第十八章--常见病毒鉴定

《微生物学检验》国家卫生和计划生育委员会规划教材微生物学检验《微生物学检验》国家卫生和计划生育委员会规划教材第十八章常见病毒鉴定黄静芳苏州卫生职业技术学院聂志妍上海健康职业技术学院王瑾沧州医学高等专科学校返回总目录本章内容第一节呼吸道病毒1第二节2第五节5肝炎病毒第六节6第四节4第三节3反转录病毒疱疹病毒肠道病毒朊粒及其他病毒学习目标及重点学习目标：•掌握流感病毒、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、肠道病毒的主要生物学特点,各病毒的传播途径、临床检验和防治原则•区别乙型肝炎病毒常见抗原抗体的组成及其临床意义•五种肝炎病毒常用鉴定方法•解释流感病毒变异和流行的关系•了解朊粒的生物学特征本章重点：★流感病毒、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、肠道病毒的生物学特性和致病性★常见病毒的检验方法一、流感病毒（一）生物学特性流行性感冒病毒（influenzavirus），简称流感病毒，是流感的病原体甲（A）:抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行乙（B）:对人类致病性较低丙（C）:只引起人类不明显的或轻微的上呼吸道感染，很少造成流行1.形态结构（1）形态第一节呼吸道病毒（2）结构核衣壳核酸核蛋白（NP）RNA多聚酶核衣壳包膜基质蛋白（MP）脂蛋白（LP）刺突血凝素（HA）神经氨酸酶（NA）第一节呼吸道病毒2.分型与变异分型：•根据NP和MP的不同流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。•甲型流感病毒根据其表面HA和NA抗原性的不同，又分为若干亚型。变异：最主要的是抗原性变异:HA和NA抗原性漂移（antigenicdrift）抗原性转变（antigenicshift）第一节呼吸道病毒3.培养特性：•在鸡胚羊膜腔和尿囊腔中增殖•红细胞吸附试验（hemoadsorptiontest）•易感动物为雪貂4.抵抗力：•抵抗力较弱•不耐热，56℃30分钟可灭活病毒•室温下很快丧失传染性第一节呼吸道病毒（二）微生物学检验1.标本：血清、咽漱液2.鉴定：•ELISA检查患者咽漱液中的抗原•用单克隆抗体经免疫酶法•PCR技术、核酸杂交等方法检出病毒或进行分型第一节呼吸道病毒（三）临床意义•传染源：患者、隐性感染者、被感染的动物•传播途径：飞沫，经呼吸道进入体内•致病机理：呼吸道上皮细胞感染增殖，病毒不入血，毒素样物质进入血液•症状：上呼吸道症状、发热、头痛、全身酸痛第一节呼吸道病毒二、风疹病毒（一）生物学特性1．形态结构：单股正链RNA病毒有包膜，核衣壳为二十面体对称一个血清型人是唯一宿主2．抵抗力：抵抗力较弱不耐热，56℃30分钟可灭活病毒对紫外线、乙醚、氯化铯、去氧胆酸等均敏感第一节呼吸道病毒（二）微生物学检验1．标本：鼻咽分泌物、皮疹液、尿液，脑脊液、血液、骨髓等2．鉴定病毒培养免疫学检测红细胞凝集抑制试验中和试验补体结合试验酶或荧光素标记单克隆抗体病毒核酸检测：PCR或核酸杂交技术第一节呼吸道病毒（三）临床意义•儿童是主要易感者•呼吸道传播•局部淋巴节增殖后经病毒血症散播全身•可垂直传播导致胎儿先天性感染第一节呼吸道病毒三、其他呼吸道病毒病毒名称形态结构所致疾病SARS冠状病毒球形、冠状，有包膜，RNA发热、干咳、胸闷、气短，急性呼吸窘迫综合症、休克、多器官功能障碍综合症等麻疹病毒球形、衣壳呈螺旋对称型，有包膜，不分节段的单股RNA发热、咳嗽、流涕、眼结膜充血、皮肤出现红色斑丘疹腮腺炎病毒球形，核心为单股RNA，衣壳呈螺旋对称，有包膜一侧或双侧腮腺肿大，伴有疼痛、发热返回章内容第一节呼吸道病毒三、其他呼吸道病毒病毒名称形态结构所致疾病腺病毒球形、双链DNA、核衣壳20面体对称、无包膜咽炎、扁桃体炎、肺炎、流行性眼结膜炎、急性出血性膀胱炎、胃肠炎等副流感病毒球形、单负链RNA、核衣壳螺旋对称、有包膜小儿气管炎、支气管炎、肺炎、普通感冒等呼吸道合胞病毒球形、单负链RNA、核衣壳螺旋对称、有包膜婴幼儿喘息性支气管炎、肺炎、成人普通感冒等鼻病毒球形、单正链RNA、核衣壳20面体对称、无包膜婴幼儿支气管炎、支气管肺炎、成人普通感冒等返回章内容第一节呼吸道病毒第二节肝炎病毒一、甲型肝炎病毒（一）生物学特性1.形态结构属小RNA病毒科,直径约为27nm，呈球形，二十面体立体对称甲型肝炎病毒形态模式图HAV电镜图第二节肝炎病毒2.抵抗力•耐受乙醚、氯仿等脂溶剂•耐酸：在pH3的酸性环境中稳定•不耐热：100℃5min可使之灭活•在海水、淡水、毛蚶、泥沙中存活数天至数月第二节肝炎病毒3.培养特性易感动物：黑猩猩，狨猴，鹰面猴，短尾猴允许性细胞：Vero、恒河猴胚肾细胞（FRHK-4）、人肝癌细胞株（PLC/PRF/S）等在培养细胞中生长缓慢，无CPE第二节肝炎病毒（二）微生物学检验HAV-IgM检测：早期、快速诊断最可靠的血清学指标HAV-IgG检测：主要用于了解既往感染史、疫苗免疫、效果评价或流行病学调查分离培养：原代肝细胞或恒河猴胚肾传代株细胞对HAV敏感，生长缓慢，不引起细胞裂解第二节肝炎病毒（三）临床意义传染源：主要为急性患者和隐性感染者传播途径：粪－口途径传播第二节肝炎病毒二、乙型肝炎病毒HBV流行久远、传播广泛，是全球性公共卫生问题全球3.5亿人携带HBV我国为高流行区感染率：60%HBsAg携带率：8%～10%慢性乙肝病人：1000万80%原发性肝癌与HBV慢性感染有关第二节肝炎病毒二、乙型肝炎病毒（一）生物学特性1．形态与结构①小球形颗粒:直径22nm；②管形颗粒:直径22nm，长度在50～700nm之间；③大球形颗粒:即Dane颗粒，直径42nm。第二节肝炎病毒第二节肝炎病毒2.抗原组成（1）表面抗原HBsAg•存在于三型颗粒中,是HBV感染的主要标志•pres1和preS2抗原的检作为病毒复制的指标•抗-preS抗体阳性常见于急性乙肝的恢复期，表示病毒正在或已经被清除抗-HBs•保护性抗体（中和抗体）•乙肝痊愈（临床）或免疫成功（接种疫苗）的标志第二节肝炎病毒（2）核心抗原HBcAg•仅存在于Dane颗粒中，刺激机体产生抗HBc（IgG、IgM）•可在感染的肝细胞核心部位的表面存在，表明病毒在复制•到血液中即被降解为HBeAg，一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc抗-HBc•对机体无保护作用•抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志•抗HBc-IgG：持续时间长•凡有过HBV感染者均可阳性，并可终身伴随第二节肝炎病毒（3）e抗原HBeAg•仅存在于Dane颗粒中，HBeAg是HBcAg的降解产物，游离存在于血液中，为病毒复制及强传染性的指标，产生抗－HBe，是预后良好的征象抗-HBe•随着HBeAg的消失而出现•抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低•保护作用第二节肝炎病毒（4）PreS1、PreS2与HBV-DNA成正比是病毒复制的指标抗-PreS1、抗-PreS2在恢复期的早期出现阳性提示病毒正在或已经被清除是预后良好的指标第二节肝炎病毒（二）微生物学检验•HBV抗原、抗体检测•血清HBV-DNA检测•血清DNA多聚酶检测第二节肝炎病毒（三）临床意义•传染源：患者或无症状HBsAg携带者•传播途径：密切接触、血液及体液、母婴传播•乙型肝炎的临床表现呈多样性，可由无症状携带至急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎等。病毒不仅存在于肝内，也存在于脾脏和血细胞等。一般认为，病毒在细胞内增殖对肝细胞的直接破坏作用不大，而机体对肝脏的免疫病理损害才是引起肝炎发生的主要原因第二节肝炎病毒三、丙型肝炎病毒（一）生物学特性有包膜的单正链RNA病毒。病毒体呈球形，直径为30～60nm（二）微生物学检验1.检测病毒抗体：用ELISA法检测抗-HCV2.检测病毒RNA：因HCV在血液中含量很少，常用敏感的RT-PCR法第二节肝炎病毒（三）临床意义1.主要通过血液/体液传播，其他如性传播、垂直传播2.是引起输血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因3.HCV感染极易转为慢性4.无症状HCV携带者和慢性丙肝者多见5.人群普遍易感，HCV感染的母亲所生婴儿感染率高6.诱发肝外损伤：肾小球肾炎7.免疫力不牢固第二节肝炎病毒四、丁型肝炎病毒（一）生物学特性•HDV是一种缺陷病毒由HBsAg构成其外壳HDV定位于肝细胞核内在血液中由HBsAg包被形成35-37nm颗粒单负链环状RNAHDV结构模式图第二节肝炎病毒（二）微生物学检验1.HDAg是HDV感染的直接标志2.抗-HD抗体检测抗HDV-IgM：是HDV早期感染标志抗HDV-IgG：是HDV既往感染的标志慢性HDV感染时，两种抗体可长期共存3.HDV-RNAHDVRNA是HDV存在及复制的一个有用指标第二节肝炎病毒（三）临床意义•只能感染HBsAg阳性的病人•共同感染(coinfection)：与HBV同时感染•重叠感染(superinfection)：在慢性乙型肝炎或HBsAg携带者的基础上再感染HDV第二节肝炎病毒五、戊型肝炎病毒（一）生物学特性属杯状病毒科，球形，无包膜，直径32～34nm，单正链RNA一个血清型（二）微生物学检验•检测HEV：电镜或免疫电镜观察•检测抗-HEV抗HEV-IgM：是近期内HEV感染的标志，有早期诊断价值抗HEV-IgG：HEV感染后可长期存在，可用于流行病学调查HEVRNA第二节肝炎病毒（三）临床意义主要通过粪-口途径传播，患者多见于20～40岁成年人，潜伏期为2～9w，多数患者于病后6w即好转或痊愈。少数患者可表现为重症肝炎，甚至可导致死亡。孕妇感染时，发病率高，病情严重，常发生流产或死产HEV致病机制尚不明了，可能是病毒本身作用及机体免疫应答造成肝细胞损伤病后有一定免疫力第二节肝炎病毒六、其他肝炎相关病毒1.庚型肝炎病毒属黄病毒科，为单股正链RNA。主要通过输血等非肠道途径传播，呈全球分布，我国主要在非甲至戊型肝炎病人、献血员、血透病人、器官移植患者及肝癌患者中存在2.TT型肝炎病毒是从一例日本输血后非甲至庚型肝炎病人（TT）血液中发现的一类新型DNA病毒，属细小DNA病毒科，通过血液和血制品传播，也可经消化道传播返回章内容第二节肝炎病毒第三节反转录病毒包括肿瘤病毒亚科、泡沫病毒亚科和慢病毒亚科人类嗜T细胞病毒人类免疫缺陷病毒（HIV）HIV-I型和HIV-II型获得性免疫缺陷综合症（AIDS）中国AIDS流行现状截至2014年2月28日，我国累计报告报告的HIV/AIDS587182例，死亡138956例。现存活艾滋病病毒感染者271624例，艾滋病病人176602例。我国艾滋病疫情总体上保持低流行态势，但依然呈上升趋势，幅度较以前有所减缓。据统计，自2005年至今，性传播比例持续攀升。2014年3月新发现的HIV/AIDS中，异性性传播4515例（69.8%），同性性传播1260例（19.5%），注射毒品传播430例（6.6%），母婴传播36例（0.6%），性接触加注射毒品传播13例（0.2%），既往输血及使用血制品传播11例（0.2%），既往采血浆传播5例（0.1%），传播途径不详203例（3.1%）。50岁以上群体和学生群体所占比例上升，这也是我国HIV传播的新特点知识拓展第三节反转录病毒一、人类免疫缺陷病毒（一）生物学特性1．形态与结构RNA，有包膜球形病毒。关键结构：gp120gp412．HIV复制（1）吸附----gp120+CD4（2）穿入和脱壳（3）生物合成（4）装配与释放第三节反转录病毒3．HIV的理化特性•对热敏感•56℃处理30分钟失去感染性，但不能完全灭活血清中的HIV,灭活方法是100℃20分钟•对化学因素敏感，在室温下70%酒精只需1分钟即不能检出活性•对紫外线或γ射线不敏感，因此紫外线或γ射线不能灭活HIV病毒第三节反转录病毒（二）微生物学检验1．标本采集采集血液、体液标本2．HIV检验包括HIV抗体、P24抗原、HIV病毒载量、CD4+T细胞计数等抗体检测是诊断HIV感染的唯一标准（1)HIV-1P24HIV-1P24------可用于“窗口期”及HIV-1抗体阳性的母亲所生婴儿