293-细胞转染套装

一、产品介绍用于293系列细胞的悬浮培养和瞬时转染。SMM293TIS培养基是一种化学成分确定，无血清的液体培养基。此培养基专门为支持悬浮类型培养条件下，293EBNA及相关的细胞（如293-F，293H等）的长期生长和瞬时转染而开发的。此培养基不含L-谷氨酰胺，使用时需加入4mM的L-谷氨酰胺。转染时不需更换培养基，操作方便快捷。Sinofection-293转染试剂是在Sinofection转染试剂基础上，经过改良，专门用于293EBNA及相关的细胞（如293-F，293H等）悬浮条件下的瞬时转染。毒性更低，转染效率更高，蛋白和抗体的产量也更高。SMS293-SUPI是一种无蛋白，无血清的液体加料液。二、产品组分组分含量应用SMM293TIS培养基1L专用于HEK293细胞的哺乳动物细胞培养基Sinofection-293转染试剂2mL专用于HEK293悬浮细胞的转染SMS293-SUPI加料液100mLSMM293TIS培养基加料液三、储存条件SMM293TIS培养基2-8℃避光储存12个月；Sinofection-293转染试剂建议在-20℃长期存放；SMS293-SUPI2-8℃避光储存12个月。四、产品特点高的蛋白或抗体产量操作简易，节省时间易于实现放大规模瞬时转染五、操作流程以100mL培养瓶（溶液体积占瓶体积的1/5）操作体系举例如下：用于瞬时转染的细胞要在复苏后至少3代后，且处于对数生长期，活率在90%以上。1.转染当天，取样计数细胞密度和活率。用37℃水浴锅里预热好的新鲜SMM293TIS培养基稀释处理细胞，密度到1×106cells/mL，每瓶细胞液体积为20mL，然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4小时后进行转染。2.转染液的配制：（1）用150mM的NaCl稀释10µgDNA，混匀后放置5min；（2）往DNA稀释液中加入50μL的Sinofection，最终转染液的总体积为1mL，混匀后放置10min。3.将转染液逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床，36.5℃，5%CO2，110-175rpm继续培养。4.转染第二天，旋松瓶口，关闭摇床的CO2控制。5.转染后48~72h后可检测基因表达。如用于重组蛋白、抗体生产，转染20-24h后按1-5%的293细胞转染套装货号：SF293T1量加入，可每天加入也可隔天加入，详见SMS293-SUPI加料液说明书。建议:因为每个实验室的操作略有不同，如果采用上述的实验流程得到的效果不佳，则可进行Sinofection（20μl，30μl，40μl，50μl，60μl）与10μgDNA的比例实验，找到最佳转染条件。图1转染过程附：细胞培养流程细胞复苏1.迅速取出冻存的细胞，在37℃水浴锅下使其溶解，整个过程最好控制在1min以内；2.轻轻的混匀细胞并全部移到50mL的离心管中，逐滴加入5~8mL在37℃水浴锅里预热好的新鲜SMM293TIS培养基；3.取样计数细胞密度和活率，稀释处理，确保细胞密度在0.3-0.4×106cells/ml；4.放入37℃，5%CO2，110-175rpm恒温摇床中培养。细胞扩增1.培养2-4天后，取样计数细胞的密度和活率。当细胞密度大于1×106cells/ml，细胞活率大于90%，则进行稀释传代处理，用37℃水浴锅里预热好的新鲜SMM293TIS培养基稀释处理细胞，保持细胞密度在0.3-0.4×106cells/ml。放入37℃，5%CO2，110-175rpm恒温摇床中培养；2.每3-4天传一次代。建议:每3个月或细胞培养30代后重新复苏低代次的细胞用于实验或其他用途。细胞冻存冻存细胞时要处在对数生长期同时细胞活率在90%以上，才可以进行冻存细胞。1.取样计数细胞，根据冻存管数计算所用细胞悬液体积和冻存液的体积，一般比例如下：92.5%的培养基混合物（46.25%的新鲜SMM293TIS培养基+46.25%条件SMM293TIS培养基）+7.5%DMSO，最终的细胞数为5×106cells/管.（此处以2mL冻存管，1~1.5mL细胞溶液体积为例）；2.准备相应体积的冻存培养基（46.25%的新鲜SMM293TIS培养基+7.5%DMSO），放在4℃备用。确保冻存培养基为当天配制；3.通过100g，5-10min离心收集细胞，留46.25%条件培养基，然后用事先准备好的放4℃的冻存培养基重悬细胞；4.混合均匀后将细胞分装到冻存管中，贴好标签；5.然后放到冻存盒中，放入-80℃冰箱(每分钟下降1℃)；6.-80℃冰箱中过夜放置（至少放置24h），然后转移细胞到液氮罐中，推荐储存条件在-125℃to-200℃。附图1：在SMM293TIS中，用Sinofection-293转染试剂，293Fcells悬浮条件，用pCMV-GFP转染，72h的荧光结果（10X）