磁珠法-核酸提取新篇章

磁珠法—核酸提取的新篇章洛阳惠尔纳米科技狄光辉13683842418Q:625006192核酸提取方法进展核酸抽提是下游核酸检测、研究或产品开发的起点，所分离的核酸的质量和完整性直接影响研究或诊断结果，因此核酸抽提是分子生物学最关键的方法之一。成功的核酸分离纯化需要四个重要步骤：组织或细胞的破碎和裂解，核蛋白复合体的变性，核酸酶的灭活以及污染物的去除。传统核酸提取方法酚--氯仿抽提法碱抽提法CTAB抽提法纤维素膜层析法核酸固相抽提法市场上大多数商业核酸抽提试剂盒采用固相抽提法。相对于传统方法，固相抽提更快速和高效。它解决了许多液--液抽提存在的诸多问题，如分离不完全等。固相抽提方法的支持物主要有硅胶、玻璃颗粒、阴离子交换树脂、磁性颗粒。固相抽提包括细胞裂解、核酸吸附、漂洗和洗脱四个关键性的步骤。提取原理首先，基于碱裂解法使细胞膜破裂，以及组蛋白变性，释放核酸。然后，将经裂解液处理的样本转移到固相支持物上，在结合液的帮助下靶核酸被吸附到支持物上。蛋白质等其他化合物也可与支持物表面发生结合，但通过目的性洗涤过程可以被除掉。最后，以TE缓冲液或蒸馏水将纯净的靶核酸从支持物上释放下来。离心柱法提取DNA集液管纯化柱硅胶滤膜磁珠法提取DNA裂解使核酸游离出来结合加入磁珠，使核酸与其结合洗涤洗去残留杂质洗脱将核酸从磁珠中分离出到溶液纯化分离磁珠，得到高纯度核酸溶液比较（以全血为例）样本量洗脱液量OD260/280浓度离心柱法200-400μl100μl1.7-1.93-10μl磁珠法150-200μl100μl1.7-1.930-70μl离心柱法产品效果图磁珠法产品效果图离心柱法磁珠法适用范围新鲜血液或经抗凝剂（EDTA、柠檬酸）处理后的冷冻血液同前操作环境室温环境进行室温环境进行裂解原理碱裂解法改良的碱裂解法吸附核酸硅胶滤膜包被活性基团的磁珠离心需多次离心不需离心，依靠磁分离纯度较高，可直接用于PCR、酶切、Sourthen等下游实验较高，可直接用于PCR、酶切、Sourthen等下游实验产量较低较高自动化抽提不能进行自动化提取能够和核酸自动提取仪配合实现自动化提取用时50-60min30-40min价格较低略高主要厂家罗氏，百泰克，天根，生工Thermo，罗氏，ABI，gene-mag，惠尔核酸自动化抽提系统自动化抽提系统是可高通量地处理样品、有助于简化分离步骤的一种大型、复杂的仪器操作系统。自动化提取的优点有：减少人为工作时间，降低人力成本、增加工作者的安全性以及提高结果的可重复性和质量。核酸自动提取仪磁棒深孔板123456789101112ABCDEFGH裂解洗涤液Ⅰ洗涤液Ⅱ洗涤液Ⅱ磁珠洗脱裂解洗涤液Ⅰ洗涤液Ⅱ洗涤液Ⅱ磁珠洗脱磁珠法核酸提取的核心是生物磁珠，是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点。生物磁珠的介绍1硅基磁珠1、一种是针对含有常规量核酸的样本进行提取。如动植物、种子、细菌、质粒等；2、一种是针对含有痕量核酸的样本进行提取。如血清病毒游离、法医样本等。此产品主要应用于核酸提取2氨基磁珠经活化以后，可以偶联上抗体，作为免疫磁珠使用。免疫检测、免疫诊断3羧基磁珠经活化后，可以偶联上抗体，作为免疫磁珠使用。免疫检测、免疫诊断生物磁珠按功能集团分类及应用领域Fe3O4磁性微球硅基磁珠SiO2包被氨基/羧基包被氨基/羧基磁珠Fe3O4磁性微球硅基（硅羟基）氨基/羧基生物磁珠的制备方法植物、动物基因组DNA及细菌质粒提取试剂盒磁珠法DNA提取试剂盒的介绍应用：和中科院植物研究所合作，提取百年以上植物的DNA，用于后续的分型及特定位点的分析可用于海关、畜牧检验，检测进出口肉制品或者家禽是否携带病毒提取质粒，用作基因工程的常用载体临床疾病诊断：人类的很多疾病和基因密切相关，白血病、地中海贫血、肾衰竭等都能用基因技术进行分型检测，再寻找合适的供体进行移植治疗；叶酸代谢能力基因检测；DNA亲子鉴定；胎儿性别检测动物疾病检测：布鲁菌病（brucellosis，布病），也称波状热，是布鲁菌引起的急性或慢性传染病，人畜共患病。科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。应用行业：各级各类医疗机构、疾病预防控制中心、血站、大学及研究所、兽医站等。全血试剂盒病毒试剂盒能够从血清、血浆等多种病毒样品中（如HBV、HPV、HCV），高效提取和分离病毒总DNA或RNA，也可适用于组织细胞或分泌物样本中的病毒总核酸，提取产物可以直接用于下游应用，如荧光定量PCR或定量逆转录PCR等。1.生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应，可高效核酸提取，满足微量生物样本核酸提取的要求。2.不使用酚、氯仿、异戊醇等有毒试剂，安全无毒，绿色环保。3.生物磁珠能够通过仪器进行自动化操作，满足数据库建设对大批量样本提取的需要，减少人为因素4.用时少，操作简单，适用于大多数生物检材。5.全自动核酸提取最大限度地减少了操作人员与检测的接触，可有效保护实验操作人员。优点