢的Superoxol测试：其他奈瑟氏球菌和卡他莫拉菌过氧化氢酶和细菌毒性感染细菌的宿主会产生吞噬细胞和嗜中性粒细胞，以对抗感染。这些细胞产生过氧化物来杀死细菌。NADPH氧化酶在吞噬细胞中产生超氧化物，该氧化物通过过氧化氢转化为其他氧化剂，例如次氯酸，以杀死病原体。产生过氧化氢酶的细菌能够使吞噬细胞和嗜中性粒细胞产生的过氧化物失活。因此，这些细菌可以抵抗吞噬细胞的杀伤作用，并在人类宿主中不受损害地存活。（1）过氧化氢酶测试的注意事项始终练习严格的无菌技术。如果可能，请在生物安全柜中进行过氧化氢酶测试。对于在血琼脂平板上生长的微生物，请注意不要拾取任何血琼脂。红细胞含有过氧化氢酶，会产生假阳性结果。微生物培养应在18至24小时之内。由于过氧化氢不稳定，因此必须新鲜制备。必须将其保存在深色瓶中并冷藏，以防止分解。不得使用铁丝接种环，因为它会与过氧化氢反应并产生假阳性结果。一些细菌产生过氧化物酶，一种将过氧化氢转化为水的酶。它会导致非常弱的阳性反应（20-30秒后会形成一些气泡）。这不应被视为真正的积极结果。