拟南芥总RNA提取流程图

实验一、拟南芥总RNA的提取植物组织匀浆处理:将50-100mg样品置于液氮中研磨成粉末，加入1mlTRIzol，使之充分混匀，室温下静置5min加入220µl氯仿，充分振荡混匀，静置3min（以下要格外小心，防止RNA降解）6℃，11,800g，离心15min；再次抽提，取650µl上清，加130µl氯仿。充分振荡，静置3min6℃，11,800g，离心15min离心期间可先加500µl的异戊醇，离心完后吸取上清（约500µl）上下颠倒几次，混匀，室温下静置10min6℃，11800g，离心10min弃上清，加入1ml75%的乙醇，充分洗涤沉淀6℃，7000g，离心5min弃上清。离心30s，将残余液体除去室温下干燥，加200µlDEPC，20µlNaAC，660µl无水乙醇，混匀后，-80静置1hr以上6℃，11800g，离心20min弃上清，离心30s，将残余液体除去晾干，加10µlDEPC水，冰上静置10min，弹匀溶解吸取0.5ul的RNA样品+1µl10xloardingbuffer+0.1µlEB+8.5µlDEPC水用1%的琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量所用试剂：1、Trizol配方：400ml200ml饱和酚152ml76ml硫氰酸按12.1792g6.0896g异硫氰酸胍37.8112g18.9056gNaAC(3M,PH5.0)13.36ml6.68ml甘油20ml10mlDEPC水2、氯仿3、异丙醇4、乙醇200mlNaAC(3M,PH5.0)配制：分子量82.03称取49.38gNaAC，加100多mlDEPC水,加冰醋酸调PH值（约20ml左右）边定容边条PH值，加水会使PH值下降。