您好,欢迎访问三七文档
当前位置:首页 > 行业资料 > 其它行业文档 > 临床微生物学概论知识分享
临床微生物学概论(第一部分)复旦大学附属华山医院抗生素研究所2标本采集细菌的分离培养和鉴定抗菌药物敏感性试验主要内容3正常菌群在正常人体体表与外界相通的腔道:口腔、鼻咽腔、肠道、泌尿生殖道存在的多种微生物。在机体免疫功能正常时对人体有益无害,属人类正常微生物群或环境中通常不致病的微生物,因以细菌和真菌为主,故称“正常菌群”。正常菌群的存在是保持人体健康的重要因素反映出在正常情况下,宿主、正常菌群和外界环境相互适应,保持平衡状态。5病原微生物病原微生物(pathogen):引起人类感染性疾病的微生物称为病原微生物或致病微生物。细菌:如痢疾志贺菌、肠杆菌科细菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌属等病毒:如单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、乙型肝炎病毒等真菌:如念珠菌属、曲霉属、毛霉属以及新型隐球菌等其他:如支原体、衣原体、螺旋体6临床常见的病原微生物革兰阳性菌:葡萄球菌、溶血性链球菌、肠球菌革兰阴性菌:需氧球菌:脑膜炎和淋病奈瑟球菌、卡他莫拉菌需氧杆菌:不动杆菌、假单胞菌、产碱杆菌、嗜血杆菌需氧和兼性厌氧:肠杆菌科细菌如大肠杆菌、肺杆、伤寒、志贺菌。厌氧细菌:脆弱拟杆菌、痤疮丙酸杆菌等7苛养菌定义:是一类生长需要特殊营养物质的细菌,与许多感染性疾病有关,其分离培养较为困难。营养要求高肺炎链球菌:培养基内要加入血或血清流感嗜血杆菌:X、V因子比较娇嫩、对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱。培养条件:5~10%CO2、35℃培养、24~48h呼吸道其他快生长细菌的覆盖使分离率非常低8厌氧菌是一群专性厌氧,必须在无氧环境下才能生长繁殖的细菌。根据能否形成芽胞,可将厌氧菌分成两大类。厌氧芽胞梭菌属无芽胞厌氧菌厌氧芽胞梭菌属:破伤风梭菌、产气荚膜杆菌、肉毒梭菌、艰难梭菌无芽胞厌氧菌:拟杆菌属、梭杆菌属、丙酸杆菌属、消化链球菌属等9标本的采集抗菌药使用前正确的部位正确的时间足够的数量无菌的容器特殊要求应在化验单上注明10主要的临床标本种类标本类型呼吸道标本深部咳出痰、支气管灌洗液咽拭子、鼻气管吸出液、气管吸出液尿液血液脑脊液伤口、脓液其它体液胸水、心包液、引流液、腹水、滑囊液11标本的处理涂片光镜检查诊断病原最基本和快速的方法:脑脊液直接形态学检查革兰染色或特殊染色分离培养和鉴定动物接种免疫学检查12痰标本主要病原菌:肺炎链球菌,克雷伯菌属,流感嗜血杆菌,金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌。非病原菌:酵母菌,草绿色链球菌,凝固酶阴性葡萄球菌病人需用水清洁口腔,深咳肺部痰,不要唾液#1•进行革兰染色以评价标本是否适于接种。•向临床医生尽快报告重要的革兰染色结果#2#3好:很少扁平上皮细胞奥普托欣纸片CO2中孵育48小时#4接种巧克力平皿,血平皿和麦康凯平皿#5拒绝:大量扁平上皮细胞肺炎克雷伯菌对重要病原菌进行鉴定&药敏试验金黄色葡萄球菌肺炎链球菌胆汁溶菌+奥普托欣+流感嗜血杆菌13革兰染色评估呼吸道标本是否合格?有代表性的好标本ü中性粒细胞多•白细胞25/低倍视野ü鳞状上皮细胞少ü<10/低倍视野14痰标本10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收19#1bab尿培养主要病原菌:大肠埃希菌,变形杆菌,克雷伯菌,其他革兰阴性杆菌,肠球菌,腐生葡萄球菌,纯的金葡球菌#2接种血平皿和麦康凯平皿#3空气孵育24小时收集中段尿a#4菌落计数0.001ml接种环尿培养的评估标准病人标本类型有意义的病原菌CFU/ml无症状清洁留取或留置管留取100,000有症状但不需卧床清洁留取1-2种病原菌。2种视为污染有症状,性生活活跃的女性清洁留取100纯培养的肠杆菌科菌男性清洁留取1000潜在病原菌所有从导尿管中直接留取100个所有种类的潜在病原菌所有外科或膀胱吸取任何数量(肉汤增菌,厌氧菌)所有有争议任何酵母菌若2种菌生长,对每种菌进行鉴定和药敏试验;若2种菌生长,报告“混合菌群”#5注意:•革兰阴性杆菌在血平皿和麦康凯平皿上均生长良好•革兰阳性球菌仅在血平皿上生长良好GNR#675,000cfu/ml50,000cfu/ml100,000cfu/mlGPC20脓,吸取物或组织标本主要病原菌:金葡菌,化脓链球菌,其他β溶血链球菌,绿脓,其他革兰阴性杆菌。非病原菌:凝固酶阴性葡萄球菌,少量的棒状革兰阳性杆菌•用酒精消毒伤口周围皮肤•最好的标本是吸取物和组织•最差的标本是拭子#1•接种血平皿和麦康凯平皿•如果是吸取物或组织,进行革兰染色,将重要结果通知临床医生#2#3铜绿假单胞菌中孵育48小时#4对1或2种重要病原菌进行鉴定&药敏试验金黄色葡萄球菌为主β溶血链球菌肺炎克雷伯菌混合的2种肠道革兰阴性杆菌:2种均报告;当检出3种或更多病原菌时,报告“混合菌丛”并描述性列出假单胞菌,金葡菌,变形杆菌,肠道革兰阴性杆菌等。#521血培养主要病原菌:沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金葡菌、肺链、流感以下菌应视为非病原菌(除非1次血培养分离出):芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌从两个独立的皮肤位点采血,每瓶采集10ml#135℃自动化仪器中孵育5天每天检查浊度并翻转培养瓶#2#318小时后传进行次代培养当培养瓶显示细菌生长时进行革兰染色和传代培养革兰阳性球菌接种血平皿+奥普托欣试验革兰阴性杆菌接种血平皿和麦康凯平皿革兰阴性双球菌或球杆菌接种巧克力平皿和血平皿CO2中孵育72h#5#4将重要的革兰染色结果尽快通知临床医生对重要病原菌进行鉴定和药敏试验#6例如:肺炎克雷伯菌例如:肺炎链球菌22细菌的分离培养标本类型5%脱纤维羊血平皿巧克力平皿中国兰平皿血培养瓶厌氧培养瓶呼吸道标本√√√尿液标本√(菌落计数)√血液标本√√其他无菌体腔标本√√23细菌的分离培养按实验室常规接种于培养基培养条件:35℃24-48小时或5%-10%CO235℃24-48小时厌氧培养28具有特殊性状的细菌葡萄球菌铜绿假单胞菌溶血性链球菌29具有特殊性状的细菌矛头状自溶现象芽胞30细菌的鉴定表型分类法以细菌的形态、结构、生理、生化和血清学反应等细菌的表型为主要依据分子生物学技术基因诊断依据分析DNA的碱基组成,基因片段的大小,与比较DNA的同源性关系,从而分析细菌DNA的亲缘关系。31流感嗜血杆菌的卫星现象32菌种鉴定—鉴定到种根据纯分细菌的形态、菌落特征,特征性的生化反应,选择合适的细菌鉴定系统。如手工的API条和半自动的ATB肠杆菌科细菌:API20E非发酵革兰阴性杆菌:API20NE葡萄球菌属:SlidexStaphPlus、APIStaph链球菌属:SlidexStreptoKit、APIStrep奈瑟菌属、嗜血杆菌属:APINH厌氧菌:API20A33菌种鉴定—鉴定到种自动细菌鉴定/药敏仪VITEK2CompactBDPhoenixSystemMicroScanBIOMICV3微生物鉴定系统BIOFOSUN微生物鉴定系统鉴定到种葡萄球菌?金黄色葡萄球菌!细菌鉴定和药敏试验快速化是未来的趋势张嵘教授课件内容张嵘教授课件内容张嵘教授课件内容CTX-M-14(+)生理盐水头孢噻肟CTX-M-14(-)质谱检测黏菌素耐药鲍曼不动杆菌ClinicalInfectiousDiseases2015;60(9):1295–303敏感株耐药株张嵘教授课件内容39抗菌药物敏感性试验40抗菌药物和药敏试验抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。前者是真菌、放线菌、细菌等的代谢产物,后者是经化学改造的半合成抗生素和化学合成药物。测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为药物敏感性试验(AntimicrobialSusceptibilityTesting,AST),简称药敏试验。41抗菌药物敏感性试验的意义无法推测敏感或耐药病人个体化治疗指南提供经验治疗的依据建立当地或国家处方政策监测流行病学趋势监测细菌耐药性测试新抗菌药物的抗菌活性检测新耐药机制的方法42抗菌药物敏感性试验分类定量方法(MIC,mg/L)琼脂稀释法肉汤稀释法E-test定性方法(SIR)纸片扩散法自动化仪器稀释法的定义以一定浓度的抗菌药与含有被试菌株的培养基进行一系列对倍数稀释,经培养后肉眼观察未见细菌生长管内所含的最低药物浓度为该药对该试验菌的最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)稀释法的最大优点是可以精确测得药物最低抑菌浓度,但需耗费较多材料、人力和时间。稀释法的分类稀释法药敏试验因介质不同可分为液体稀释法和琼脂稀释法。因容器不同分为试管稀释法和微量稀释法,或称常量法和微量。前者使用无菌的13mm×100mm试管,每一浓度抗菌药的量至少为1ml;后者使用8×12的U型底小孔的微量稀释板,小孔内装有0.1ml肉汤。琼脂稀释法又因在平皿中进行而称为平皿稀释法。微量稀释法的优点为试剂材料较节省,而且微量板中可预先配制好抗菌药和培养基,冷藏后一定时期内使用,较为方便。与试管稀释法相比,琼脂稀释法配合多点接种器使用,可同时进行大量菌株的药敏试验,实验结果重复性好,缺点是不能进行最低杀菌浓度(minimalbactericidalconcentration,MBC)的测定。与稀释法药敏试验有关的指标有哪些?MIC:最低抑菌浓度MBC:最低杀菌浓度MIC50:抑制50%受试菌株的MIC值MIC90:抑制90%受试菌株的MIC值MBC50:杀死50%受试菌株的MBC值MBC90:杀死90%受试菌株的MBC值药物浓度菌株数累积菌株数MIC50MIC900.125110.25230.514104226242882108琼脂稀释法琼脂选择法是将药物混匀于琼脂培养基中,配制含不同浓度药物平板,使用多点接种器接种细菌。经孵育后观察细菌生长情况,以抑制细菌生长的琼脂平板所含药物浓度为最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)试验菌的结果报告可用MIC(ug/ml)或用敏感(S)、中介(I)和耐药(R)报告。816多点接种仪试管稀释法试管稀释法0.060.1250.250.512481632MIC=1ug/ml微量稀释法0.060.1250.250.51248163264128ABCDEFGH微量稀释法微量稀释法结果阅读E-试验E试验原理E试条(E-test)是一条5mm×50mm的无孔试剂载体,一面固定有预先制备的,浓度呈连续指数增长稀释抗生素,另一面有读数和判别的刻度。将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上,经孵育过夜,围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈,圈边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度(MIC)结果判断和报告读取椭圆抑菌环与E试验试条的交界点刻度值E-试验结果阅读纸片扩散法58纸片扩散法原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。59纸片扩散法结果图60规范化的药敏试验方法-扩散法(纸片法)原理:将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板上,抗菌药物在琼脂内向四周扩散,因此敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到抑制,根据抑菌圈的大小即可推知该药物的最低抑菌浓度(MIC)。61ColoniesMayLoseResistancePlasmidOnecolonyMultiplecolonies如何正确挑取细菌?菌落?至少3个菌落,为什么?可能丢失耐药细菌(携带有耐药质粒的耐药菌株)….62正确的接种菌量扩散法:0.5麦氏浊度(1.5×108CFU/ml)SelectcoloniesPrepareinoculumsuspension63充分混匀标准浊度菌苔厚度的要求ClinMicrobiolInfect2014;2
本文标题:临床微生物学概论知识分享
链接地址:https://www.777doc.com/doc-7313870 .html