芳酸类非甾体抗炎药物分析

第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析基本要求一、掌握苯甲酸类、水杨酸类药物的结构特点，主要理化性质，鉴别试验和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他芳酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。分类与典型药物理化特征鉴别试验杂质检查含量测定练习与思考炎症：机体对感染的一种防御机制。•表现：红肿，疼痛等。抗炎药的分类：具甾体结构的糖皮质激素类(代表药：可的松)NSAIDs什么是芳酸？苯环羧基其他取代基分类：水杨酸类（邻羟基苯甲酸）邻氨基苯甲酸邻氨基苯乙酸芳基丙酸吲哚乙酸苯并噻嗪甲酸非甾体抗炎药：是一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基本结构。芳基取代羧酸结构第一节典型药物的结构与性质•一、典型药物与结构特点OOHOR'R(水杨酸类)OHOHO(水杨酸)(SalicylicAcid)OOHOCH3O(阿司匹林)(Aspirin)OOHOOOH(双水杨酯)(Salsalate)FFOHOHO(二氟尼柳)(Difunisal)OHNOCH3CH3甲芬那酸HMefenamicAcidOHNORH邻氨基苯甲酸类酸性酸性光谱特性NROOR'H邻氨基苯乙酸类NNaOOClClH双氯芬酸钠DiclofenacSodium酸性酸性光谱特性基团特性R'RCH3HOO芳基丙酸类CH3HOOCH3CH3布洛芬IbuprofenCH3HOOO酮洛芬KetoprofenCH3HOOOCH3萘普生Naproxen酸性NOOH3CHOCH3ClO吲哚美辛IndometacinNR'RCH3OHO吲哚乙酸类酸性光谱特性NSOHCH3NROOOH苯并噻嗪甲酸类NSOHCH3NOONOH吡罗昔康PiroxicamNSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康Meloxicam水解光谱特性NO2HNSCH3OOO尼美利舒NimesulideHONCH3OH对乙酰胺基酚Paracetamol其它非甾体类抗炎药水解光谱特性结构特点•可呈游离状态水杨酸、阿司匹林•具有羧基可呈盐或呈酯双氯芬酸钠•可呈酰胺结构吡罗昔康•具有苯环有不同的结构特征•有硫、氯、氟等元素，也可作为鉴别的依据（一）酸性具游离羧基显酸性，酸性受苯环、羧基和取代基的相互影响◆—CH3、—NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱◆—X、—NO2、—OH等吸电子取代基存在使酸性增强◆邻位取代酸性间位、对位取代酸性。例：水杨酸邻位游离羟基与羧基形成分子内氢健，酸性大为增强二、主要理化性质水杨酸阿司匹林苯甲酸（二）水解性具有酯键：阿司匹林、双水杨酯具有酰胺键:对乙酰氨基酚◆利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别◆利用酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，可用水解后剩余滴定法测定含量◆芳酸类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质（三）具有紫外和红外吸收（四）基团或元素特性紫堇色铁配位化合物～6pH43FeClOHAr第二节鉴别试验一、与三氯化铁反应具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物特点：（1）反应适宜的pH值为4~6，在强酸性溶液中配位化合物可分解。（2）反应极为灵敏，宜在稀溶液中进行。1、水杨酸反应药物试验方法结果水杨酸水溶液紫堇色阿司匹林加热水解后反应紫堇色双水杨酯氢氧化钠试液中煮沸紫色二氟尼柳溶于乙醇深紫色2、酚羟基反应对乙酰氨基酚水溶液蓝紫色吡罗昔康三氯甲烷溶液玫瑰红色美洛昔康三氯甲烷溶液淡紫红色二、缩合反应酮洛芬具有二苯甲酮结构，酸性条件下与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物三、重氮化—偶合反应临用新配分子结构中具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物NH2R注意：在鉴别时，首先要使溶液成酸性，然后才能滴加亚硝酸钠试液及碱性β一萘酚试剂。如：对乙酰氨基酚•对乙酰氨基酚具有伯氨基，在酸性条件下反应可生成对氨基酚，再与亚硝酸钠进行重氮化反应，之后再与碱性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。HONHCOCH3+HCl+H2OHONH2HCl+CH3COOHHONH2HCl+HNO2HON2Cl+2H2OHON2Cl+OH+NaOHOHN=NOH水解反应产生芳伯胺芳伯胺重氮化偶合反应红色偶氮化合物四、氧化反应硫酸溶液重铬酸钾吲哚美辛硫酸共存，与重铬酸钾共热，显紫色盐酸溶液中，与亚硝酸钠溶液反应显绿色，渐变黄色甲芬那酸显深蓝色，随即变为棕绿色五、水解反应阿司匹林醋酸臭气）水杨酸（白色醋酸钠水杨酸钠阿司匹林硫酸CONa32COOHOCOCH3Na2CO3△COONaOH+CH3COONa+CO2H2SO4H2SO4CH3COOHCOOHOH六、特征元素的反应1、氯元素的鉴别含氯药物经过前处理，显氯化物的鉴别反应2、硫元素的鉴别美洛昔康中含有二价硫，分解产生硫化氢，遇醋酸铅生成硫化氢黑色沉淀如丙磺舒高温加热分解，生成SO2气体，有臭味七.紫外吸收和红外吸收光谱法利用药物所具有的紫外和红外吸收特征，来进行鉴别。紫外：1、最大吸收波长法：如双氯芬酸钠的水溶液在276nm有最大吸收2、最大与最小吸收波长法：布洛芬3、吸光度法：甲芬那酸4、吸收度比值法：二氟尼柳红外：P205水杨酸的红外吸收图谱3700~2900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H3700~2900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱八、色谱法薄层色谱法高效液相法TLC:比移值HPLC：供试品保留时间，对照品保留时间第三节特殊杂质及其检查法一、阿司匹林及双水杨酯中游离水杨酸与有关物质的检查•（一）阿司匹林及双水杨酯的合成ONaCO2△NaCOONaH2SO4COOHOHCOOHOOOHOCOCH3COOHOH(CH3CO)2OH2SO4,70-75。C△，-CO2水杨酸双水杨酯乙酰水杨酸副产物生产工艺•（二）阿司匹林中水杨酸及有关物质的检查COOHOHCOOHOHHOOOCOOH[O][O]HOOHCOOHCOOHHOOOCOOHHOCOOHOO+COOHOOOCOOH-+HPLC法淡黄、红棕、深棕色其它有关物质OH(CH3CO)2OOCOCH3+OCOCH3COOHOCOCH3COO+OHCOOHOHCOO醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯HPLC法•二、甲芬那酸中2，3-二甲基苯胺的检查生产工艺邻氯苯甲酸2,3-二甲基苯胺缩合甲芬那酸ClCOOHH3CCH3NH2NHCOOHH3CCH3+CuHPLC/GC法三、二氟尼柳中有关物质的检查FFNH2FFCOCH3FFOCOCH3FFOHFFOHCOOHFF+Cu偶联乙酰化(CH3CO)2O,AlCl3氧化H2O2水解OH/H-+羧化CO2,CH3ONaTLCHPLC2,4-二氟苯胺2，4-二氟联苯4-（2’，4’-二氟苯基）苯乙酮4-（2’，4’-二氟苯基）苯酚乙酯4-（2’，4’-二氟苯基）苯酚二氟尼柳有关物质A和B的检查—自身对照法相同药物，不同浓度，相互比较，主点限量•四、萘普生的有关物质的检查MeOMeOCH3O酰化羧化MeOOHCH3COOH催化氢化MeOCH3COOH2-萘甲醚6-甲氧基-2-萘乙酮2-羟基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸萘普生色谱条件杂质限量•五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查HPLCClNO2NH2HOHONO2HONHCOCH3水解还原酰化ClNHCOCH3对硝基氯苯对硝基酚对氨基酚对氯苯乙酰胺第四节含量测定•原理：药物具-COOH；可用碱直接滴定•Aspirin,丙磺舒（Ch.P,BP,JP等），苯甲酸（Ch.P等）均采用本法。（一）直接滴定法1：1乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定过程水解；中性乙醇：对指示剂（酚酞？）而言为中性，可消除滴定误差；pKa3~6的药物溶于中性醇，可直接用NaOH滴定；pKa6~9的药物要用非水溶液滴定法；应用：多国药典用于阿司匹林、双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。（二）剩余量滴定法本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几乎不溶，在丙酮中微溶。所以CHP使用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。为什么氢氧化钠能溶解之？（1）原理：（2）方法：供试品1.5g0.5mol/LNaOH50.0ml煮沸10’放冷酚酞0.25mol/LH2SO4(V)空白·····························································(V0)定、过量剩余（三）水解后剩余量滴定法1.水解后剩余量滴定法（3）讨论：空白试验的目的（4）计算：T的计算含量％的计算10.5180.1645.04(/)2aTmMbmgmL碱液在受热时易吸收二氧化碳，生成碳酸盐，当用酸回滴定时，酸滴定液的消耗体积会减小，使测定结果偏高。含量%=(V0-V)×F×TW×100%T=0.5××12180.16=45.04(mg/ml)滴定度滴定度浓度待测物反应系数滴定液物反应系数滴定液物摩而质量空白反应体积样品测定消耗体积样品称重量I份NaOH供试品I份NaOH空白VVOVo-V相当于Asipirin消耗NaOH的ml数剩余％）－（含量％＝100WTFVV02、两步滴定法-改进方法用于：阿司匹林片/肠溶片的含量测定（1）原理：片剂中加稳定剂：酒石酸/枸橼酸抑制水解酸性有干扰，所以采用两步滴定法第一步中和Aspirin+NaOH钠盐+H2O水解产物+NaOHSA-Na+H2O酸性稳定剂+NaOH中性盐第二步水解与测定，即水解后剩余量滴定法（2）方法第一步：中和供试品片粉适量中性乙醇20ml酚酞NaOH（0.1mol/L)滴定至粉红色第二步：水解与测定中和后的供试液0.1mol/LNaOH40ml水浴15’0.05mol/LH2SO4（V）空白（V0）（3）讨论适用于阿司匹林片、肠溶片（4）计算片标示含药量片实测含药量标示量％＝//TFV-V0）实测药物质量＝（ww片数＝标示量%=WW×××××标示量100%(V0-V)FT空白消耗样测消耗校正因数滴定度片剂规格游离SA偏高时结果偏高不能完全排出干扰缺点优点操作简便水杨酸干扰少结果准确，避免游离SA及片剂中稳定直接滴定法水解后剩余滴定法两步滴定法（四）非水溶液滴定法（一）直接紫外分光光度法贝诺酯的测定：二、紫外分光光度法原料药：对照品比较法片剂：吸收系数法100%11EcmXXAC％标示量％＝标示量标示量％＝％100W100EWDA100WWDC1cm1XX（二）离子交换-UV法氯贝丁酯在226nm的波长处有最大吸收，但对氯酚等有关物质亦有吸收，干扰UV法的测定。根据氯贝丁酯为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸性解离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采用UV法测定。利用固定相酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对进行层析分离单纯靠选择流动相进行分离（三）柱分配色谱-紫外分光光度法USP(32)采用此法同时测定Aspirin胶囊中Aspirin和水杨酸玻璃棉供试品液：CHCl3-HCl洗脱液1：CHCl3①中/碱性杂质先洗脱硅藻土-NaHCO3洗脱液2：冰HAc-CHCl310ml洗脱液3：冰HAc-CHCl385ml②Aspirin后洗脱•①NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上•②用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质•③冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被CHCl3洗脱CRAR×阿司匹林(mg)=Ax供试品吸光度对照品吸光度对照品浓度例子ChP(2010)：阿司匹林肠溶胶囊、泡腾片、栓剂等含量测定采用此法。三、高效液相色谱法HPLC标示量%=CRAxARDWW×××××标示量100%对照品浓度供试品浓度对照品浓度阿司匹林栓剂的含量测定色谱条件：色谱柱C18；流动相为乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20:5:5:70);检测波长276nm系统适用性试验：n＞3000;Aspirin与水杨