SOP.AD.VE..质粒丢失率检测SOP

质粒丢失率检测SOP文件编号DocumentNo.SOP.AD.VE.02.08版本号VersionNo.01职务或岗位Title姓名Name签名Signature日期Date起草人/修订人DraftedBy分析工程师穆玲玲年月日审核人ReviewedBy分析主管王涛年月日审核人ReviewedByQA专员丁敏年月日审核人ReviewedBy——————年月日审核人ReviewedBy——————年月日审核人ReviewedBy——————年月日批准人ApprovedBy分析副总裁朱祥平年月日批准人ApprovedByQA副总监梅林年月日生效日期ValidSince年月日颁发部门Issuedby质量保证部复审日期ReviewDate年月日文件拷贝号CopyNo.文件分发至Distributedto质量保证部□分析开发部□生产部□行政办公室□财务部□技术转移部□药品注册部□工程部□人力资源部□IT部□文件名称DocumentName质粒丢失率检测SOP文件编号DocumentNo.SOP.AD.VE.02.08版本号VersionNo.01文件页数Pages2/9目录1.目的Purpose........................................................................................................................................................32.范围Scope...........................................................................................................................................................33.定义Definition.....................................................................................................................................................34.职责Responsibilities...........................................................................................................................................35.引用标准Referencetostandard...........................................................................................................................36.材料Materials.....................................................................................................................................................37.流程图FlowChart...............................................................................................................................................48.程序Procedure....................................................................................................................................................49.EHS.....................................................................................................................................................................410.派生记录Derivedrecords..................................................................................................................................411.相关文件Referencedocuments........................................................................................................................512.注意事项Notes.................................................................................................................................................513．变更记载Changerecord..................................................................................................................................5文件名称DocumentName质粒丢失率检测SOP文件编号DocumentNo.SOP.AD.VE.02.08版本号VersionNo.01文件页数Pages3/91.目的Purpose规程描述了质粒丢失率检测的标准操作方法及步骤，使其检测操作规范化、标准化。2.范围Scope适用于本公司重组人源化抗VEGF单克隆抗体（Fab）发酵时，诱导前与加热前的质粒丢失率检查。3.定义DefinitionE.coli：Escherichiacoli大肠杆菌CFU：CellFormingUnit细胞形成单位Kana：Kanamycin卡那霉素4.职责Responsibilities分析部负责维护本规程，分析主管，QA负责确保依据本规程实施。5.引用标准Referencetostandard《中国药典》2015年版三部附录ⅨG质粒丢失率检查法。6.材料Materials6.1仪器全自动高压灭菌锅，超净工作台，37℃培养箱。6.2试剂胰蛋白胨，酵母粉，NaCl，琼脂粉和卡那霉素溶液以及无菌的PBS。6.3器材蓝盖瓶，试管，空平皿，酒精灯，涂布器，移液器，枪头等。6.4培养基的配制6.4.1LB固体培养基6.4.1.1称取胰蛋白胨2.50g、酵母粉1.25g、NaCl2.50g、琼脂粉2.50g于蓝盖瓶中，加Milli-Q水至250mL，于高压蒸气灭菌锅内121℃灭菌20min。6.4.1.230℃左右上述培养基在超净工作台里分装到空平板中，每个分装大约15-20ml，凝固后放2~8℃冰箱中可以保存一个月。6.4.2含卡那霉素的LB固体培养基6.4.2.1将卡那霉素250μL(浓度为50mg/ml)加入冷却至30℃左右的LB固体培养基中，混匀，使其工作浓度为50μg/ml。文件名称DocumentName质粒丢失率检测SOP文件编号DocumentNo.SOP.AD.VE.02.08版本号VersionNo.01文件页数Pages4/96.4.2.230℃左右上述培养基在超净工作台里分装到空平板中，每个分装大约15-20ml，凝固后放2~8℃冰箱中可以保存一个月。注：配制体积可根据需求成比例增加。7.流程图FlowChart无。8.程序Procedure8.1诱导前的菌体质粒丢失率检测8.1.1用移液器吸取100μL诱导前的菌体，加入无菌PBS900μL，稀释至10-1，以此类推稀释至10-8；8.1.2用移液器分别吸取100μL的10-6、10-7、10-8稀释度的菌液，分别涂布到LB固体培养基平板上，置37℃培养箱中培养17小时；8.1.3挑取100个生长良好的单菌落，分别接种到LB固体培养基和含卡那霉素的LB固体培养基平板上，置37℃培养箱培养12-15小时；8.1.4计算质粒丢失率：=(LB固体培养基上的菌落数−含卡那霉素LB固体培养基上的菌落数)LB固体培养基上的菌落数x100%8.2加热前的菌体质粒丢失率检测8.2.1用移液器吸取100μL加热前的菌体，加入无菌PBS900μL，稀释至10-1，以此类推稀释至10-6；8.2.2用移液器分别吸取100μL的10-4、10-5、10-6稀释度的菌液，分别涂布到LB固体培养基平板上，置37℃培养箱中培养17小时；8.2.2挑取100个生长良好的单菌落，分别接种到LB培养基和含卡那霉素的培养基上，置37℃培养箱培养12-15小时；8.2.4计算质粒丢失率:=(LB固体培养基上的菌落数−含卡那霉素LB固体培养基上的菌落数)LB固体培养基上的菌落数x100%8.3判定标准无。8.4记录填写质粒丢失率检测记录。9.EHS无。10.派生记录Derivedrecords《质粒丢失率检测记录》文件名称DocumentName质粒丢失率检测SOP文件编号DocumentNo.SOP.AD.VE.02.08版本号VersionNo.01文件页数Pages5/911.相关文件Referencedocuments《高压灭菌锅使用SOP》《SW-CJ-1FD超净工作台使用SOP》12.注意事项Notes无。13．变更记载Changerecord版本号RevisionNo.变更号CRNo.描述Description生效日期ValidSince年月日年月日文件名称DocumentName质粒丢失率检测SOP文件编号DocumentNo.SOP.AD.VE.02.08版本号VersionNo.01文件页数Pages6/9连续很多天都是天亮之后才睡觉。别人问我，你晚上不睡觉都在干嘛。我马上回答，写稿啊，书稿还没交呢。但其实，我一个字也没写。而之所以熬夜，也不过是因为心里有牵挂的人和未完成的事吧。别人问你怎么还不睡，你说不困。其实熬夜很困，打个哈欠都会有眼泪流出来，只是心中一直有所期待，有所牵挂。就好像下一秒就会收到喜欢的人的消息，下一秒就能遇见一个惊喜。又或者，熬了太久却迟迟得不到自己想要的结果，渐渐的习惯了孤独。为什么会熬夜呢，大概是因为白天的自己太理智，太冷漠，好像什么都不在乎。所以有些情绪和思念，心酸和不舍，是要留到深夜独自慢慢消化的。白天的自己和晚上的自己完全不是同一个人啊，白天口口声声说一定早睡，晚上却从来做不到。像失忆一样拿命熬夜，白天开开心心无忧无虑，晚上却忧郁的不行。白天觉得我最牛逼，晚上却变成世界第一大傻逼。总觉得幸福的人是不用熬夜的，每天都有规律的生活，爱的人就躺在身边，现在过的是想要的生活，手里牵的是喜欢的人。昨天有人问我，为什么你晚上不睡觉。我想了很久，已经两三年没有在两点之前入睡过了。但我也说不清为什么，那个人突然给我发了一段话，我突然觉得，这是我熬夜的原因，也是很多人熬夜的原因。文件名称DocumentName质粒丢失率检测SOP文件编号DocumentNo.SOP.AD.VE.02.08版本号VersionNo.01文件页数Pages7/9你总是习惯熬夜，然后我也故