常见病原性真菌鉴定

第十五章常见病原性真菌鉴定本章内容第一节浅部感染真菌1第二节深部感染真菌2学习目标：•掌握毛癣菌属、表皮癣菌属、小孢子癣菌属生物学特性和微生物学检验；白假丝酵母菌、隐球菌生物学特性和微生物学检验•熟悉熟悉深部感染真菌的临床意义•了解其他真菌的生物学特性和微生物学检验本章重点：★毛癣菌属、表皮癣菌属、小孢子癣菌属学特性和微生物学检验★白假丝酵母菌、隐球菌生物学特性和微生物学检验学习目标及重点常见病原性真菌鉴定浅部感染真菌是指主要侵犯人和动物皮肤、毛发及指（趾）甲，寄生或腐生于表皮、毛发和甲板的角质组织中的真菌。深部感染真菌是能侵害人体深部组织和内脏以及引起全身感染的真菌。浅部感染真菌包括皮肤癣真菌、表皮感染真菌和皮下组织感染真菌3类。第一节浅部感染真菌一、皮肤癣真菌皮肤真菌是寄生于皮肤角蛋白组织的真菌，又称皮肤丝状菌，分表皮癣菌属、毛癣菌属和小孢子癣菌属3个属，可侵犯皮肤、指（趾）甲和毛发，引起人类的体癣、股癣、手癣、足癣、甲癣、头癣等。体癣股癣手癣一、皮肤癣真菌头癣足癣甲癣第一节浅部感染真菌（一）生物学特性1.表皮癣菌属：有2种，对人致病的是絮状表皮癣菌。镜检可见大分生孢子、菌丝较细有分隔、厚膜孢子。絮状表皮癣菌菌落絮状表皮癣菌大分生孢子、厚膜孢子絮状表皮癣菌菌落第一节浅部感染真菌表皮癣菌属致病菌种：絮状表皮癣菌侵犯部位：皮肤、指（趾）甲，不侵犯毛发疾病：体癣、足癣、手癣、股癣和甲癣形态学特征：大分生孢子：侧生或顶生，棍棒状，壁薄小分生孢子：无单纯细菌丝、有隔脚癣灰指甲2.毛癣菌属：有20余种，对人致病的有13种，常见的致病菌有红色毛癣菌、紫色毛癣菌、须（石膏样）毛癣菌、断发毛癣菌和许兰毛（黄）癣菌红色毛癣菌菌落正面红色毛癣菌菌落背面紫色毛癣菌菌落第一节浅部感染真菌2.毛癣菌属：须毛癣菌菌落断发毛癣菌菌落许兰毛癣菌菌落第一节浅部感染真菌2.毛癣菌属：显微镜下可见大分生孢子、小分生孢子；菌丝形态多样红色毛癣菌小分生孢子紫色毛癣菌菌丝红色毛癣菌大分生孢子第一节浅部感染真菌2.毛癣菌属：断发毛癣菌小分生孢子及菌丝许兰毛癣菌菌丝须毛癣菌大、小分生孢子第一节浅部感染真菌毛癣菌属致病菌种:13种红色毛癣菌石膏样毛癣菌絮状表皮癣菌侵犯部位：皮肤、指（趾）甲，毛发疾病：体癣、足癣、手癣、股癣、甲癣、头癣特征：大分生孢子：细长、薄壁、棒状、两端钝圆小分生孢子：侧生、散在或葡萄状侵犯皮肤和指（趾）甲常见皮肤癣菌3．小孢子癣菌属：有15个种，对人致病的8种，常见的致病菌有铁锈色小孢子菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌等铁锈色小孢子菌菌落石膏样小孢子菌菌落犬小孢子菌菌落第一节浅部感染真菌3．小孢子癣菌属：镜下可见菌丝、厚壁梭形大分生孢子犬小孢子菌大分生孢子石膏样小孢子菌大分生孢子铁锈色小孢子菌菌丝第一节浅部感染真菌絮状表皮癣菌石膏样毛癣菌石膏样小孢子菌（二）微生物学检验1．标本采集采集皮屑、甲屑、病发2．检验方法♦直接镜检：查找菌丝和孢子♦分离培养与鉴定：观察菌落颜色和形态；毛发穿孔试验、脲酶试验和特殊营养需要试验第一节浅部感染真菌（三）临床意义皮肤癣真菌是临床上最常见的浅部感染真菌，有嗜角蛋白的特性，其侵犯部位限于角化的表皮、毛发和指（趾）甲，由于真菌在局部的增殖及其代谢产物的刺激产生病理反应，即皮肤癣症。一种癣菌可引起多种病变，同一部位的病变可由不同的癣菌引起我国以红色毛癣菌为最多。第一节浅部感染真菌二、表面感染真菌秕糠马拉色菌：侵犯皮肤角质层可引起皮肤表面出现黄褐色的花斑癣。镜下可见腊肠样有隔菌丝和圆形厚壁孢子花斑癣秕糠马拉色菌秕糠马拉色菌菌落第一节浅部感染真菌（一）微生物学检验1.标本的采集：透明胶带粘贴取材法2.显微镜检查：可见圆形或卵圆形孢子3.分离培养：好脂性（需加入橄榄油等）菌落：乳酪色酵母型（二）临床意义糠秕马拉色菌系存在于皮肤表面的嗜脂性酵母。感染原因：内在因素和外在因素。三、皮下组织感染真菌着色真菌和孢子丝菌是引起皮下组织感染的常见真菌（一）着色真菌着色真菌是一类在分类上接近，引起的临床症状也相似的真菌的总称。经破损皮肤而感染，引起病损的皮肤变黑，产生着色真菌病着色真菌病第一节浅部感染真菌（一）着色真菌1.微生物学检验（1）显微镜检查：厚壁孢子，分泌物镜检阳性率高（2）分离培养：菌落从灰黑色至黑色，菌丝有分隔，呈棕色，可见三种分生孢子：树枝型、剑顶型和花瓶型。（一）着色真菌菌落从灰黑色至黑色，有绒毛状或天鹅绒状气生菌丝疣状瓶霉菌落卡氏枝孢霉菌落链格孢霉菌落第一节浅部感染真菌（一）着色真菌镜检可见单个或成群的厚壁孢子，有横隔。疣状瓶霉卡氏枝孢霉链格孢霉第一节浅部感染真菌（一）着色真菌2.临床意义着色真菌经破损皮肤而感染，引起病损的皮肤变黑，产生着色真菌病。皮损初起的表现为红色丘疹，逐渐演变成斑块结节，最终形成菜花状或乳头瘤样而明显高出正常皮肤。损害常因外伤或继发感染后破溃形成溃疡。皮损之间可见少许脓性分泌物，常发出难闻的臭味。若取该分泌物直接涂片镜检，往往可以查见棕黄色圆形厚壁的真菌孢子（二）孢子丝菌孢子丝菌广泛分布于土壤、植物和木材上，腐生真菌，常因外伤感染，引起孢子丝病。主要的病原菌是申克孢子丝菌，主要通过微小伤口侵入皮肤，引起孢子丝菌性下疳一种双相性真菌孢子丝菌下疳第一节浅部感染真菌（二）申克孢子丝菌25℃培养，形成丝状菌落，镜下可见分枝菌丝及小分生孢子。申克孢子丝菌菌落申克孢子丝菌小分生孢子第一节浅部感染真菌（二）申克孢子丝菌37℃培养，形成酵母型菌落，镜下可见梭形孢子。申克孢子丝菌孢子申克孢子丝菌菌落第一节浅部感染真菌1.微生物学检验（1）显微镜检验（2）分离培养（3）抗体检测：滴度≥320有诊断意义（4）动物试验2.临床意义：孢子丝菌性下疳深部感染真菌是能侵害人体深部组织和内脏以及相起全身感染的真菌。条件致病性真菌：假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌致病性真菌：新型隐球菌、组织孢浆菌、球孢子菌、芽生菌、副球孢子菌。第二节深部感染真菌•假丝酵母菌属，俗称念珠菌。可侵犯皮肤、粘膜和内脏，表现为急性、亚急性或慢性炎症，大多为继发性感染。•假丝酵母菌种类很多，有150多个种，但能对人致病的有11种，以白假丝酵母菌，即白色念珠菌最常见，致病力也最强，其次为热带假丝酵母菌，其它还有克柔假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌和伪热带假丝酵母菌等。•白假丝酵母菌通常存在于人的口腔、上呼吸道、肠道及阴道粘膜。机体抵抗力下降或菌群失调是其侵入机体的主要原因。一、白假丝酵母菌（一）生物学特性在沙培养基上呈类酵母型菌落，菌体呈圆形或卵圆形，G+，可形成假菌丝、厚膜孢子。白假丝酵母菌菌落芽生孢子与假菌丝假菌丝与厚膜孢子第二节深部感染真菌（二）微生物学检验1．标本采集分泌物、痰、尿、粪、血或脑脊液等2．检验方法♦直接镜检♦分离培养♦鉴定试验：芽管形成试验、厚膜孢子形成试验、TTC试验、糖同化或发酵试验第二节深部感染真菌芽管形成试验方法：待测菌+0.5～1ml血清37℃水浴2～3小时镜检应用：白假丝酵母菌的鉴定结果：绝大部分白假丝酵母菌可形成典型的放大镜柄状芽管芽管第二节深部感染真菌厚膜孢子形成试验接种玉米粉吐温-80琼脂25℃孵育1～3天待测菌每天于显微镜下观察应用：白假丝酵母菌的鉴定方法：结果：白假丝酵母菌在72小时内可观察到丰富的假菌丝，假菌丝顶端见1～2个厚膜孢子厚膜孢子假菌丝第二节深部感染真菌糖同化或发酵试验（二）微生物学检验♦其他检测♦药敏试验芽管形成试验厚膜孢子形成试验显色培养基第二节深部感染真菌（三）临床意义可引起：①皮肤假丝酵母菌病；②黏膜假丝酵母菌病；③内脏假丝酵母菌病；④中枢神经系统白假丝酵母菌病。鹅口疮指间念珠菌病第二节深部感染真菌二、新型隐球菌隐球菌属包括17个种和8个变种，其中仅新型隐球菌及其变种具有致病性。（一）生物学特性又称溶组织酵母菌，墨汁负染色后，可见圆形或卵圆形菌体，外周有宽厚荚膜，形成酵母型菌落新型隐球菌菌落新型隐球菌荚膜第二节深部感染真菌（二）微生物学检验1．标本采集脑脊液、痰液、尿液、脓汁等。2．检验方法♦直接镜检♦分离培养♦鉴定试验：酚氧化酶试验、脲酶试验、糖同化及发酵试验。♦其他检测♦药敏试验第二节深部感染真菌（三）临床意义经呼吸道侵入人体，引起肺部感染。由肺经血行播散时可引起亚急性或慢性脑膜炎肺新型隐球菌感染第二节深部感染真菌（一）曲霉1.生物学特性在沙保培养基上形成丝状菌落，由于产生分生孢子而渐呈现不同颜色烟曲霉菌落黄曲霉菌落黑曲霉菌落构巢曲霉菌落土曲霉菌落第三节其他重要真菌第三节其他重要真菌（一）曲霉镜下可见菊花样的分生孢子头，因菌种不同而呈不同颜色烟曲霉黄曲霉黑曲霉构巢曲霉土曲霉第三节其他重要真菌（一）曲霉2.微生物学检验（1）直接镜检（2）分离培养（3）血清学试验：抗原、抗体、代谢产物检测3.临床意义可侵犯机体的许多部位，引起曲霉病。第三节其他重要真菌（一）曲霉曲霉可引起呼吸系统曲霉病、全身性曲霉病。肺曲霉瘤肺曲霉病痰涂片第三节其他重要真菌（二）毛霉在沙保培养基上形成丝状菌落，镜下可见孢子囊梗、孢子囊、孢子囊孢子。引起毛霉病毛霉菌落孢子囊与孢子囊孢子第二节深部感染真菌（二）毛霉毛霉病是由毛霉目的根霉属、毛霉属、梨头霉属或被孢霉属等多种真菌引起的一种发病急、发展快、病死率高的系统性真菌感染，少数为慢性感染。可通过呼吸道、消化道、皮肤或皮肤黏膜交界进入人体，好侵犯动脉血管，引起血栓、组织缺血、梗死和坏死。第二节深部感染真菌（三）荚膜组织胞浆菌是一种侵犯单核─吞噬细胞系统的双相型真菌。在沙保培养基上25℃培养形成丝状菌落，镜下可见特征性的齿轮状大分生孢子。荚膜组织胞浆菌菌落（25℃）荚膜组织胞浆菌大分生孢子第三节其他重要真菌（四）卡氏肺孢菌姬姆萨染色，可见孢囊内的8个孢子；亚甲胺蓝染色，孢囊囊壁呈深褐色或黑色，孢子不着色。是条件致病菌，引起卡氏肺孢菌性肺炎。Giemsa染色，卡氏肺孢菌包囊亚甲胺兰染色，卡氏肺孢菌包囊第三节其他重要真菌分布：自然界及人和多种哺乳动物肺内卡氏肺孢菌单细胞型，兼具原虫及酵母菌特点发育：滋养体（小滋养体，大滋养体）囊前期孢囊第三节其他重要真菌致病性机体免疫力下降时可引起肺孢子菌肺炎（pneumocystispneumonia,PCP）、中耳炎、肝炎、结肠炎等。微生物学检查镜检：革兰或美蓝染色，若发现滋养体或孢囊可确诊。血清学诊断：ELISA、IF、补体结合试验分子生物学诊断：PCR及DNA探针技术第三节其他重要真菌