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一、血球计数板1、血球计数板的结构血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的仪器,由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面刻有一个方格网。大方格中方格小方格方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,即1mm×1mm×0.1mm,其容积为0.1mm3;大方格的长和宽各为2mm,深度为0.1mm,即2mm×2mm×0.1mm,其容积为0.4mm3计数室通常也有两种规格16×25型:即大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格25×16型:即大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格。不管计数室是哪一种构造,其每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。2、计数16×25型:一般取四角的四个中方格(100个小方格)计数25×16型:一般计数四个角和中央的五个中方格(80个小方格)的细胞数。3、计算以1mm×1mm×0.1mm型为例计数室容积为0.1mm3,则每个小方格的容积为1/4000mm3。100个小方格细胞总数/100×400×10000×稀释倍数酵母细胞个数/1mL=80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数例1通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数,若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格,由400个小方格组成。若多次重复计数后,算得每个小方格中平均有5个酵母菌,则10mL该培养液中酵母菌总数有个。2×108例2检测员将1mL水样稀释10倍后,用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量;将盖玻片放在计数室上,用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室,并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16=400个小格组成,容纳液体的总体积为0.1mm3。现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e5个中格80个小格内共有蓝藻n个,则上述水样中约有蓝藻个/mL。5n×105培养液中酵母菌种群数量的变化一般步骤:(1)提出问题:培养液中酵母菌种群是怎样随时间变化的?(2)作出假设:。(3)讨论探究思路:问题(4)制定计划:(5)实施计划:(6)分析结果,得出结论:(7)表达和交流:(8)进一步探究:1怎样进行酵母菌的计数?对一支试管中的培养液(可定为10ml)中的酵母菌逐个计数是非常困难的,可以采用抽样检测的方法:先将盖玻片放在计数室上,用吸管吸取培养液,滴于盖玻片边缘,让培养液自行渗入,多余培养液用滤纸吸去,稍待片刻,待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部,将计数板放在载物台的中央,计数一个小方格内的酵母菌数量,再以此为根据,估算计算中的酵母菌总数,盖玻片下,培养液厚度为0.1mm,可算出10ml培养液中酵母菌总数的公式:4×107x(x为小方格内酵母菌数)2从试管中吸出培养液进行计数之前,建议你将试管轻轻振荡几次。这是为什么?3本探究需要设置对照吗?如果需要请讨论对照组应怎样设计和操作;如果不需要,请说明理由。4需要做重复实验吗?目的是使培养液中的酵母菌均匀分布,以保证估算的准确性,减少误差。不需要,本实验旨在探究培养液中酵母菌在一定条件下的种群数量变化,只要分组实验,获得平均数值即可。不用重复,只要分组实验获得平均值即可。重复是为了使结果更准确。本实验酵母菌种群数量足够多,样本足够大。其数据是80--100个小方格的平均值,足够精确。5、怎样记录结果?记录表怎样设计?6如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应采取怎样的措施?第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第1组第2组第3组------第n组平均值摇匀试管取1mL酵母菌培养液稀释几倍后,再用血球计数板计数只计数相邻两边及其顶角的酵母菌数。7对于压在小方格界线上的酵母菌,应当怎样计数?培养液中酵母菌种群数量的变化一般步骤:(1)提出问题:培养液中酵母菌种群是怎样随时间变化的?(2)作出假设:。(3)讨论探究思路:(4)制定计划:(5)实施计划:(6)分析结果,得出结论:(7)表达和交流:(8)进一步探究:探究培养液中酵母菌种群数量的变化单细胞真核生物生长周期短,增殖速度快还可以用酵母菌作为实验材料研究探究酵母菌的呼吸方式判断细胞的死活(探究膜的透性)种群数量的变化包括增长、波动、稳定、下降等“S”型曲线有一个K值,即环境容纳量。种群数量的增长也受到许多环境因素(如温度、培养液的pH、培养液的养分种类和浓度、代谢产物等)的影响。培养液中酵母菌种群数量与时间的变化关系实验原理:种群的数量变化有一定的规律。在理想条件下,种群呈“J”型增长,在有限的环境下,种群呈“S”型增长。酵母菌生长周期短,增殖速度快,在实验室条件下,用液体培养基培养酵母菌,可以观察酵母菌种群数量随时间变化的情况。血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。计数时,常采用样方法。对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻两边及顶角计数。酵母菌种群个体数量变化0200040006000800010000120001234567时间/d酵母菌数量/万个·mL-1酵母菌种群个体数量变化0200040006000800010000120001234567时间/d酵母菌数量/万个·mL-1第1天第4天第6天第7天死亡活菌数在计数前,还应有哪些步骤?需注意些什么?培养液配制灭菌接种培养无菌操作培养条件试管编号培养液/mL无菌水/mL酵母菌母液/mL温度(℃)A10—0.128B10—0.15C—100.128针对“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”,有人提出了新的问题,某同学按下表完成了有关实验。温度、营养物质对酵母菌生长的影响试管编号培养液/mL无菌水/mL酵母菌母液/mL温度(℃)A10—0.128B10—0.15C—100.128培养液中酵母菌种群数量的变化探究过程1.提出问题:2.作出假设:3.设计实验:4.进行实验:5.分析结果和表达交流:6.得出结论:培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的?酵母菌在开始一段时间呈“J”型增长,随着时间的推移,由于资源和空间有限,呈“S”型增长。连续培养5天,每天用显微镜和血球计数板计数出酵母菌种群密度各小组汇报实验结果,结合前4天的结果,画出酵母种群增长的曲线图并进行分析。酵母菌在开始一段时间呈“J”型增长,但随着时间的推移,由于资源和空间有限,将呈“S”型增长,并最终将全部死亡。3.设计实验:①将10mL无菌马铃薯培养液或肉汤培养液加入试管中;②将酵母菌接种入试管中的培养液中混合均匀;③将试管在28℃条件下连续培养5d;④每天取样计数酵母菌数量;⑤分析结果,得出结论。是否设置对照组和多组重复实验?为什么要连续培养?如何取样计数?记录表怎样设计?计数时有哪些注意事项?计数室计数室(中间大方格)的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为______mm3,合_________mL。1mm0.11×10-4血球计数板:一种专门计数较大单细胞微生物的仪器计数室计数室分为25中格(双线边)每一中格又分为16小格计数室是由___________个小格组成25×16=400如何计数?五点取样法样方法每mL培养液中酵母菌数量==A(平均每个中格酵母细胞数)×25×104×稀释倍数A1A2A5A3A4酵母菌数量变化记录表计数时有哪些注意事项?①从试管中吸出培养液进行计数之前,要将试管轻轻震荡几次;如果酵母菌浓度过大,应先稀释。②对于压在中格界线上的酵母菌,一般只取相邻两边及夹角计数;③对于已经出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算;已死亡的酵母菌不计数※。④每个样品一般计数三次,取其平均值。培养液中酵母菌种群数量的变化死亡
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